抗菌肽的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及抗菌肽，具體涉及一種具有16個氨基酸的抗菌肽。
【背景技術】
[0002] 抗菌肽是一類具有抗菌活性的小分子蛋白。自瑞典科學家Boman等從蠶蛹身上分 離得到第一個抗菌肽天蠶素以來，人們又在昆蟲、兩棲類、水產(chǎn)動物，以及包括人在內(nèi)的哺 乳動物甚至植物及細菌等廣泛的生物譜中發(fā)現(xiàn)了 1〇〇〇余種抗菌肽。內(nèi)源性的抗菌肽在生 物體內(nèi)經(jīng)誘導而合成，在抵抗病原入侵方面起著重要的作用，是生物體非特異性免疫的重 要組成部分。
[0003] 抗菌肽的抗菌活性具有選擇性高、殺菌快速、作用廣譜和難以形成抗性的特點，這 使其成為研究和開發(fā)新型抗生素的理想候選。目前，從生物體內(nèi)提取天然抗菌肽是抗菌肽 產(chǎn)品開發(fā)的主要思路，但天然抗菌肽具有結構不穩(wěn)定，易失活等缺點。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明提供了一種抗菌肽，其來源于一種名為Scorpion Androctonus的蝎子所分 泌的毒性蛋白Mauriporin，該毒性蛋白質(zhì)含有48個氨基酸。我們選擇性地縮短了該毒性蛋 白的肽鏈長度并優(yōu)化了序列，最終得到了本發(fā)明的抗菌肽。本發(fā)明抗菌肽具有廣譜的抗菌 特性，不僅活性更高，而且穩(wěn)定不易失活。
[0005] 根據(jù)本發(fā)明的一個方面，本發(fā)明涉及一種抗菌肽，所述抗菌肽的序列為：Phe-Lys-XfGly-Gly-Phe-Xz-Lys-Lys-Xu-Trp-Arg-Ser-XfXs-Ala，其中，X!、X 2、X3、X4和 X 5各自獨立 地為1^11、116或￥&1;優(yōu)選3 1和乂2各自獨立地為116，父334和乂5各自獨立地為1^11 ;在優(yōu) 選的技術方案中，所述抗菌肽的序列為Phe-Lys-Ile-Gly-Gly-Phe-Ile-Lys-Lys-Leu-Trp-Arg-Ser-Leu-Leu-Ala ;Phe-Lys-Val-Gly-Gly-Phe-Ile-Lys-Lys-Val-Trp-Arg-Ser-Ile_V al-Ala ;Phe-Lys-Ile-Gly-Gly-Phe-Val-Lys-Lys-Leu-Trp-Arg-Ser-Val-Leu_Ala ;或 Phe -Lys-Leu-Gly-Gly-Phe-Leu-Lys-Lys-Ile-Trp-Arg-Ser-Leu-Ile-Ala〇
[0006] 根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，本發(fā)明涉及一種組合物，含有本發(fā)明的抗菌肽或其任 意混合物，所述組合物包括但不限于洗手液、洗面奶、洗發(fā)香波、沐浴液、女性護理洗液、漱 口水、牙膏、香皂、化妝品、洗衣皂、洗衣液、洗滌靈、消毒液或潔廁液等。
[0007] 根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，本發(fā)明涉及一種織物，含有本發(fā)明的抗菌肽或其任意 混合物，所述織物包括但不限于衣物、床上用品、消毒紙巾、敷料或繃帶等。
[0008] 根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，本發(fā)明涉及一種衛(wèi)生巾、衛(wèi)生護墊、尿不濕或成人用尿 墊，含有本發(fā)明的抗菌肽或其任意混合物。
[0009] 根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，本發(fā)明的抗菌肽可以作為飼料添加劑，從而本發(fā)明涉 及一種飼料，含有本發(fā)明的抗菌肽或其任意混合物。
[0010] 根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，本發(fā)明涉及一種用于預防和/或治療細菌感染的藥物 組合物，含有預防和/或治療有效量的本發(fā)明的抗菌肽或其任意混合物。本發(fā)明進一步涉 及本發(fā)明的抗菌肽或其任意混合物在制備用于預防和/或治療細菌感染的藥物中的應用。
[0011] 根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，本發(fā)明涉及本發(fā)明的抗菌肽或其任意混合物在制備各 種具有抑菌和/或殺菌性能的產(chǎn)品中的應用。這些產(chǎn)品包括但不限于洗手液、洗面奶、洗發(fā) 香波、沐浴液、女性護理洗液、漱口水、牙膏、香皂、化妝品、洗衣皂、洗衣液、洗滌靈、消毒液、 潔廁液、衣物、床上用品、消毒紙巾、敷料、繃帶、衛(wèi)生巾、衛(wèi)生護墊、尿不濕、成人用尿墊或飼 料等等?？傊景l(fā)明的抗菌肽可以應用于一切需要殺菌或者抑菌的產(chǎn)品中。
[0012] 本領域技術人員知曉在本發(fā)明的各種組合物、飼料和藥物組合物中，可進一步含 有常規(guī)的各種輔料和/或活性成分，并且能夠根據(jù)本領域的常規(guī)方法確定本發(fā)明的抗菌肽 以及各種輔料和/或活性成分的合適的含量。本領域技術人員同樣知曉如何制備含有本 發(fā)明的抗菌肽的織物、衛(wèi)生巾、衛(wèi)生護墊、尿不濕或成人用尿墊，包括但不限于將織物、衛(wèi)生 巾、衛(wèi)生護墊、尿不濕或成人用尿墊，或者制造織物、衛(wèi)生巾、衛(wèi)生護墊、尿不濕或成人用尿 墊的材料在含有本發(fā)明抗菌肽的溶液中浸漬。
[0013] 本發(fā)明的抗菌肽可以采用本領域技術人員已知的方法合成，例如固相合成，并采 用本領域技術人員已知的方法進行純化，例如高效液相色譜法。
[0014] 本發(fā)明的抗菌肽抗菌譜廣，抗菌活性更高，而且穩(wěn)定不易失活。
【附圖說明】
[0015] 圖1為本發(fā)明抗菌肽的高效液相色譜圖。
[0016] 圖2為本發(fā)明抗菌肽的質(zhì)譜圖。 具體實施方案
[0017] 為了更好地理解本發(fā)明，下面結合實施例和附圖對本發(fā)明做進一步的詳細說明， 但本領域技術人員了解，下述實施例不是對本發(fā)明保護范圍的限制，任何在本發(fā)明基礎上 做出的改變和變化，都在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
[0018] 實施例1抗菌肽的固相合成、切割、純化及鑒定
[0019] 1. 1抗菌肽的固相合成
[0020] 本發(fā)明利用多肽合成儀采用固相合成法合成抗菌肽：
[0021] 1)以DMF為溶劑，各種a -氨基被Fmoc保護的氨基酸溶液的濃度為0. 25M，HBTU 溶液、HOBt溶液的濃度為0. 33M，哌啶溶液的濃度為200ml/L，DIEA溶液的濃度為174. 2ml/ L〇
[0022] 2)稱取0? 05mmol Fmoc-Ala-Wang樹脂（官能團含量0? 33mmol/g)置于固相反 應器中，加8ml DCM溶脹過夜，減壓抽去溶劑。加入濃度為200ml/L的哌啶溶液8ml，室溫 下反應5min，抽干；再加入濃度為200ml/L的哌啶溶液8ml，室溫下反應20min，抽干；依次 用8ml的DMF洗滌3次，每次lmin。準確量取0. 2mmol的a -氨基被Fmoc保護的氨基酸 溶液、0. 2mmol的HBTU溶液、0. 195mmol的HOBt溶液加入固相反應器中，反應5min后加入 0. 4mmol的DIEA，室溫下氮氣氣泡振蕩反應2h。依次用8ml的DMF洗滌3次，每次lmin。加 入濃度為200ml/L的哌啶溶液8ml，室溫下反應5min，抽干；再加入濃度為200ml/L的哌啶 溶液8ml，室溫下反應20min，抽干；依次以8ml的DMF洗滌3次，每次lmin。按照如上步驟 從肽鏈的碳端到氮端逐一連續(xù)合成了本發(fā)明的抗菌肽Phe-Lys-Ile-Gly-Gly-Phe-Ile-Lys -Lys-Leu-Trp-Arg-Ser-Leu-Leu-Ala (多肽 1) 〇
[0023] 3)待合成完畢后，分別用DMF和DCM先后清洗連有多肽鏈的樹脂，后將樹脂至于真 空干燥箱內(nèi)干燥備用。
[0024] 1.2抗菌肽的切割
[0025] 1)待樹脂干燥后，用刮刀將樹脂盡量打散，轉(zhuǎn)移至雞心瓶中，加入磁子，在冰水浴 下緩慢加入用于脫除樹脂的切割液l〇ml (切割液中TFA :純水：苯甲硫醚：苯酚：乙二硫醇 比例為82. 5:5:5:5:2. 5)，冰水浴下反應2h。
[0026] 2)待反應完成，將反應液連同樹脂一同轉(zhuǎn)移至過濾器中，用水栗抽濾，將得到的濾 液置于圓底燒瓶中，并在氮氣流下吹干。
[0027] 3)待圓底燒瓶中的樣品吹至粘稠，撤下氮氣管，在圓底燒瓶中倒入約20ml的4°C 冰乙醚，混合后充分打散，然后于冷凍離心機內(nèi)，4°C下8000r/min離心15min，棄上清，再于 20ml的4°C冰乙醚中打散，離心；如此重復操作3次，將沉淀再次真空干燥，即得抗菌肽粗 品。
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