一種酶法水解蝸牛黏液制備生物活性肽的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及蛋白質(zhì)水解技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種酶法水解蝸牛黏液制備生物活性肽的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]蝸牛黏液是蝸牛的足腺分泌的粘滑液體，幫助蝸牛在爬行過(guò)程中保護(hù)腹足肌肉與地面直接摩擦?xí)r不受到損傷；也可以讓蝸牛在靜止時(shí)吸附在巖石表面，形成暫時(shí)的封閉結(jié)構(gòu)。蝸牛黏液密度較大，不易蒸散，進(jìn)而減緩體內(nèi)水分的散失，所以蝸牛黏液具有降低水分散失、濕潤(rùn)皮膚的作用。蝸牛黏液中含水量為95% _99%，蛋白質(zhì)含量為5.0-5.lmg/g，糖類含量0.3-0.6mg/g，是蝸牛黏液中最主要的活性物質(zhì)。此外，還含有大量活性物質(zhì)如糖蛋白、尿囊素、甘醇酸、骨膠原、軟骨素、維生素、小分子抗氧化類物質(zhì)等制作化妝品必不可少的材料。例如蛋白質(zhì)可以增加皮膚營(yíng)養(yǎng)，使肌膚更加細(xì)膩和光滑，還具有較強(qiáng)的抗氧化作用:其中的膠原蛋白，是皮膚重要結(jié)締組織成分，與彈力蛋白共同架構(gòu)完整皮膚，具有保持水分的功效；彈力蛋白可保持皮膚組織，當(dāng)年齡增長(zhǎng)時(shí)，皮膚失去彈性產(chǎn)生皺紋，適當(dāng)補(bǔ)充彈力蛋白可防治皺紋提早出現(xiàn)，并減少紫外線對(duì)皮膚的傷害。黏液中的尿囊素可有效修補(bǔ)傷痕，刺激細(xì)胞再生，是皮膚柔軟劑和抗氧化劑。另外蝸牛黏液也是一種天然抗生素，能夠殺死皮膚上的某些細(xì)菌，消除皮膚斑點(diǎn)和痤瘡。除了被應(yīng)用于化妝品外，蝸牛黏液在治愈燒傷皮膚和處理大的疤痕皮膚等方面具有顯著的功效。
[0003]然而，蝸牛黏液中的蛋白質(zhì)由于分子量大，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，粘度大，人體吸收率并不高。因此可將黏液中的蛋白質(zhì)水解為分子量較小的生物活性肽，加強(qiáng)皮膚對(duì)蝸牛黏液中蛋白質(zhì)的吸收，擴(kuò)大蝸牛黏液的應(yīng)用范圍。
[0004]生物活性肽是指對(duì)生物機(jī)體的生命活動(dòng)有益或具有生理功能的肽類化合物。與蛋白質(zhì)相比，活性肽具有良好的理化性能，如良好的溶解性和水合性、粘度低、生物利用率高，比氨基酸更易吸收，具有調(diào)節(jié)人體生理機(jī)能的功效，是原蛋白質(zhì)及其組成氨基酸所不具備的。因此被廣泛應(yīng)用于食品、保健品和化妝品中。
[0005]近年來(lái)，世界各國(guó)已經(jīng)從各種乳蛋白、大豆蛋白、玉米蛋白、魚貝類蛋白、膠原蛋白等食物蛋白中提取和分離得到多種生物活性肽。其中一些已作為保健食品和藥物實(shí)現(xiàn)了工業(yè)化生產(chǎn)，并取得巨大的經(jīng)濟(jì)效益?；钚噪念愂称贰⒈＝∑泛突瘖y品在日本、美國(guó)、歐洲已上市，其中日本在活性肽生產(chǎn)方面走在世界前列。而我國(guó)對(duì)活性肽的研究起步較晚，產(chǎn)品并不多見。因此，充分利用我國(guó)豐富的蛋白質(zhì)資源，開發(fā)具有良好生物活性的肽類產(chǎn)品，具有非常廣泛的市場(chǎng)和應(yīng)用前景。
[0006]目前對(duì)蝸牛產(chǎn)品的應(yīng)用開發(fā)多集中在食品和化妝品領(lǐng)域，研究比較多的是多糖、蝸牛酶、分泌物提取等方面，但未見對(duì)蝸牛黏液中的蛋白質(zhì)水解方面的研究。由蝸牛黏液中的蛋白質(zhì)水解制備的生物活性肽，與植物來(lái)源的產(chǎn)品相比，其氨基酸組成和比例與人體氨基酸更為相似。在生產(chǎn)工藝方面，傳統(tǒng)的方法多采用酸法水解動(dòng)植物蛋白，生產(chǎn)工藝較難控制，造成氨基酸一定程度的破壞；而且酸和高溫條件往往導(dǎo)致水解液中含有致癌物質(zhì)，尤其是氯丙醇含量超標(biāo)，大大限制了產(chǎn)品的使用。本發(fā)明采用酶法水解蝸牛黏液制備生物活性肽，具有反應(yīng)條件溫和、原料有效成分保存完整、產(chǎn)物安全、無(wú)有毒有害副產(chǎn)物生成、無(wú)氨基酸破壞或消旋現(xiàn)象、無(wú)環(huán)境污染等優(yōu)勢(shì)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明的目的在于，提供一種酶法水解蝸牛黏液制備生物活性肽的方法，充分開發(fā)利用我國(guó)豐富的優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)資源，通過(guò)體外蛋白酶水解技術(shù)釋放出具有生物活性的肽類產(chǎn)品，發(fā)揮原蛋白質(zhì)不具備的生理功能。
[0008]本發(fā)明為實(shí)現(xiàn)上述目的所采用的技術(shù)方案如下:
[0009]—種酶法水解蝸牛黏液制備生物活性肽的方法，該方法為:收集蝸牛黏液，調(diào)節(jié)蝸牛黏液的PH值為所用蛋白酶的最適pH值，加入蛋白酶，加熱攪拌，進(jìn)行酶解，酶解結(jié)束后進(jìn)行滅酶處理制得酶解液；將前述制得的酶解液進(jìn)行脫色、過(guò)濾，得到的濾液經(jīng)濃縮、干燥處理，制得所述生物活性肽產(chǎn)品。具體包括如下步驟:
[0010](I)黏液收集:將蝸牛足部黏液用藥匙刮入容器內(nèi)，用去離子水沖洗蝸牛足部殘留的黏液，合并液體。
[0011](2)酶解:調(diào)節(jié)蝸牛黏液的pH值為所用酶的最適pH值，加入酶，并加熱攪拌，進(jìn)行酶解。酶解結(jié)束后，水解液煮沸5-10min滅酶。
[0012](3)脫色:向酶解液中加入活性炭，攪拌脫色。
[0013](4)過(guò)濾:使用助濾劑硅藻土預(yù)敷過(guò)濾介質(zhì)，將脫色后的酶解液過(guò)濾得到無(wú)色、透明狀液體。
[0014](5)濃縮:過(guò)濾后的液體濃縮去除大部分水分。
[0015](6)干燥:濃縮后的粘稠狀液體經(jīng)干燥得到粉末狀生物活性肽產(chǎn)品。
[0016]步驟(I)所述蝸牛黏液優(yōu)選白玉蝸牛產(chǎn)生的黏液。
[0017]步驟(2)所述的酶為蛋白酶，可以是酸性蛋白酶、堿性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰酶、風(fēng)味蛋白酶、菠蘿蛋白酶等中的一種或幾種酶的復(fù)合酶。所述的酶的最適pH值為:酸性蛋白酶3.0-5.0，堿性蛋白酶8.0-11.5，中性蛋白酶6.5-7.5，木瓜蛋白酶5.0-7.0、胰蛋白酶7.0-8.5、風(fēng)味蛋白酶6.5-7.5、菠蘿蛋白酶6.0-8.0。
[0018]步驟(2)所述的酶的添加量為蝸牛黏液體積的0.1-3% (w/v)，即酶質(zhì)量與蝸牛粘液體積的百分比為0.1-3%，優(yōu)選為1-2%。
[0019]步驟(2)所述的酶解時(shí)間為0.5-4h，優(yōu)選2-3h ;酶解溫度為40_60°C，優(yōu)選50°C。
[0020]步驟(3)所述的活性炭的添加量為液體體積的0.5-2w/v%,優(yōu)選I %;脫色溫度為室溫_50°C，優(yōu)選室溫；脫色時(shí)間為0.5-3h，優(yōu)選lh。
[0021]步驟(4)所述的過(guò)濾可采用真空抽濾、板框過(guò)濾、離心等方式，過(guò)濾時(shí)使用硅藻土等助濾劑，娃藻土的使用量為液體體積的0.5~2w/v%,優(yōu)選I %。
[0022]步驟(5)所述的濃縮可采用但不局限于真空濃縮。
[0023]步驟(6)所述的干燥可采用冷凍干燥或噴霧干燥。
[0024]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果如下:
[0025](I)本發(fā)明采用酶水解法對(duì)蝸牛黏液進(jìn)行水解，蛋白水解度高，可達(dá)22.06%。所述蛋白水解度，指蛋白質(zhì)水解過(guò)程中肽鍵被裂解的程度或百分比，即該工藝中22.06%的肽鍵