一種雙歧桿菌與枯草芽孢桿菌共生培養(yǎng)的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及微生態(tài)制劑生產(chǎn)技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種雙歧桿菌與枯草芽孢桿菌共生培養(yǎng)的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]我國(guó)農(nóng)業(yè)部公布了能夠用于生產(chǎn)微生態(tài)制劑的菌種有枯草芽孢桿菌(ifeciWiASsub tilis )、地衣芽孢桿菌(Bacillus lichen!form!sX雙歧桿菌等。雙歧桿菌是人體腸道正常菌群的優(yōu)勢(shì)菌株，已經(jīng)證明具有扶正腸道菌群、抗感染、抑制腫瘤活性、促進(jìn)乳糖消化等多方面的生態(tài)效應(yīng)和保健功能，因此，雙歧桿菌越來(lái)越受到人們的重視。但在目前，雙歧桿菌的培養(yǎng)需在厭氧條件下，發(fā)酵時(shí)要充入二氧化碳或氮?dú)獾榷栊詺怏w，而且培養(yǎng)基中要加入牛肉膏，鮮牛奶，酵母浸粉等昂貴的氮源，生產(chǎn)成本高?，F(xiàn)國(guó)內(nèi)已有的雙歧桿菌制品普遍存在生產(chǎn)成本高的問題。
[0003]枯草芽孢桿菌OfeciWiAS1屬于對(duì)人畜無(wú)毒無(wú)害的細(xì)菌，在自然界分布廣泛，于1989年被美國(guó)食品與藥物管理局(FDA)批準(zhǔn)使用，1999年被我國(guó)農(nóng)業(yè)部批準(zhǔn)使用?？莶菅挎邨U菌含有豐富的產(chǎn)酶系統(tǒng)，菌體進(jìn)入宿主腸道后能分泌多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和抑菌物質(zhì)，維持腸道生態(tài)平衡，增強(qiáng)宿主免疫力，從而能夠被廣泛使用。
[0004]人體菌群微生態(tài)失衡，能引起多種疾病，國(guó)內(nèi)外多采用雙歧桿菌，乳酸菌和枯草芽孢桿菌等微生態(tài)制劑作為保健品或藥品來(lái)防治腸胃病，心腦血管疾病，增強(qiáng)免疫力和抗腫瘤等。
[0005]現(xiàn)有技術(shù)中未見公開一種可行的雙歧桿菌與枯草芽孢桿菌共生培養(yǎng)方法，因此需要一種低成本雙歧桿菌與枯草芽孢桿菌共生培養(yǎng)方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的就是針對(duì)上述存在的缺陷而提供一種雙歧桿菌與枯草芽孢桿菌共生培養(yǎng)的方法，實(shí)現(xiàn)了好氧菌與嚴(yán)格厭氧菌的共生培養(yǎng)，且使得雙歧桿菌這種培養(yǎng)要求苛刻的益生菌實(shí)現(xiàn)了在普通低成本的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。
[0007]本發(fā)明的一種雙歧桿菌與枯草芽孢桿菌共生培養(yǎng)的方法技術(shù)方案為，米用雙歧桿菌與枯草芽孢桿菌共生培養(yǎng)，步驟如下:
①配制培養(yǎng)基:配制液態(tài)培養(yǎng)基，調(diào)pH，121°C消毒20分鐘；
②把枯草芽孢桿菌接入①中配制好的培養(yǎng)基，通氣培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速為135-140轉(zhuǎn)/分鐘；
③培養(yǎng)9h后，轉(zhuǎn)速改為35-40轉(zhuǎn)/分鐘，停止通氣，繼續(xù)培養(yǎng)1-1.5h后，接入雙歧桿菌共生培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速變?yōu)?5-30轉(zhuǎn)/分鐘；
④培養(yǎng)26-28h后停止培養(yǎng)。
[0008]所述的枯草芽孢桿菌為枯草芽孢桿菌Bacillus sub tilis XffJLSP-1，已于2012年8月28日在中國(guó)微生物菌種保藏委員會(huì)普通微生物中心保藏，保藏號(hào)為CGMCCN0.6478。
[0009]步驟①中，液態(tài)培養(yǎng)基為葡萄糖濃度5%，玉米漿干物質(zhì)濃度3%，余量為水。
[0010]步驟①中，用碳酸鈣調(diào)pH 6.8。
[0011]步驟②中，培養(yǎng)裝液量為2/5-3/5，溫度為35-37 °C。
[0012]步驟③中，培養(yǎng)溫度為35 °C。
[0013]所述的一種雙歧桿菌與枯草芽孢桿菌共生培養(yǎng)的方法，步驟如下:
①配制培養(yǎng)基:配制液態(tài)培養(yǎng)基，用碳酸鈣調(diào)PH6.8，121°C消毒20分鐘；
②把枯草芽孢桿菌接入①中配制好的培養(yǎng)基，在5升發(fā)酵罐中通氣培養(yǎng)，通氣速度為9升/分鐘，罐壓保持在0.3-0.5mpa,裝液量為3/5，溫度為35_37°C，轉(zhuǎn)速為135-140轉(zhuǎn)/分鐘；
③培養(yǎng)9h后，轉(zhuǎn)速改為35-40轉(zhuǎn)/分鐘，停止通氣，繼續(xù)培養(yǎng)1-1.5h后，接入雙歧桿菌共生培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速變?yōu)?5-30轉(zhuǎn)/分鐘，溫度為35-37°C ;
④培養(yǎng)26-28h后停止培養(yǎng)。
[0014]所述的通氣培養(yǎng)，為通入含氧氣體。
[0015]所述的通氣培養(yǎng)，為通入經(jīng)過(guò)過(guò)濾除菌的空氣。
[0016]步驟④結(jié)束后加入保護(hù)劑制成冷凍干燥粉。
[0017]本發(fā)明的有益效果為:本發(fā)明實(shí)現(xiàn)了好氧菌與嚴(yán)格厭氧菌的共生培養(yǎng)，且使得雙歧桿菌這種培養(yǎng)要求苛刻的益生菌實(shí)現(xiàn)了在普通低成本的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。具體如下:
1、雙歧桿菌的培養(yǎng)過(guò)程需要嚴(yán)格厭氧條件，必需連續(xù)充入氮?dú)饣蚱渌栊詺怏w來(lái)維持嚴(yán)格厭氧條件；采用枯草芽孢桿菌與雙歧桿菌共生培養(yǎng)的方法，利用枯草芽孢桿菌消耗氧氣，創(chuàng)造一個(gè)缺氧的微環(huán)境，省去了連續(xù)充入氮?dú)饣蚨栊詺怏w的環(huán)節(jié)，確能保持嚴(yán)格的厭氧培養(yǎng)條件。
[0018]2、某些簡(jiǎn)單的培養(yǎng)基例如玉米漿葡萄糖培養(yǎng)基經(jīng)過(guò)枯草芽孢桿菌發(fā)酵一段時(shí)間后，可適合雙歧桿菌要求苛刻的培養(yǎng)條件。
[0019]3、減少了雙歧桿菌的培養(yǎng)成本。
[0020]【具體實(shí)施方式】:
為了更好地理解本發(fā)明，下面用具體實(shí)例來(lái)詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案，但是本發(fā)明并不局限于此。
[0021]實(shí)施例1
雙歧桿菌(江蘇紫石微康生物科技有限公司的兩歧雙歧桿菌)與枯草芽孢桿菌Bacillus subtil is XffJLSP-1 的共生培養(yǎng)
枯草芽抱桿菌sub tilis XWJLSP-1，已于2012年8月28日在中國(guó)微生物菌種保藏委員會(huì)普通微生物中心保藏，保藏號(hào)為CGMCC N0.6478。
[0022]①配制培養(yǎng)基:配制葡萄糖濃度5%，玉米漿干物質(zhì)濃度3%的液態(tài)培養(yǎng)基200ml，用碳酸鈣調(diào)PH 6.8ο 121°C消毒20分鐘。
[0023]②把枯草芽孢桿菌也ciWM subtilis XWJLSP-1接入①中配制好的培養(yǎng)基，搖瓶培養(yǎng)，裝液量為2/5，轉(zhuǎn)速為136轉(zhuǎn)/分鐘，溫度為35 °C。
[0024]③培養(yǎng)9h后，再改變轉(zhuǎn)速為36轉(zhuǎn)/分繼續(xù)培養(yǎng)lh，接入雙歧桿菌共生培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度和裝液量均與②同，轉(zhuǎn)速變?yōu)?6轉(zhuǎn)/分鐘，溫度為35°C。
[0025]④培養(yǎng)26h后停止培養(yǎng)檢測(cè)雙歧桿菌的濃度，得到雙歧桿菌濃度為10s/ml枯草芽孢桿菌濃度為107ml的共生培養(yǎng)液189ml。
[0026]實(shí)施例2
雙歧桿菌(江蘇紫石微康生物科技有限公司的兩歧雙歧桿菌)與枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis XffJLSP-1 的共生培養(yǎng)
1、配制培養(yǎng)基:配制葡萄糖濃度5%，玉米漿干物質(zhì)濃度3%的液態(tài)培養(yǎng)基3升，用碳酸鈣調(diào)pH 6.8。121°C消毒20分鐘。
[0027]2、把枯草芽孢桿菌接入I中配制好的培養(yǎng)基，在5升發(fā)酵罐中通氣培養(yǎng)，通氣速度為9升/分鐘，罐壓保持在0.3-0.5mpa,轉(zhuǎn)速為136轉(zhuǎn)/分鐘，溫度為35°C。
[0028]3、培養(yǎng)9h后，再改變轉(zhuǎn)速為29轉(zhuǎn)/分，停止通氣，繼續(xù)培養(yǎng)1.5h,接入雙歧桿菌共生培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速變?yōu)?9轉(zhuǎn)/分鐘，溫度35 °C。
[0029]4、培養(yǎng)27h后停止培養(yǎng)，檢測(cè)雙歧桿菌的濃度，得到雙歧桿菌濃度為1Vml枯草芽孢桿菌濃度為109/ml的共生培養(yǎng)液2.76升。
[0030]5、加入保護(hù)劑制成冷凍干燥粉。
[0031]實(shí)施例3
雙歧桿菌(從市售某酸奶中分離的雙歧桿菌)與枯草芽孢桿菌(從本地土壤中分離的枯草芽孢桿菌)的共生培養(yǎng)
①配制培養(yǎng)基:配制葡萄糖濃度5%，玉米漿干物質(zhì)濃度3%的液態(tài)培養(yǎng)基200ml，用碳酸鈣調(diào)pH 6.8。121°C消毒20分鐘。
[0032]②把枯草芽孢桿菌接入①中配制好的培養(yǎng)基，搖瓶培養(yǎng)，裝液量為2/5，轉(zhuǎn)速為136轉(zhuǎn)/分鐘，溫度為35 0C ο
[0033]③培養(yǎng)9h后，再改變轉(zhuǎn)速為36轉(zhuǎn)/分繼續(xù)培養(yǎng)lh，接入雙歧桿菌共生培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度和裝液量均與②同，轉(zhuǎn)速變?yōu)?6轉(zhuǎn)/分鐘，溫度為35°C。
[0034]④培養(yǎng)26h后停止培養(yǎng)檢測(cè)雙歧桿菌的濃度，得到長(zhǎng)歧桿菌濃度為106/ml枯草芽孢桿菌濃度為107ml的共生培養(yǎng)液187ml。
[0035]實(shí)施例4
雙歧桿菌(購(gòu)自中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏管理中心的CICC 21711)與枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis XffJLSP-1 的共生培養(yǎng)
1、配制培養(yǎng)基:配制葡萄糖濃度5%，玉米漿干物質(zhì)濃度3%的液態(tài)培養(yǎng)基3升，用碳酸鈣調(diào)pH 6.8。121°C消毒20分鐘。
[0036]2、把枯草芽孢桿菌接入I中配制好的培養(yǎng)基，在5升發(fā)酵罐中通氣培養(yǎng)，通氣速度為9升/分鐘，罐壓保持在0.3-0.5mpa,轉(zhuǎn)速為136轉(zhuǎn)/分鐘，溫度為36°C。
[0037]3、培養(yǎng)9h后，再改變轉(zhuǎn)速為29轉(zhuǎn)/分，停止通氣，繼續(xù)培養(yǎng)1.5h,接入雙歧桿菌(購(gòu)自中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏管理中心的CICC 21711)共生培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速變?yōu)?9轉(zhuǎn)/分鐘，溫度36 °C。
[0038]4、培養(yǎng)27h后停止培養(yǎng)，檢測(cè)雙歧桿菌的濃度，得到雙歧桿菌濃度為106/ml枯草芽孢桿菌濃度為107ml的共生培養(yǎng)液2.65升。
[0039]5、加入保護(hù)劑制成冷凍干燥粉。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種雙歧桿菌與枯草芽孢桿菌共生培養(yǎng)的方法，其特征在于，采用雙歧桿菌與枯草芽孢桿菌共生培養(yǎng)，步驟如下: ①配制培養(yǎng)基:配制液態(tài)培養(yǎng)基，調(diào)pH，121°C消毒20分鐘； ②把枯草芽孢桿菌接入①中配制好的培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速為135-140轉(zhuǎn)/分鐘； ③培養(yǎng)9h后，轉(zhuǎn)速改為35-40轉(zhuǎn)/分鐘，繼續(xù)培養(yǎng)1-1.5h后，接入雙歧桿菌共生培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速變?yōu)?5-30轉(zhuǎn)/分鐘； ④培養(yǎng)26-28h后停止培養(yǎng)。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種雙歧桿菌與枯草芽孢桿菌共生培養(yǎng)的方法，其特征在于，所述的枯草芽孢桿菌為枯草芽孢桿菌SaciWiAsXWJLSP-1，已于2012年8月28日在中國(guó)微生物菌種保藏委員會(huì)普通微生物中心保藏，保藏號(hào)為CGMCC N0.6478。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種雙歧桿菌與枯草芽孢桿菌共生培養(yǎng)的方法，其特征在于，步驟①中，液態(tài)培養(yǎng)基為葡萄糖濃度5%，玉米漿干物質(zhì)濃度3%，余量為水。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種雙歧桿菌與枯草芽孢桿菌共生培養(yǎng)的方法，其特征在于，步驟①中，用碳酸鈣調(diào)PH 6.8。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種雙歧桿菌與枯草芽孢桿菌共生培養(yǎng)的方法，其特征在于，步驟②中，培養(yǎng)裝液量為2/5-3/5，溫度為35-37 °C。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種雙歧桿菌與枯草芽孢桿菌共生培養(yǎng)的方法，其特征在于，步驟③中，培養(yǎng)溫度為35-37 °C。7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種雙歧桿菌與枯草芽孢桿菌共生培養(yǎng)的方法，其特征在于，步驟如下: ①配制培養(yǎng)基:配制液態(tài)培養(yǎng)基，用碳酸鈣調(diào)PH6.8，121°C消毒20分鐘； ②把枯草芽孢桿菌接入①中配制好的培養(yǎng)基，在5升發(fā)酵罐中通氣培養(yǎng)，通氣速度為9升/分鐘，罐壓保持在0.3-0.5mpa,裝液量為3/5，溫度為35_37°C，轉(zhuǎn)速為135-140轉(zhuǎn)/分鐘； ③培養(yǎng)9h后，轉(zhuǎn)速改為35-40轉(zhuǎn)/分鐘，停止通氣，繼續(xù)培養(yǎng)1-1.5h后，接入雙歧桿菌共生培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速變?yōu)?5-30轉(zhuǎn)/分鐘，溫度為35-37°C ; ④培養(yǎng)26-28h后停止培養(yǎng)。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種雙歧桿菌與枯草芽孢桿菌共生培養(yǎng)的方法，其特征在于，步驟②中，所述的通氣培養(yǎng)，為通入含氧氣體。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種雙歧桿菌與枯草芽孢桿菌共生培養(yǎng)的方法，其特征在于，步驟②中，所述的通氣培養(yǎng)，為通入經(jīng)過(guò)過(guò)濾除菌的空氣。10.根據(jù)權(quán)利要求1或7所述的一種雙歧桿菌與枯草芽孢桿菌共生培養(yǎng)的方法，其特征在于，步驟④結(jié)束后加入保護(hù)劑制成冷凍干燥粉。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種雙歧桿菌與枯草芽孢桿菌共生培養(yǎng)的方法。本發(fā)明采用雙歧桿菌與枯草芽孢桿菌XWJLSP-1共生培養(yǎng)，在一定條件下實(shí)現(xiàn)了好氧菌與嚴(yán)格厭氧菌的共生培養(yǎng)，且使得雙歧桿菌這種培養(yǎng)要求苛刻的益生菌實(shí)現(xiàn)了在普通低成本的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。
【IPC分類】C12N1/20, C12R1/125, C12R1/01
【公開號(hào)】CN105200000
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510788513
【發(fā)明人】王棣, 王居亮, 王一, 王茜, 崔強(qiáng), 尹玉建
【申請(qǐng)人】山東西王糖業(yè)有限公司
【公開日】2015年12月30日
【申請(qǐng)日】2015年11月17日