一種三環(huán)二萜類化合物及其制備方法與應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于植物有效成分提取技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種三環(huán)二萜類化合物及其制 備方法與應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 黑果土當(dāng)歸（ArabiaHand. -Mazz)系五加科（Araliaceae)橡木屬 植物，民間以其根入藥，入脾、胃二經(jīng)。該植物有補中益氣、托毒外出、消炎的功效，用于淋巴 腺炎、慢性化膿性骨髓炎和癤癰等癥。該屬植物化學(xué)成分主要含二萜、三萜皂苷、香豆素、 黃酮、木脂素及留醇。文獻(xiàn)報道其中的二萜類化合物有抗腫瘤活性（ChangL.C.,Song L.L. ,ParkE.J. ,LuyengiL. ,LeeK.J. ,FarnsworthN.R. ,PezzutoJ.M. ,and KinghornA.D.BioactiveConstituentsofThujaoccidentalis.JournalofNatural Products. 2000, 63, 1235-1238;YangN.Y. ,LiuL. ,Taoff.ff. ,DuanJ.A. ,Tian L.J.DiterpenoidsfromPinusmassonianaresinandtheircytotoxicityagainst A431andA549cells.Phytochemistry2010，71，1528 - 1533)。目前對黑果土當(dāng)歸植 物化學(xué)成分以及藥理活性的研究報道較少。本發(fā)明試圖對黑果土當(dāng)歸中具有抗腫瘤作用的 化合物做深入研究，以期發(fā)現(xiàn)其中的細(xì)胞毒活性天然產(chǎn)物，為篩選高效、低毒的抗腫瘤藥物 提供依據(jù)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的第一目的是提供一種三環(huán)二萜類化合物；第二目的在于提供所述三環(huán)二 萜類化合物的制備方法；第三目的在于提供所述三環(huán)二萜類化合物的應(yīng)用。
[0004] 本發(fā)明的第一目的是這樣實現(xiàn)的，所述的三環(huán)二萜類化合物是以黑果土當(dāng)歸莖為 原料，經(jīng)浸膏提取、有機溶劑萃取、硅膠柱層析、高壓液相色譜分離得到的，該化合物分子式 為CnnKL，命名為dumetorumaneA，縣有下沐結(jié)構(gòu)式：
[0005] 本發(fā)明的第二目的是這樣實現(xiàn)的，是以黑果土當(dāng)歸莖為原料，經(jīng)浸膏提取、有機溶 劑萃取、硅膠柱層析、高壓液相色譜分離獲得，具體為： A、 浸膏提?。簩⒑诠廉?dāng)歸莖晾干粉碎得到0. 05~0. 15cm粒徑大小的顆粒，加入黑果 土當(dāng)歸莖重量比4~8倍的體積百分濃度80~95%乙醇溶液于65~74°C下回流提取3~5次，每 次l~3h，合并提取液，提取液過濾，減壓濃縮提取液至比重為1. 1~1. 3得到浸膏a; B、 有機溶劑萃?。航鯽中加入重量比2~4倍量的水，依次用與水等體積的石油醚、乙 酸乙酯和正丁醇溶劑進(jìn)行萃取，每種溶劑萃取4~6次，蒸去溶劑分別得到石油醚萃取物b、 乙酸乙酯萃取物c和正丁醇萃取物d; C、 硅膠柱層析： 1) 將乙酸乙酯萃取物c上硅膠柱，裝柱硅膠為100~200目，用量為萃取物c重量6~8倍 量；用體積比為30:1~0:1的氯仿-甲醇有機溶劑梯度洗脫，收集梯度洗脫液、濃縮，經(jīng)TLC 監(jiān)測，合并相同的部分； 2) 將1)中以10:1配比的氯仿-甲醇有機溶劑進(jìn)行洗脫得到的洗脫液e上硅膠柱，裝 柱硅膠為200~300目，用量為洗脫液e體積6~8倍量；用體積比25:1~0:1的氯仿甲醇有機 溶劑梯度洗脫，收集梯度洗脫液、濃縮，經(jīng)TLC檢測，合并相同的部分； D、 高效液相色譜分離：將C步驟2)中以8:1配比的氯仿-甲醇有機溶劑進(jìn)行洗脫得到 的洗脫液經(jīng)高效液相色譜分離純化，即得所述的三環(huán)二砲類化合物dumetorumaneA。
[0006] 本發(fā)明三環(huán)二萜類化合物是首次被分離出來的，通過核磁共振和其他波譜技術(shù)測 定方法確定為三環(huán)二萜類化合物，并表征其具體結(jié)構(gòu)為：
化合物dumetorumaneA，為白色無定型粉末（溶劑為氯仿+60.0(c 0.50，CHC13);IR(KBr)譜在 3381，2968，1710，1655，1124，1068，863cm1 有吸收， 表明分子中存在羧基、羥基和雙鍵。HRESI-MS(附圖1)顯示其準(zhǔn)分子離子峰m/z359. 2193 (calcd.forC2QH3204Na+: 359. 2198)，結(jié)合NMR譜確定其分子式為C2QH3204,不飽和度為 5。 iHNMR(附圖2,數(shù)據(jù)歸屬見表1)顯示分子中有3個甲基單峰，分別為S1.21 (3H，s)， 1.16 (3H，s)及0.82 (3H，s))，有 1 個三取代雙鍵信號4.71 (1H，4 /=4.8);13C NMR(附圖3,數(shù)據(jù)歸屬見表1)顯示分子中有20個碳，其中有5個季碳（含一個羧基碳和1 個烯碳），4個次甲基（含1個烯碳），8個亞甲基（含1個連氧碳）及3個甲基。結(jié)合HSQC 相關(guān)譜（附圖4)，并對比文獻(xiàn)數(shù)據(jù)可證實，該化合物與已知的對映海松烷型二萜結(jié)構(gòu)相似， 區(qū)別在于分子中的C環(huán)是一個七元環(huán)而不是六元環(huán)。在HMBC譜（附圖5)中可看到H-14 (心 4. 71)與C-16 (A64. 8)有相關(guān)，H-16 (心 3. 69-3. 81)與C-13 (A77. 8)及C-14 (心118. 6)有相關(guān)，在COSY譜（附圖6)中可看到H-14與H-15有相關(guān)，證明式I化合物 的C環(huán)是一個七元環(huán)。進(jìn)一步經(jīng)HMBC相關(guān)（附圖5)、COSY相關(guān)（附圖6)和R0ESY(附圖 7)及與文獻(xiàn)（JungH.A.，LeeE.J.，KimJ.S.，KangS.S.，LeeJ.H.，MinB.S.，Choi J.S.CholinesteraseandBACE1inhibitoryditerpenoidsfromAraliacordata.Arch PharmRes. 2009, 32: 1399-1408;DangN.H. ,ZhangX.F. ,ZhengM.S. ,SonK.H., ChangH.ff. ,KimH.P. ,BaK.H. ,andKangS.S.InhibitoryConstituentsagainst CyclooxygenasesfromAraliacordataThunb.ArchPharmRes. 2005, 28: 28-33.) 對比證實，使化合物的結(jié)構(gòu)最終得到確認(rèn)，化合物具有下述結(jié)構(gòu)式：
通過SCIFINDER數(shù)據(jù)庫檢索和文獻(xiàn)查詢證實該化合物為新化合物。
[0007] 表1本發(fā)明化合物的1H-和13C-NMR(⑶Cl3)數(shù)據(jù)
本發(fā)明的第三目的是這樣實現(xiàn)的，所述的三環(huán)二萜類化合物在制備預(yù)防和/或治療腫 瘤藥物中的應(yīng)用。
[0008] 所述的三環(huán)二萜類化合物在制備預(yù)防和/或治療人肺腺癌、人急性早幼粒白血病 或人乳腺癌藥物中的應(yīng)用。
[0009] 本發(fā)明所述的三環(huán)二萜類化合物對人肺腺癌、人急性早幼粒白血病或人乳腺癌細(xì) 胞株有顯著的抑制作用，提示其具有良好的抗癌活性，可以作為抗癌活性成分或先導(dǎo)化合 物。
[0010] 本發(fā)明所述的三環(huán)二萜類化合物可為天然存在的有機化合物，原料來源廣泛，并 且化合物制備操作流程簡單，所獲得的化合物純度高。
【附圖說明】
[0011] 圖1是本發(fā)明化合物高分辨質(zhì)譜（HRESI-MS); 圖2是本發(fā)明化合物的核磁共振氫譜（:HNMR); 圖3是本發(fā)明化合物的核磁共振碳譜（13CNMR); 圖4是本發(fā)明化合物的HSQC相關(guān)譜； 圖5是本發(fā)明化合物的HMBC相關(guān)譜； 圖6是本發(fā)明化合物的COSY相關(guān)譜； 圖7是本發(fā)明化合物的R0ESY相關(guān)譜。
【具體實施方式】
[0012] 下面結(jié)合實施例和附圖對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，但不以任何方式對本發(fā)明加以 限制，基于本發(fā)明教導(dǎo)所作的任何變換或改進(jìn)，均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0013] 本發(fā)明所述的三環(huán)二萜類化合物是以黑果土當(dāng)歸莖為原料，經(jīng)浸膏提取、有機 溶劑萃取、硅膠柱層析、高壓液相色譜分離得到的，該化合物分子式為C2(]H3204，命名為 dumetorumaneA，具有下述結(jié)構(gòu)式：
[0014] 本發(fā)明所述的三環(huán)二萜類化合物的制備方法，是以黑果土當(dāng)歸莖為原料，經(jīng)浸膏 提取、有機溶劑萃取、硅膠柱層析、高壓液相色譜分離獲得，具體為： A、 浸膏提取：將黑果土當(dāng)歸莖晾干粉碎得到0. 05~0. 15cm粒徑大小的顆粒，加入黑果 土當(dāng)歸莖重量比4~8倍的體積百分濃度80~95%乙醇溶液于65~74°C下回流提取3~5次，每 次l~3h，合并提取液，提取液過濾，減壓濃縮提取液至比重為1. 1~1. 3得到浸膏a; B、 有機溶劑萃?。航鯽中加入重量比2~4倍量的水，依次用與水等體積的石油醚、乙 酸乙酯和正丁醇溶劑進(jìn)行萃取，每種溶劑萃取4~6次，蒸去溶劑分別得到石油醚萃取物b、 乙酸乙酯萃取物c和正丁醇萃取物d; C、 硅膠柱層析： 1) 將乙酸乙酯萃取物c上硅膠柱，裝柱硅膠為100~200目，用量為萃取物c重量6~8倍 量；用體積比為30:1~0:1的氯仿-甲醇有機溶劑梯度洗脫，收集梯度洗脫液、濃縮，經(jīng)TLC 監(jiān)測，合并相同的部分； 2) 將1)中以10:1配比的氯仿-甲醇有機溶劑進(jìn)行洗脫得