一種皂苷類化合物的分離方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于天然藥物提取的技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種皂苷類化合物的分離方法。
【背景技術(shù)】
[0002]筠篛薯科(拉丁學(xué)名:TACCACEAE)植物為多年生草本，具圓柱形或球形的根狀莖或塊莖。葉全部基生，有柄，直立，基部有鞘；葉片全緣或各式分裂。花兩性，輻射對(duì)稱，排成傘形花序，生在長(zhǎng)的花葶上；本科的模式屬:蒴篛薯屬Tacca J.R.Forster et J.G.A.Forster，蒴篛薯科有2屬，10余種，分布于熱帶地區(qū)。我國(guó)產(chǎn)2屬6種，分布于東南至西南部。筠篛薯科植物成分復(fù)雜，目前大部分成分已成功分離，發(fā)現(xiàn)筠篛薯科植物中富含皂苷類與箭根酮類物質(zhì)，該類物質(zhì)均具有良好的生物活性，其中箭根酮類被發(fā)現(xiàn)具有抗腫瘤作用，并且能夠調(diào)控腫瘤細(xì)胞的微管形成。皂苷類化合物被發(fā)現(xiàn)具有良好的抗腫瘤活性。皂苷類化合物(CAS =290809-72-2)為日本人Akihito Yokosuka首次分離(Akihito Yokosuka, Yoshihiro Mimaki, Yutaka Sashida.Spirostanol saponins fromthe rhizomes of Tacca chantrieri and their cytotoxic activity[J].Phytochemistry61 (2002): 73-78)，該分離方法成本較高產(chǎn)率較低，并非針對(duì)性的對(duì)該皂苷單體進(jìn)行提取分離，且僅適用于實(shí)驗(yàn)室研究。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的在于提供一種皂苷類化合物的分離方法，具體而言是對(duì)筠篛薯科植物所含有的一種皂苷類化合物(CAS =290809-72-2)建立分離方法，該方法所用的材料經(jīng)濟(jì)且可回收利用，為皂苷化合物的開發(fā)利用打下基礎(chǔ)。
[0004]為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案:
皂苷類化合物的分離方法，其特征在于，包括以下步驟:
Α、?|篛署科植物瞭干后進(jìn)行粉粹，然后按重量加入9_12倍量、體積濃度為50%_100%的乙醇，加熱回流提取3次，每次提取2-2.5h，過濾，合并提取液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收溶劑，得粗提取物；
B、按照粗提取物:純化水重量比為1:10的比例在粗提取物中加入純化水，得到懸浮混合物，然后，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收溶劑，得到石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位四個(gè)部位萃取物；
C、正丁醇部位過DlOl大孔吸附樹脂柱，樣品用體積濃度為10%-50%的乙醇溶解上樣，然后依次用體積濃度為50%-60%，70%-100%乙醇進(jìn)行洗脫，得到50%-60%組段與70%_100%組段；
D、70%-100%組段進(jìn)行硅膠柱色譜分離，填料用硅膠H，用300-400目柱層析硅膠拌樣，然后用二氯甲烷-甲醇溶液梯度洗脫，得到目標(biāo)單體混合物，單體混合物經(jīng)過SephadexLH-20凝膠柱色譜分離，氯仿-甲醇溶液洗脫分離進(jìn)一步純化；
E、重復(fù)步驟D，得到皂苷單體。
[0005]上述的步驟D中二氯甲烷-甲醇溶液的的配比為:二氯甲烷:甲醇的體積比為1:5-5:1，每10ml 二氯甲烷-甲醇混合溶劑加Iml水；氯仿-甲醇溶液的的配比為:氯仿:甲醇的體積比為1:3-3:1。
[0006]本發(fā)明一種皂苷類化合物的分離方法，分離得到的皂苷單體為無定形白色粉末，純度達(dá)90%以上。
[0007]本發(fā)明突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)和顯著的進(jìn)步是:
1、本發(fā)明首次建立了分離皂苷單體化合物的方法，該方法以筠篛薯科(拉丁學(xué)名:TACCACEAE)植物為原料，通過粉碎、乙醇提取、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取、DlOl大孔樹脂洗脫，硅膠柱與凝膠柱洗脫，最終得到純度達(dá)90%以上的皂苷單體。
[0008]2、本發(fā)明對(duì)筠篛薯科植物所含有的一種皂苷類化合物(CAS =290809-72-2)建立分離方法，該方法操作簡(jiǎn)單、分離效率高、純化度高、工藝穩(wěn)定、成本低、材料經(jīng)濟(jì)且可回收利用，為該皂苷化合物的開發(fā)利用打下基礎(chǔ)。
【具體實(shí)施方式】
[0009]實(shí)施例1
一種皂苷類化合物的分離方法，其特征在于，包括以下步驟:
A、||篛薯科植物裂果薯(拉丁學(xué)名:Taccaplantaginea (Hance) Drenth)瞭干后進(jìn)行粉粹，然后按重量加入9倍量、體積濃度為100%的乙醇，加熱回流提取3次，每次提取2h，過濾，合并提取液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收溶劑，得裂果薯粗提取物；
B、按照粗提取物:純化水重量比為1:10的比例在粗提取物中加入純化水，得到懸浮混合物，然后，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收溶劑，得到石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位四個(gè)部位萃取物；
C、正丁醇部位過DlOl大孔吸附樹脂柱，樣品用體積濃度為50%的乙醇溶解上樣，然后依次用體積濃度為50%-60%，70%-100%乙醇進(jìn)行洗脫，得到50%-60%組段與70%_100%組段；
D、70%-100%組段進(jìn)行硅膠柱色譜分離，填料用硅膠H，用300-400目柱層析硅膠拌樣，用二氯甲烷-甲醇梯度洗脫(每10ml 二氯甲烷-甲醇混合溶劑加Iml水，二氯甲烷:甲醇的體積比為1:5 )，得到目標(biāo)單體混合物；目標(biāo)單體混合物經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱色譜分離，用氯仿-甲醇(氯仿:甲醇的體積比為1:3)洗脫分離進(jìn)一步純化；
E、重復(fù)步驟D(再經(jīng)硅膠柱色譜分離、二氯甲烷-甲醇梯度洗脫、經(jīng)S印hadexLH-20凝膠柱色譜分離，氯仿-甲醇洗脫)得裂果薯皂苷單體，為無定形白色粉末，純度可達(dá)90%。
[0010]實(shí)施例2
一種皂苷類化合物的分離方法，其特征在于，包括以下步驟:
A、||篛薯科植物裂果薯(拉丁學(xué)名:Taccaplantaginea (Hance) Drenth)瞭干后進(jìn)行粉粹，然后按重量加入10倍量、體積濃度為80%的乙醇，加熱回流提取3次，每次提取2.2h，過濾，合并提取液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收溶劑，得箭根薯粗提取物；
B、按照粗提取物:純化水重量比為1:10的比例在粗提取物中加入純化水，得到懸浮混合物，然后，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收溶劑，得到石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位四個(gè)部位萃取物；
C、正