用于轉(zhuǎn)染的脂質(zhì)納米粒子和相關(guān)方法
【專利說(shuō)明】用于轉(zhuǎn)染的脂質(zhì)納米粒子和相關(guān)方法
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【背景技術(shù)】
[0004] 在含水介質(zhì)中分散時(shí)，脂質(zhì)容易地形成脂質(zhì)體，如單層小泡和多層小泡。脂質(zhì)體已 經(jīng)成功地用于包封并向細(xì)胞遞送廣泛類型的化學(xué)物質(zhì)，包括核酸、蛋白質(zhì)和小分子藥物。
[0005] 從陽(yáng)離子脂質(zhì)和磷脂的組合物制備的陽(yáng)離子脂質(zhì)體容易地與陰離子大分子如DNA 和RNA形成聚集物。這些陽(yáng)離子脂質(zhì)體-核酸聚集物經(jīng)常如此工程化，從而復(fù)合物的凈電 荷為正，據(jù)信這促進(jìn)與陰離子性細(xì)胞表面相互作用，因而增強(qiáng)攝取包封的載貨和后續(xù)細(xì)胞 轉(zhuǎn)染。常用于體外轉(zhuǎn)染細(xì)胞的陽(yáng)離子脂質(zhì)組合物的例子是以1:1摩爾比與二油?；字?乙醇胺（DOPE)組合的N-[l-(2, 3-二油酰氧基）丙基]-N，N，N-三甲基氯化銨（D0TMA)。
[0006] 陽(yáng)離子脂質(zhì)體_核酸聚集物的大小和結(jié)構(gòu)取決于脂質(zhì)組成和制造方法。這些結(jié) 構(gòu)物可以具有數(shù)百納米至微米的大小并且通過(guò)電子顯微術(shù)可視化時(shí)，經(jīng)常具有不均一的形 態(tài)，包括經(jīng)典的"意大利粉和肉丸"構(gòu)象。
[0007]陽(yáng)離子脂質(zhì)體-核酸聚集物在原代細(xì)胞（即從活生物收獲的細(xì)胞）中具有有限 的有效性。認(rèn)為這種是過(guò)多陽(yáng)離子電荷所致毒性的結(jié)果。毒性外加大粒度還限制了陽(yáng)離子 脂質(zhì)體_核酸聚集物用于體內(nèi)轉(zhuǎn)染的用途。
[0008] 脂質(zhì)納米粒子（LNP)是臨床上最先進(jìn)的藥物遞送系統(tǒng)，7種基于LNP的藥物已經(jīng)收 到監(jiān)管批文。這些批準(zhǔn)的藥物含有小分子如抗癌藥物并且與"游離藥物"相比，顯示有效性 改進(jìn)和/或毒性降低。LNP載體技術(shù)還已經(jīng)用來(lái)遞送"遺傳"陰離子大分子如質(zhì)粒用于蛋白 質(zhì)表達(dá)或小干擾性RNA(siRNA)寡核苷酸（0GN)用于基因沉默。
[0009] 用來(lái)包封和遞送基因藥物的LNP技術(shù)和陽(yáng)離子脂質(zhì)的最新進(jìn)展已經(jīng)能夠在靜脈 內(nèi)（i.v.)注射之后產(chǎn)生這樣的siRNA-LNP，其中已經(jīng)顯示所述siRNA-LNP克服陽(yáng)離子脂質(zhì) 體-核酸聚集物的固有不穩(wěn)定性并在難以轉(zhuǎn)染的原代細(xì)胞和動(dòng)物模型（包括非人靈長(zhǎng)類） 中介導(dǎo)治療性相關(guān)靶基因的沉默。這些siRNA-LNP目前在幾項(xiàng)臨床試驗(yàn)中接收評(píng)價(jià)。
[0010] 已經(jīng)開(kāi)發(fā)多種方法以配制含有基因藥物的LNP系統(tǒng)。這些方法包括將預(yù)制LNP與 0GN在乙醇存在下混合，或?qū)⑷芙庥谝掖贾械闹|(zhì)與含有0GN的含水介質(zhì)混合，并產(chǎn)生直徑 100nm或更小及0GN包封效率為65-95 %的LNP。這兩種方法均依賴于陽(yáng)離子脂質(zhì)的存在以 實(shí)現(xiàn)0GN包封并依賴聚（乙二醇））（PEG)脂質(zhì)的存在以抑制聚集和龐大結(jié)構(gòu)物的形成。所 產(chǎn)生的LNP系統(tǒng)的特性，包括大小和0GN包封效率，對(duì)多種配制參數(shù)如離子強(qiáng)度、脂質(zhì)和乙 醇濃度、pH、0GN濃度和混合速率敏感。通常而言，使用當(dāng)前配制方法時(shí)，參數(shù)如混合時(shí)的相 對(duì)脂質(zhì)濃度和OGN濃度以及混合速率難以控制，在制品內(nèi)部和制品之間導(dǎo)致產(chǎn)生的LNP的 特征變異。
[0011] 微流體裝置以納升規(guī)?？焖倩旌狭黧w，同時(shí)精確控制溫度、停留時(shí)間和溶質(zhì)濃度。 受控和快速的微流體混合先前已經(jīng)應(yīng)用于無(wú)機(jī)納米粒子和微粒子的合成，并且可能在大規(guī) 模生產(chǎn)納米粒子優(yōu)于大規(guī)模系統(tǒng)。微流體雙相液滴技術(shù)已經(jīng)用來(lái)產(chǎn)生用于藥物遞送的單分 散體聚合性微粒子或用來(lái)產(chǎn)生用于包封細(xì)胞、蛋白質(zhì)或其他生物分子的大型小泡。已經(jīng)展 示使用流體動(dòng)力流速聚焦法（一項(xiàng)常見(jiàn)微流體技術(shù)）引起試劑快速混合，以產(chǎn)生大小受控 的單分散體脂質(zhì)體。還已經(jīng)證明這項(xiàng)技術(shù)可用于其中獲得更小更多單分散體粒子的聚合物 納米粒子生產(chǎn)，與大量生產(chǎn)方法相比，包封小分子更多。
[0012] 盡管許多產(chǎn)品可用于細(xì)胞轉(zhuǎn)染，但是需要在體外向難以轉(zhuǎn)染的原代細(xì)胞以及在體 內(nèi)向靶細(xì)胞有效遞送siRNA0GN和其他陰離子大分子的裝置和方法。本發(fā)明尋求滿足這種 需求并提供其他相關(guān)優(yōu)點(diǎn)以解決這樣的主要問(wèn)題，所述主要問(wèn)題妨礙了驗(yàn)證通過(guò)病態(tài)細(xì)胞 基因組測(cè)序鑒定的異?；蜃鳛闈撛诘乃幬锇谢蛏飿?biāo)記物靶。
[0013] 發(fā)明概述
[0014] 在一個(gè)方面，本發(fā)明提供一種包含脂質(zhì)和表面活性劑的轉(zhuǎn)染試劑組合物。
[0015] 在一個(gè)實(shí)施方案中，該轉(zhuǎn)染試劑包含（a) -種或多種陽(yáng)離子脂質(zhì)、（b) -種或多種 第二脂質(zhì)和（c) 一種或多種固醇；以及（d) -種或多種表面活性劑。
[0016] 在一個(gè)實(shí)施方案中，陽(yáng)離子脂質(zhì)是1，17-雙（2-辛基環(huán)丙基）十七碳-9-基_4_(二 甲氨基）丁酸酯。在某些實(shí)施方案中，粒子包含約30至約95摩爾％的陽(yáng)離子脂質(zhì)。
[0017] 在一個(gè)實(shí)施方案中，第二脂質(zhì)是1，2_二硬脂酰_sn_甘油_3_磷酸膽喊（DSPC)。
[0018] 在一個(gè)實(shí)施方案中，固醇是膽固醇。
[0019] 在一個(gè)實(shí)施方案中，表面活性劑是聚氧乙烯（20)油基醚。在又一個(gè)實(shí)施方案中， 表面活性劑是聚氧乙烯（40)硬脂酸酯。在某些實(shí)施方案中，粒子包含約0. 1至約20摩爾％ 的表面活性劑。
[0020] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，脂質(zhì)納米粒子包含（a) -種或多種陽(yáng)離子脂質(zhì)、（b) -種或 多種第二脂質(zhì)、（c) 一種或多種固醇；以及（d) -種或多種表面活性劑；如本文定義。在一 個(gè)實(shí)施方案中，陽(yáng)離子脂質(zhì)是1，17-雙（2-辛基環(huán)丙基）十七碳-9-基_4_(二甲氨基）丁 酸酯。在一個(gè)實(shí)施方案中，第二脂質(zhì)是1，2_二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸膽堿（DSPC)。在 一個(gè)實(shí)施方案中，固醇脂質(zhì)是膽固醇。在一個(gè)實(shí)施方案中，表面活性劑是聚氧乙烯（20)油 基醚。
[0021] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，脂質(zhì)納米粒子包含（a) -種或多種陽(yáng)離子脂質(zhì)、（b) -種或 多種第二脂質(zhì)、（c) 一種或多種固醇；以及（d) -種或多種表面活性劑；如本文定義。在一 個(gè)實(shí)施方案中，陽(yáng)離子脂質(zhì)是1，17-雙（2-辛基環(huán)丙基）十七碳-9-基_4_(二甲氨基）丁 酸酯。在一個(gè)實(shí)施方案中，第二脂質(zhì)是1，2_二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸膽堿（DSPC)。在 一個(gè)實(shí)施方案中，固醇脂質(zhì)是膽固醇。在一個(gè)實(shí)施方案中，表面活性劑是聚氧乙烯（40)硬 脂酉支醋。
[0022] 在其他方面，本發(fā)明提供一種包含轉(zhuǎn)染試劑組合物和陰離子大分子的脂質(zhì)納米粒 子，其中脂質(zhì)納米粒子包含基本上固態(tài)的核芯，如本文定義。
[0023] 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種包含轉(zhuǎn)染試劑組合物和核酸的脂質(zhì)納米粒 子。該核酸可以是DNA、RNA、鎖核酸、核酸類似物或能夠表達(dá)DNA或RNA的質(zhì)粒。
[0024] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種包含轉(zhuǎn)染試劑組合物和反義寡核苷酸雜交 探針的脂質(zhì)納米粒子。雜交探針可以是分子信標(biāo)。
[0025] 在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供一種脂質(zhì)納米粒子，其包含（a) -種或多種陽(yáng)離子脂 質(zhì)、（b) -種或多種第二脂質(zhì)、（c) 一種或多種固醇；和（d) -種或多種表面活性劑和一種或 多種如本文定義的核酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，陽(yáng)離子脂質(zhì)是1，17-雙（2-辛基環(huán)丙基）十七 碳-9-基-4-(二甲氨基）丁酸酯。在一個(gè)實(shí)施方案中，第二脂質(zhì)是1，2-二硬脂酰-sn-甘 油-3-磷酸膽堿（DSPC)。在一個(gè)實(shí)施方案中，固醇脂質(zhì)是膽固醇。在一個(gè)實(shí)施方案中，表面 活性劑是聚氧乙烯（20)油基醚。在一個(gè)實(shí)施方案中，核酸是siRNA。
[0026] 在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供一種脂質(zhì)納米粒子，其包含（a) -種或多種陽(yáng)離子脂 質(zhì)、（b) -種或多種第二脂質(zhì)、（c) 一種或多種固醇；和（d) -種或多種表面活性劑和一種或 多種如本文定義的核酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，陽(yáng)離子脂質(zhì)是1，17-雙（2-辛基環(huán)丙基）十七 碳-9-基-4-(二甲氨基）丁酸酯。在一個(gè)實(shí)施方案中，第二脂質(zhì)是1，2-二硬脂酰-sn-甘 油-3-磷酸膽堿（DSPC)。在一個(gè)實(shí)施方案中，固醇脂質(zhì)是膽固醇。在一個(gè)實(shí)施方案中，表面 活性劑是聚氧乙烯（40)硬脂酸酯。在一個(gè)實(shí)施方案中，核酸是siRNA。
[0027] 在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供一種脂質(zhì)納米粒子，其包含（a) -種或多種陽(yáng)離子脂 質(zhì)、（b) -種或多種第二脂質(zhì)、（c) 一種或多種固醇；和（d) -種或多種表面活性劑和一種或 多種如本文定義的核酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，陽(yáng)離子脂質(zhì)是1，17-雙（2-辛基環(huán)丙基）十七 碳-9-基-4-(二甲氨基）丁酸酯。在一個(gè)實(shí)施方案中，第二脂質(zhì)是1，2-二硬脂酰-sn-甘 油-3-磷酸膽堿（DSPC)。在一個(gè)實(shí)施方案中，固醇脂質(zhì)是膽固醇。在一個(gè)實(shí)施方案中，表面 活性劑是聚氧乙烯（20)油基醚。在一個(gè)實(shí)施方案中，核酸是質(zhì)粒DNA。
[0028] 在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供一種脂質(zhì)納米粒子，其包含（a) -種或多種陽(yáng)離子脂 質(zhì)、（b) -種或多種第二脂質(zhì)、（c) 一種或多種固醇；和（d) -種或多種表面活性劑和一種或 多種如本文定義的核酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，陽(yáng)離子脂質(zhì)是1，17-雙（2-辛基環(huán)丙基）十七 碳-9-基-4-(二甲氨基）丁酸酯。在一個(gè)實(shí)施方案中，第二脂質(zhì)是1，2-二硬脂酰-sn-甘 油-3-磷酸膽堿（DSPC)。在一個(gè)實(shí)施方案中，固醇脂質(zhì)是膽固醇。在一個(gè)實(shí)施方案中，表面 活性劑是聚氧乙烯（40)硬脂酸酯。在一個(gè)實(shí)施方案中，核酸是質(zhì)粒DNA。
[0029] 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種向受試者施用核酸的方法，所述方法包括施 用本發(fā)明的脂質(zhì)納米粒子至有需求的受試者。
[0030] 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種向細(xì)胞中引入核酸的方法，所述方法包括使 細(xì)胞與本發(fā)明的脂質(zhì)納米粒子接觸。
[0031] 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種調(diào)節(jié)靶多核苷酸或多肽表達(dá)的方法，所述方 法包括使細(xì)胞與本發(fā)明的脂質(zhì)納米粒子接觸，其中核酸能夠調(diào)節(jié)靶多核苷酸或多肽的表 達(dá)。
[0032] 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種治療受試者中以多肽過(guò)量表達(dá)為特征的疾病 或病癥的方法，所述方法包括向受試者施用本發(fā)明的脂質(zhì)納米粒子，其中核酸能夠沉默或 減少多肽的表達(dá)。
[0033] 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種治療受試者中以不存在多肽表達(dá)或多肽表達(dá) 不足為特征的疾病或病癥的方法，所述方法包括向受試者施用本發(fā)明的脂質(zhì)納米粒子，其 中核酸能夠表達(dá)多肽或增加多肽的表達(dá)。
[0034] 在其他方面中，本發(fā)明提供一種用于制造脂質(zhì)納米粒子的方法。
[0035] 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種產(chǎn)生含有核酸的脂質(zhì)納米粒子的方法，所述 方法包括：
[0036] (a)將包含處于第一溶劑中的核酸的第一流引入微流體裝置中；其中裝置具有適 應(yīng)于使得引入裝置中的一股或多股流流動(dòng)的第一區(qū)域和用于以微流體混合器混合一股或 多股流的內(nèi)容物的第二區(qū)域；
[0037] (b)將包含處于第二溶劑中的轉(zhuǎn)染試劑組合物的第二流引入微流體裝置中，其中 裝置具有第一區(qū)域，所述第一區(qū)域適應(yīng)于使得引入微流道中的一股或多股流流動(dòng)并指引它 們進(jìn)入用于混合一股或多股流的內(nèi)容物的第二區(qū)域，其中轉(zhuǎn)染試劑組合物包含陽(yáng)離子脂 質(zhì)，并且其中第一溶劑和第二溶劑不是相同的；
[0038] (c)使一股或多股第一流和一股或多股第二流從裝置的第一區(qū)域流入裝置的第二 區(qū)域；并且
[0039] (d)將一股或多股第一流和一股或多股第二流的內(nèi)容物在裝置的第二區(qū)域中混 合，以提供第三流，所述第三流包含具有包封核酸的脂質(zhì)納米粒子。
[0040] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種產(chǎn)生含有核酸的脂質(zhì)納米粒子的方法，所 述方法包括：
[0041] (a)將包含處于第一溶劑中的核酸的第一流引入流道中；其中裝置具有適應(yīng)于使 得引入流道中的一股或多股流流動(dòng)的第一區(qū)域和用于混合一股或多股流的內(nèi)容物的第二 區(qū)域；
[0042] (b)引入包含處于第二溶劑中的轉(zhuǎn)染試劑組合物的第二流；其中流道具有適應(yīng)于 使得引入該流道的一股或多股流流動(dòng)的第一區(qū)域和用于混合一股或多股流的內(nèi)容物的第 二區(qū)域；
[0043] (c)使得一股或多股第一流和一股或多股第二流從流道的第一區(qū)域流入流道的第 二區(qū)域，同時(shí)維持兩股流的物理分離，其中一股或多股第一流和一股或多股第二流不混合 直至抵達(dá)流道的第二區(qū)域處；并且
[0044] (d)將微流道的第二區(qū)域中流動(dòng)的一股或多股第一流和一股或多股第二流的內(nèi)容 物混合，以提供第三流，所述第三流包含具有包封核酸的脂質(zhì)納米粒子。
[0045] 在上文方法的某些實(shí)施方案中，混合一股或多股第一流和一股或多股第二流的內(nèi) 容物包括變動(dòng)一股或多股第一流和一股或多股第二流的濃度或相對(duì)混合速率。
[0046] 在上文方法的某些實(shí)施方案中，該方法還包括用水質(zhì)緩沖液稀釋第三流。在某些 實(shí)施方案中，稀釋第三流包括使第三流和水質(zhì)緩沖液流入第二混合結(jié)構(gòu)。
[0047] 在上文方法的某些實(shí)施方案中，該方法還包括透析包含具有包封核酸的脂質(zhì)納米 粒子的水質(zhì)緩沖液以減少第二溶劑的量。
[0048] 在上文方法的某些實(shí)施方案中，第一溶劑是水質(zhì)緩沖液。在上文方法的某些實(shí)施 方案中，第二溶劑是含水醇。
[0049] 在上文方法的某些實(shí)施方案中，混合第一流和第二流的內(nèi)容物包括混沌對(duì)流。在 上文方法的某些實(shí)施方案中，混合第一流和第二流的內(nèi)容物包括用微量混合器混合。
[0050] 在上文方法的某些實(shí)施方案中，核酸包封效率是約80%至約100%。
[0051] 在上文方法的某些實(shí)施方案中，通過(guò)屏障在第一區(qū)域中防止一股或多股第一流和 一股或多股第二流的混合。在某些實(shí)施方案中，屏障是流道壁、鞘層流體或同心管路。
[0052] 在本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供用于產(chǎn)生脂質(zhì)納米粒子的裝置。在一個(gè)實(shí)施方案中， 本發(fā)明提供了用于產(chǎn)生包封核酸的脂質(zhì)納米粒子的裝置，所述裝置包含：
[0053] (a)用于接收第一溶液的第一入口，所述第一溶液包含處于第一溶劑中的核酸；
[0054] (b)與第一入口處于流體連通以提供第一流的第一入口微流道，所述第一流包含 處于第一溶劑中的核酸；
[0055] (c)用于接收第二溶液的第二入口，所述第二溶液包含處于第二溶劑中的轉(zhuǎn)染試 劑組合物；
[0056] (d)與第二入口處于流體連通以提供第二流的第二入口微流道，所述第二流包含 處于第二溶劑中的轉(zhuǎn)染試劑組合物；和
[0057] (e)用于接收第一流和第二流的第三微流道，其中第三微流道具有適應(yīng)于使得引 入微流道中的第一流和第二流流動(dòng)的第一區(qū)域和適應(yīng)于混合第一流和第二流的內(nèi)容物以 提供第三流的第二區(qū)域，所述第三流包含具有包封核酸的脂質(zhì)納米粒子。
[0058] 在一個(gè)實(shí)施方案中，該裝置還包含用于稀釋第三流以提供稀釋流的手段，所述稀 釋流包含具有包封核酸的穩(wěn)定化脂質(zhì)納米粒子。在某些實(shí)施方案中，用于稀釋第三流的手 段包括微量混合器。
[0059] 在一個(gè)實(shí)施方案中，微流道具有約20至約300ym的流體動(dòng)力直徑。
[0060] 在一個(gè)實(shí)施方案中，微流道的第二區(qū)域包含半浮雕結(jié)構(gòu)。在一個(gè)實(shí)施方案中，微流 道的第二區(qū)域具有主流動(dòng)方向和一個(gè)或多個(gè)具有限定于其中的至少一條凹線（groove)或 凸起部分的表面，所述凹線或凸起部分具有與主方向形成某個(gè)角度的取向。在一個(gè)實(shí)施方 案中，第二區(qū)域包括微量混合器。
[0061] 在某些實(shí)施方案中，該裝置還包括用于變動(dòng)第一流和第二流的流速的手段。
[0062] 在某些實(shí)施方案中，該裝置還包括在第一區(qū)域有效將一股或多股第一流與一股或 多股第二流物理分隔的屏障。
[0063]附圖簡(jiǎn)述
[0064] 如同通過(guò)參考以下詳細(xì)描述而本發(fā)明的前述方面和許多隨之而來(lái)的優(yōu)點(diǎn)變得更 好理解，當(dāng)結(jié)合附圖理解時(shí)，本發(fā)明的前述方面和許多隨之而來(lái)的優(yōu)點(diǎn)將變更容易領(lǐng)會(huì)。[0065]圖1使用因子VII(FVII)小鼠模型來(lái)顯示用不同表面活性劑（聚氧乙烯（40)硬 脂酸酯（MyrjS40)、聚氧乙烯（20)油基醚（Brij98)制備的siRNA-LNP的體內(nèi)沉默活性。 Brij35P-聚氧乙烯（23)月桂基醚（Brij35P))。使用微流體方法制造siRNA-LNP。將活 性作為隨siRNA-LNP制劑中所用表面活性劑的摩爾％ (mol% )變化而變化的殘余FVII蛋 白質(zhì)水平％計(jì)量。全部LNP均由以下脂質(zhì)組合物根據(jù)下式組成：1，17-雙（2-辛基環(huán)丙基） 十七碳-9-基-4-(二甲氨基）丁酸酯：DSPC:膽固醇：表面活性劑（50% : 10% :40% -表 面活性劑％ :表面活性劑％ )。siRNA-LNP-對(duì)-脂質(zhì)比是0. 06重量/重量。通過(guò)尾靜脈以 等同于lmg/kgsiRNA的單次劑量注射小鼠（n= 3)。注射后24小時(shí)進(jìn)行血液采集并且通過(guò) 比色測(cè)定法測(cè)定FVII水平。數(shù)據(jù)表明在按siRNA劑量lmg/kg單次靜脈內(nèi)注射siRNA-LNP 后24小時(shí)，與對(duì)照相比，血液中的FVII水平降低>95%。這個(gè)觀察結(jié)果與所用的表面活性 劑或摻入siRNA-LNP的mol%表面活性劑無(wú)關(guān)。
[0066] 圖2使用因子VII(FVII)小鼠模型來(lái)顯示用表面活性劑聚氧乙烯（40)硬脂酸酯 制備的siRNA-LNP的體內(nèi)沉默活性。使用微流體方法制造siRNA-LNP。將活性作為隨siRNA 劑量和時(shí)間變化而變化的殘余FVII蛋白質(zhì)水平％計(jì)量。全部LNP均包含：1，17-雙（2-辛 基環(huán)丙基）十七碳-9-基_4_(二甲氨基）丁酸酯：DSPC:膽固醇：聚氧聚氧乙烯（40)硬 脂酸酯（50:10:37. 5:2. 5mol%)。siRNA-LNP-對(duì)-脂質(zhì)比是0.06重量/重量。通過(guò)尾靜 脈以等同于〇. 〇l、〇. 05、0. 1、0. 3、0. 5和lmg/kgsiRNA的單次劑量注射小鼠（n