咪唑并吡啶-6-甲酰-氨基酸芐酯，其合成，活性和應(yīng)用
【專利說明】咪唑并吡啶-6-甲釀-氨基酸芐酯，其合成，活性和應(yīng)用 發(fā)明領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及3H-咪唑并[4, 5-c]吡啶-6-甲酰-Ns-N02-Arg-Lys-0BZ1，涉及它的 制備，涉及它對腫瘤生長的抑制作用，涉及它的抗炎活性，進(jìn)一步涉及它的抗血栓活性。結(jié) 果表明，3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-N G-N02-Arg-LyS-0BZl是具有抗腫瘤，抗炎癥和 抗血栓三重活性的化合物，具有良好的臨床應(yīng)用前景。本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 癌癥是一組可影響身體任何部位的多種疾病的通稱。使用的其它術(shù)語為惡性腫瘤 和贅生物。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計，癌癥是世界上的頭號死因之一，尤其是在發(fā)展中國家。而 全世界癌癥死亡人數(shù)預(yù)計將繼續(xù)上升，到2030年將超過1310萬。因此，開發(fā)新的高效，低 毒，毒副作用小的抗腫瘤藥物一直是新藥研究的重要課題之一。
[0003] 隨著對腫瘤特性和發(fā)病本質(zhì)的認(rèn)識，發(fā)明人曾經(jīng)公開下式代表的3H-咪唑并[4， 5-c]吡啶-6-甲酰-AA-OBzl (其中AA代表甘氨基酸或其它L-氨基酸殘基）在1 ii mol/kg 劑量下顯示良好的抗腫瘤活性。通過進(jìn)一步研究發(fā)明人認(rèn)識到，在3H-咪唑并[4,5-c]吡 啶-6-甲酰-AA-OBzl的6-甲?；虯A-OBzl基之間插入N^NO^Arg殘基，不僅可以延緩 它的代謝達(dá)到提高抗腫瘤活性的目的，而且可以增加抗炎癥和抗血栓活性。炎癥和血栓都 是危害腫瘤患者預(yù)后的并發(fā)癥。通過這種修飾，獲得具有抗腫瘤，抗炎癥和抗血栓三重活性 的化合物，具有良好的臨床應(yīng)用前景。根據(jù)這些認(rèn)識，發(fā)明人提出了本發(fā)明。
[0004]


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的第一個內(nèi)容是提供3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲 醜-NG-N0 2-Arg-Lys_0Bzl。
[0006]
[0007] 本發(fā)明的第二個內(nèi)容是提供制備3H-咪唑并[4, 5-c]吡啶-6-甲 酰-W-NO^Arg-Lys-OBzl的合成方法，該方法包括：
[0008] (1)L-組氨酸在稀硫酸催化下與甲酸進(jìn)行Pictet-Spengler縮合生成6S-4,5,6, 7-四氫-3H-咪唑并[4, 5-c]吡啶-6-羧酸；
[0009] (2) 6S-4, 5,6, 7-四氫-3H-咪唑并[4, 5-c]吡啶-6-羧酸轉(zhuǎn)化為 6S-4, 5,6, 7-四 氫-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酸甲酯；
[0010] (3)6S-4,5,6,7-四氫-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酸甲酯用高錳酸鉀氧化為 3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酸甲酯；
[0011] (4)3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酸甲酯在NaOH溶液（2N)中皂化成3H-咪唑并 [4,5-c]吡啶-6-甲酸；
[0012] (5) 3H-咪唑并[4, 5-c]吡啶-6-甲酸與NG-N02-Arg-0Bzl偶聯(lián)得到3H-咪唑并[4， 5-c]吡啶-6-甲酰 Ns-N02-Arg-0Bzl ;
[0013] (6) 3H-咪唑并[4, 5-c]吡啶-6-甲酰-N^-NC^-Arg-OBzl 在 NaOH 溶液（2N)中皂 化成3H-咪唑并[4, 5-c]吡啶-6-甲酰-NG-N02-Arg ;
[0014] (7) 3H-咪唑并[4, 5-c]吡啶-6-甲酰-NG-N02-Arg 與 L-Lys (Boc) -OBzl 偶聯(lián)得到 3H-咪唑并[4, 5-c]吡啶-6-甲酰Ns-N02-Arg-Lys (Boc) -OBzl，再脫掉賴氨酸側(cè)鏈的Boc保 護(hù)基得到 3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-NG-N02-Arg-Lys-0Bzl。
[0015] 本發(fā)明的第三個內(nèi)容是評價3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲 酰-W-NOfArg-Lys-OBzl對腫瘤細(xì)胞增殖的抑制作用。
[0016] 本發(fā)明的第四個內(nèi)容是評價3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲 酰-NG-N0 2-Arg-LyS-0Bzl對荷S180小鼠腫瘤生長的抑制作用。
[0017] 本發(fā)明的第五個內(nèi)容是評價3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲 酰-W-NOfArg-Lys-OBzl對ICR雄性小鼠的抗炎活性。
[0018] 本發(fā)明的第六個內(nèi)容是評價3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲 酰-NG-N0 2-Arg-Lys-0Bzl對SD雄性大鼠的體內(nèi)抗血栓活性。
【附圖說明】
[0019] 圖 1. 3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-NG-N02-Arg-Lys_0Bzl 的合成路線.i) HCH0，H20，H2S04,65°C ;ii)Me0H，S0Cl2,0°C ;iii)DMF，NMM，KMn04;iv)Na0H，H20,0°C ;v)二環(huán) 己基碳二亞胺（DCC)，1-羥基苯并三唑（HOBt)，N-甲基嗎啉（NMM)，DMF ;vi)Na0H，H20,0°C ; vii)二環(huán)己基碳二亞胺（DCC)，1-羥基苯并三唑（HOBt)，N-甲基嗎啉（NMM)，DMF，4N Hcl/ EA〇
【具體實施方式】
[0020] 為了進(jìn)一步闡述本發(fā)明，下面給出一系列實施例。這些實施例完全是例證性的，它 們僅用來對本發(fā)明進(jìn)行具體描述，不應(yīng)當(dāng)理解為對本發(fā)明的限制。
[0021] 實施例1制備6S-4,5,6,7-四氫-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-羧酸（2)
[0022] 冰浴下將15. 0g(96. 8mmol)L_組氨酸置于250mL圓底燒瓶中，加入50mL蒸饋水， 再逐滴加入3mL濃硫酸，攪拌均勻，完全溶解后加入15mL甲醛溶液（40% )，60°C反應(yīng)8小 時。反應(yīng)物冷卻至室溫，用濃氨水在冰浴下調(diào)pH至6,有大量無色沉淀析出，過濾。濾餅用 水洗并干燥，得到15g(93% )標(biāo)題化合物，為無色固體。ESI-MS(m/z)167[M+H] +。
[0023] 實施例2制備6S-4, 5,6, 7-四氫-3H-咪唑并[4, 5-c]吡啶-6-甲酸甲酯（3)
[0024] 冰浴下在500mL茄瓶里加100mL甲醇，用恒壓漏斗緩慢滴加10mL二氯亞砜，1小 時后加入5.(^(30臟〇1)63-4,5,6,7-四氫-311-咪唑并[4,5-(3]吡啶-6-羧酸（2)，室溫反 應(yīng)3天后，TLC顯示反應(yīng)完全，反應(yīng)混合物減壓濃縮，殘留物加甲醇溶解并減壓濃縮。該操 作重復(fù)3次得無色泡狀固體，再加乙醚抽干重復(fù)3次得無色粉末，最后用甲醇/乙醚重結(jié)晶 得4.2g(55%)標(biāo)題化合物，為無色固體。ESI-MS(m/z)181[M+H] +。
[0025] 實施例3制備3H-咪唑并[4, 5-c]吡啶-6-甲酸甲酯（4)
[0026] 冰浴下在 100mL 茄瓶里加 2g(7.9mmol)6S-4,5,6,7-四氫-3H-咪唑并[4,5-c] 吡啶-6-甲酸甲酯，加DMF使溶解。向該溶液中滴加lmL三乙胺調(diào)pH到8,分三次加入 1.5g(9. 4mmol)高錳酸鉀。反應(yīng)6小時后，TLC監(jiān)測反應(yīng)完畢。反應(yīng)物減壓濃縮至干，得到 的黑色固體用IN HC1溶液溶解，冰浴下滴加2N NaOH溶液調(diào)pH到7,析出大量無色固體。該 固體以二氯甲烷/甲醇為洗脫劑用硅膠柱純化，得〇.93g(66.4% )標(biāo)題化合物，為無色固 體。ESI-MS(m/z)177[M+H]+。
[0027] 實施例4制備3H-咪唑并[4, 5-c]吡啶-6-羧酸（5)
[0028]冰浴下在100mL茄瓶里加 3mL NaOH溶液（1. 5N)，lOmin后加入 0. 93g(5. 3mmol)3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酸甲酯（4)，反應(yīng)1小時后TLC顯示反應(yīng) 完畢，冰浴下向反應(yīng)液中滴加2N HC1溶液調(diào)pH到7,析出大量無色固體。該固體以二氯甲 烷/甲醇為洗脫劑用硅膠柱純化，得〇.56g(65% )標(biāo)題化合物，為無色固體。ESI-MS(m/ z) 163[M+H]+。
[0029] 實施例 5 制備 3H-咪唑并[4, 5-c]吡啶-6-甲酰-L_NG-N02-Arg-0Bzl (6)
[0030] 稱取194mg(l. 2mmol)3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-羧酸于100mL茄形瓶中，加 入20mLDMF。在冰浴和攪拌下依次加入211mg(l. 6mmol)H0Bt及333mg(l. 6mmol)DCC，活化 30min。稱取 676mg(l. 4mmol)Tos ? NhCVVrg-OBzl 于 25mL 小三角瓶中，用 DMF 溶解后，用 NMM調(diào)pH至7,然后將該溶液滴加至茄形瓶的反應(yīng)液中，最后用NMM調(diào)反應(yīng)液pH值至8。室