干細(xì)胞培養(yǎng)基的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及及干細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種干細(xì)胞培養(yǎng)基。
【背景技術(shù)】
[0002]諸多研究表明干細(xì)胞不僅可以自我更新，在條件合適的情況下能分化成其他功能細(xì)胞，因此干細(xì)胞有望成為治療人類疑難疾病的有效手段。然而，干細(xì)胞在正常成體組織中含量甚微，在體外如何快速擴(kuò)增與培養(yǎng)干細(xì)胞培養(yǎng)是研究干細(xì)胞的作用機(jī)制及探索其在治療人類疾病治療方法的重要技術(shù)。
[0003]干細(xì)胞盡量含量甚微，但廣泛分布于哺乳動(dòng)物的各個(gè)組織器官，這些組織或器官包括但不局限于骨髓、臍帶、脂肪組織、腦組織、視網(wǎng)膜、心臟、肝臟、肺以及皮膚等。大量研究表明，這些低含量的干細(xì)胞在體外可以通過(guò)適當(dāng)?shù)姆椒ㄟM(jìn)行進(jìn)一步擴(kuò)增，最常規(guī)的一種干細(xì)胞培養(yǎng)基就是添加有10%胎牛血清的培養(yǎng)基。然而，采用這種培養(yǎng)基培養(yǎng)的干細(xì)胞，不僅生長(zhǎng)比較緩慢，而且傳遞次數(shù)超過(guò)5代之后其分化成功能細(xì)胞的潛能大大降低。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]為解決上述問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種干細(xì)胞培養(yǎng)基。
[0005]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為:
[0006]干細(xì)胞培養(yǎng)基，包括改良DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)基和添加劑，所述添加劑包括
[0007]碳酸氫鈉400-600 μ g/ml、氨基酸螯合砸8_20ng/ml、重組人胰島素生長(zhǎng)因子10-30ng/ml、重組人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子80_120ng/ml、重組人乳鐵蛋白7-13 μ g/ml,抗壞血酸50-70 μ g/ml、重組人血小板衍生生長(zhǎng)因子3-7 μ g/ml、重組人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子l_7ng/ml、二十八燒醇0.1-10 μ g/ml、聚乙稀醇0.1-10 μ g/ml、聚乙稀卩比略燒酮0.1-10 μ g/ml、重組人表皮生長(zhǎng)因子1_10 μ g/ml。
[0008]優(yōu)選地，所述改良DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)基包括DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)、維生素和營(yíng)養(yǎng)元素。
[0009]優(yōu)選地，所述維生素包括維生素C 1-50 μ g/ml，維生素B族30-100 μ g/ml，維生素E 10-100 μg/mL0
[0010]優(yōu)選地，所述營(yíng)養(yǎng)元素包括L-谷氨酰胺l_5mg/ml，蛋氨酸錳Ι-lOmg/ml，氯化鋅 l_5mg/ml、氨基酸螯合鎂 l_5mg/ml、砸蛋氨酸 1.5-5.5mg/ml、植酸酶 0.5-0.75mg/ml、P比啶酸絡(luò)0.055-0.065mg/ml、碘酸I丐0.1-0.3mg/ml、賴氨酸l_6mg/ml、三氯化六氨合鈷0.05-0.065mg/ml、蛋白錯(cuò) 0.55-0.75mg/ml、鵬酵母 2_6mg/ml、氣化銅 0.1-lmg/ml。
[0011]優(yōu)選地，所述添加劑包括碳酸氫鈉400 μ g/ml、氨基酸螯合砸8ng/ml、重組人胰島素生長(zhǎng)因子10ng/ml、重組人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子80ng/ml、重組人乳鐵蛋白7 μ g/ml,抗壞血酸50 μ g/ml、重組人血小板衍生生長(zhǎng)因子3 μ g/ml、重組人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子lng/ml、二十八燒醇0.1 μ g/ml、聚乙稀醇0.1 μ g/ml、聚乙稀P比略燒酮0.1 μ g/ml、重組人表皮生長(zhǎng)因子I μ g/ml ο
[0012]優(yōu)選地，所述添加劑包括碳酸氫鈉500 μ g/ml、氨基酸螯合砸14ng/ml、重組人胰島素生長(zhǎng)因子20ng/ml、重組人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子100ng/ml、重組人乳鐵蛋白10 μ g/ml、抗壞血酸60 μ g/ml、重組人血小板衍生生長(zhǎng)因子5 μ g/ml、重組人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子4ng/ml、二十八烷醇5.05 μ g/ml、聚乙烯醇5.05 μ g/ml、聚乙烯吡咯烷酮5.05 μ g/ml、重組人表皮生長(zhǎng)因子5.5 μ g/ml。
[0013]優(yōu)選地，所述添加劑包括碳酸氫鈉600 μ g/ml、氨基酸螯合砸20ng/ml、重組人胰島素生長(zhǎng)因子30ng/ml、重組人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子120ng/ml、重組人乳鐵蛋白13 μ g/ml、抗壞血酸70 μ g/ml、重組人血小板衍生生長(zhǎng)因子7 μ g/ml、重組人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子7ng/ml、二十八燒醇10 μ g/ml、聚乙稀醇10 μ g/ml、聚乙稀卩比略燒酮10 μ g/ml、重組人表皮生長(zhǎng)因10 μ g/ml。
[0014]本發(fā)明具有以下有益效果:
[0015]基能夠快速擴(kuò)增干細(xì)胞同時(shí)又不影響干細(xì)胞的潛能，干細(xì)胞的擴(kuò)增速度較常規(guī)培養(yǎng)基提高3-5倍，而且能用于培養(yǎng)多種組織的干細(xì)胞，具有極佳的適用性，所培養(yǎng)的干細(xì)胞分化能力強(qiáng)，可分化成多種功能細(xì)胞，具有很高的科研和醫(yī)學(xué)應(yīng)用價(jià)值，培養(yǎng)基成分明確，品質(zhì)穩(wěn)定，使得培養(yǎng)的干細(xì)胞在移植后不容易產(chǎn)生人體排斥反應(yīng)。
【具體實(shí)施方式】
[0016]為了使本發(fā)明的目的及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0017]實(shí)施例1
[0018]一種干細(xì)胞培養(yǎng)基，包括DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)、維生素C lyg/ml，維生素B族30 μ g/ml,維生素E 10 μ g/mL、L-谷氨酰胺lmg/ml，蛋氨酸猛lmg/ml，氯化鋅lmg/ml、氨基酸螯合鎂lmg/ml、砸蛋氨酸1.5mg/ml、植酸酶0.5mg/ml、P比啶酸絡(luò)0.055mg/ml、碘酸I丐0.lmg/ml、賴氨酸lmg/ml、三氯化六氨合鈷0.05mg/ml、蛋白鍺0.55mg/ml、碘酵母2mg/ml、氯化銅0.lmg/ml、碳酸氫鈉400 μ g/ml、氨基酸螯合砸8ng/ml、重組人胰島素生長(zhǎng)因子10ng/ml、重組人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子80ng/ml、重組人乳鐵蛋白7 μ g/ml、抗壞血酸50 μ g/ml、重組人血小板衍生生長(zhǎng)因子3 μ g/ml、重組人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子lng/ml、二十八燒醇0.1 μ g/ml、聚乙稀醇0.1 μ g/ml、聚乙稀P比略燒酮0.1 μ g/ml、重組人表皮生長(zhǎng)因子 I μ g/ml ο
[0019]實(shí)施例2
[0020]一種干細(xì)胞培養(yǎng)基，包括DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)、維生素C 50 μ g/ml，維生素B族100 μ g/ml，維生素 E 100 μ g/mL、L-谷氨酰胺 5mg/ml，蛋氨酸猛 10mg/ml，氯化鋅 5mg/ml、氨基酸螯合鎂5mg/ml、砸蛋氨酸5.5mg/ml、植酸酶0.75mg/ml、[!比啶酸絡(luò)0.065mg/ml、碘酸I丐0.3mg/ml、賴氨酸6mg/ml、三氯化六氨合鈷0.065mg/ml、蛋白鍺0.75mg/ml、碘酵母6mg/ml、氯化銅lmg/ml、碳酸氫鈉500 μ g/ml、氨基酸螯合砸14ng/ml、重組人胰島素生長(zhǎng)因子20ng/ml、重組人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子100ng/ml、重組人乳鐵蛋白10 μ g/ml、抗壞血酸60 μ g/ml、重組人血小板衍生生長(zhǎng)因子5 μ g/ml、重組人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子4ng/ml、二十八烷醇5.05 μ g/ml、聚乙烯醇5.05 μ g/ml、聚乙烯吡咯烷酮5.05 μ g/ml、重組人表皮生長(zhǎng)因子5.5 μ g/ml。
[0021]實(shí)施例3
[0022]一種干細(xì)胞培養(yǎng)基，包括DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)、維生素C 25.5 μ g/ml，維生素B族65 μ g/ml，維生素E 55 μ g/mL、L_谷氨酰胺3mg/ml，蛋氨酸猛5.5mg/ml，氯化鋅3mg/ml、氨基酸螯合鎂3mg/ml、砸蛋氨酸3.5mg/ml、植酸酶0.625mg/ml、[!比啶酸絡(luò)0.06mg/ml、碘酸I丐0.2mg/ml、賴氨酸3.5mg/ml、三氯化六氨合鈷0.0575mg/ml、蛋白鍺0.65mg/ml、碘酵母4mg/ml、氯化銅0.55mg/ml、碳酸氫鈉600 μ g/ml、氨基酸螯合砸20ng/ml、重組人胰島素生長(zhǎng)因子30ng/ml、重組人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子120ng/ml、重組人乳鐵蛋白13 μ g/ml、抗壞血酸70 μ g/ml、重組人血小板衍生生長(zhǎng)因子7 μ g/ml、重組人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子7ng/ml、二十八烷醇10 μ g/ml、聚乙烯醇10 μ g/ml、聚乙烯吡咯烷酮10 μ g/ml、重組人表皮生長(zhǎng)因10 μ g/mlο
[0023]以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以作出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.干細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于，包括改良DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)基和添加劑，所述添加劑包括 碳酸氫鈉400-600 μ g/ml、氨基酸螯合砸8_20ng/ml、重組人胰島素生長(zhǎng)10_30ng/ml、重組人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子80-120ng/ml、重組人乳鐵蛋白7_13 μ g/ml、抗壞血酸50-70 μ g/ml、重組人血小板衍生生長(zhǎng)因子3_7 μ g/ml、重組人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子l_7ng/ml、二十八燒醇0.1-10 μ g/ml、聚乙稀醇0.1-10 μ g/ml、聚乙稀R比略燒酮0.1-10 μ g/ml、重組人表皮生長(zhǎng)因子1_10 μ g/ml。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的干細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于，所述改良DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)基包括DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)、維生素和營(yíng)養(yǎng)元素。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的干細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于，所述維生素包括維生素C1-50 μ g/ml，維生素 B 族 30-100 μ g/ml，維生素 E 10-100 μ g/mL。4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的干細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于，所述營(yíng)養(yǎng)元素包括L-谷氨酰胺l-5mg/ml，蛋氨酸猛l-10mg/ml，氯化鋅l_5mg/ml、氨基酸螯合鎂l_5mg/ml、砸蛋氨酸1.5-5.5mg/ml、植酸酶 0.5-0.75mg/ml、吡啶酸鉻 0.055-0.065mg/ml、碘酸鈣 0.1-0.3mg/ml、賴氨酸l_6mg/ml、三氯化六氨合鈷0.05-0.065mg/ml、蛋白鍺0.55-0.75mg/ml、碘酵母2_6mg/ml、氯化銅 0.1-lmg/ml。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的干細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于，所述添加劑包括碳酸氫鈉400 μ g/ml、氨基酸螯合砸8ng/ml、重組人胰島素生長(zhǎng)因子10ng/ml、重組人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子80ng/ml、重組人乳鐵蛋白7 μ g/ml、抗壞血酸50 μ g/ml、重組人血小板衍生生長(zhǎng)因子3 μ g/ml、重組人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子lng/ml、二十八烷醇0.lyg/ml、聚乙烯醇0.1 μ g/ml、聚乙稀卩比略燒酮0.1 μ g/ml、重組人表皮生長(zhǎng)因子I μ g/ml。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的干細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于，所述添加劑包括碳酸氫鈉500 μ g/ml、氨基酸螯合砸14ng/ml、重組人胰島素生長(zhǎng)因子20ng/ml、重組人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子100ng/ml、重組人乳鐵蛋白10 μ g/ml、抗壞血酸60 μ g/ml、重組人血小板衍生生長(zhǎng)因子5 μ g/ml、重組人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子4ng/ml、二十八燒醇5.05 μ g/ml、聚乙稀醇5.05 μ g/ml、聚乙烯吡咯烷酮5.05 μ g/ml、重組人表皮生長(zhǎng)因子5.5 μ g/ml。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的干細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于，所述添加劑包括碳酸氫鈉600 μ g/ml、氨基酸螯合砸20ng/ml、重組人胰島素生長(zhǎng)因子30ng/ml、重組人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子120ng/ml、重組人乳鐵蛋白13 μ g/ml、抗壞血酸70 μ g/ml、重組人血小板衍生生長(zhǎng)因子7 μ g/ml、重組人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子7ng/ml、二十八烷醇10 μ g/ml、聚乙烯醇10 μ g/ml、聚乙烯吡咯烷酮10 μ g/ml、重組人表皮生長(zhǎng)因10 μ g/ml O
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種干細(xì)胞培養(yǎng)基，包括改良DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)基和添加劑，所述添加劑包括碳酸氫鈉、氨基酸螯合硒、重組人胰島素生長(zhǎng)因子、重組人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、重組人乳鐵蛋白、抗壞血酸、重組人血小板衍生生長(zhǎng)因子、重組人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子、二十八烷醇、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、重組人表皮生長(zhǎng)因子。本發(fā)明基能夠快速擴(kuò)增干細(xì)胞同時(shí)又不影響干細(xì)胞的潛能，干細(xì)胞的擴(kuò)增速度較常規(guī)培養(yǎng)基提高3-5倍，而且能用于培養(yǎng)多種組織的干細(xì)胞，具有極佳的適用性，所培養(yǎng)的干細(xì)胞分化能力強(qiáng)，可分化成多種功能細(xì)胞，具有很高的科研和醫(yī)學(xué)應(yīng)用價(jià)值，培養(yǎng)基成分明確，品質(zhì)穩(wěn)定，使得培養(yǎng)的干細(xì)胞在移植后不容易產(chǎn)生人體排斥反應(yīng)。
【IPC分類】C12N5/0789, C12N5/095, C12N5/0775, C12N5/0735, C12N5/0797, C12N5/074
【公開(kāi)號(hào)】CN105200008
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510717978
【發(fā)明人】李曉娟, 白瑞櫻, 郭勇, 王歌, 郭直岳, 朱曉謙, 王亞莉
【申請(qǐng)人】新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【公開(kāi)日】2015年12月30日
【申請(qǐng)日】2015年10月23日