咪唑并吡啶-6-甲酰-Met-Phe-OBzl，其合成，抗腫瘤活性和應(yīng)用
【專(zhuān)利說(shuō)明】咪畦并化惦-6-甲醜-Met-Phe-OBzI，其合成，抗腫瘤活性 和應(yīng)用 發(fā)明領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)公開(kāi)了 3H-咪哇并[4, 5-C]化巧-6-甲醜-Met-Phe-OBzl,公開(kāi)了它的制備 方法、涉及它對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的抑制作用，進(jìn)一步公開(kāi)了它對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用和對(duì)DNA 的桿插機(jī)制，因而本發(fā)明涉及它在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 惡性腫瘤嚴(yán)重威脅人類(lèi)的健康。在臨床腫瘤治療中，化療仍然占有最重要的地位。 可是，腫瘤多藥耐藥和交叉耐藥使得付出巨大勞動(dòng)發(fā)明的抗腫瘤藥物很快喪失療效。于是， 發(fā)明具有抗腫瘤和逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥的藥物一直是抗腫瘤藥物研究的前沿。
[0003] 在抗腫瘤藥物研究中，申請(qǐng)人曾經(jīng)用氨基酸予醋修飾四氨-目-巧晰-3-駿酸、 目-巧晰-3-駿酸及1-位取代的目-巧晰-3-駿酸，包括1-位取代的四氨-目-巧晰-3-駿 酸或1-位取代的目-巧晰-3-駿酸制備高效的抗腫瘤化合物。其中下面結(jié)構(gòu)的1-(己 基-AA-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋在8. 9ymol/kg劑量下顯示了明確的抗腫瘤作用。 按照與腫瘤細(xì)胞DNA相互作用的結(jié)構(gòu)要求，發(fā)明人相信3H-咪哇并[4,5-c]化巧-6-甲 醜-Met-Phe-OBzl可W對(duì)抗腫瘤作用產(chǎn)生正面影響。在送種思路的引導(dǎo)下，發(fā)明人提出了 本發(fā)明。
[0004]


【發(fā)明內(nèi)容】

[000引本發(fā)明的第一個(gè)內(nèi)容是提供3H-咪哇并[4, 5-C]化巧-6-甲醜-Met-Phe-OBzl。
[0006]
[0007] 本發(fā)明的第二個(gè)內(nèi)容是提供3H-咪哇并[4, 5-C]化巧-6-甲醜-Met-Phe-OBzl的 合成方法，該方法包括：
[0008] (1化-組氨酸在稀硫酸催化下與甲醒進(jìn)行Pictet-Spengler縮合生成6S-4, 5,6， 7-四氨-3H-咪哇并[4, 5-C]化巧-6-駿酸；
[0009] (2) 6S-4, 5,6, 7-四氨-3H-咪哇并[4, 5-C]化巧-6-駿酸轉(zhuǎn)化為 6S-4, 5,6, 7-四 氨-3H-咪哇并[4,5-c]化巧-6-甲酸甲醋；
[0010] (3)65-4,5,6,7-四氨-3護(hù)咪哇并[4,5-。]化巧-6-甲醋用高儘酸鐘氧化為3護(hù)咪 哇并[4, 5-c]化巧-6-甲酸甲醋；
[0011] (4)3H-咪哇并[4, 5-C]化巧-6-甲酸甲醋在化OH溶液（2腳中皂化成3H-咪哇并 [4, 5-C]化巧-6-甲酸；
[0012] 巧）Boc-Met與化e-OBzl偶聯(lián)得到Boc-Met-Phe-OBzl ;
[001引化)Boc-Met-Phe-OBzl在4N氯化氨的己酸己醋溶液中脫Boc保護(hù)基得到Met-Phe-OBzl；
[0014] (7) 3H-咪哇并[4,5-C]化巧-6-甲酸與Met-Phe-OBzl偶聯(lián)得到3H-咪哇并[4， 5-C]化巧-6-甲醜-Met-Phe-OBzl。
[001引本發(fā)明的第S個(gè)內(nèi)容是評(píng)價(jià)3H-咪哇并[4, 5-C]化巧-6-甲醜-Met-Phe-OBzl對(duì) 腫瘤細(xì)胞增殖的抑制作用。
[0016] 本發(fā)明的第四個(gè)內(nèi)容是評(píng)價(jià)3H-咪哇并[4, 5-C]化巧-6-甲醜-Met-Phe-OBzl對(duì) 荷S180小鼠腫瘤增長(zhǎng)的抑制作用。
[0017] 本發(fā)明的第五個(gè)內(nèi)容是評(píng)價(jià)3H-咪哇并[4, 5-C]化巧-6-甲醜-Met-Phe-OBzl對(duì) DNA的桿插作用。
【附圖說(shuō)明】
[001引 圖1. 3H-咪哇并[4, 5-C]化巧-6-甲醜-Met-Phe-OBzl的合成路線(xiàn).U肥冊(cè)，&0，H2S04,65°C;ii)MeOH,SOClz'CrC;iii)DMF，立己胺，KMn〇4;iv)NaOH,H20，(TC;v)二環(huán)己基 碳二亞胺值CO，I-居基苯并H哇化OBt)，N-甲基嗎晰（NMM)，四氨巧喃燈HF) ;vi)4N氯化 氨的己酸己醋溶液；Vii)二環(huán)己基碳二亞胺值CC) ,1-居基苯并H哇化OBt),N-甲基嗎晰 (NMM),DMFo
[0019] 圖2.化合物5與CT-DNA嵌插的粘度變化。
[0020] 圖3.采用固定DNA濃度，，化合物5與CT-DNA之間嵌插的紫外光譜。
[0021] 圖4.采用固定化合物5的濃度，化合物5與CT-DNA之間嵌插的英光光譜。
[002引圖5.化合物5與CT-DNA之間嵌插的英光光譜。
[002引圖6.化合物5與CT-DNA之間嵌插的圓二色散譜。
【具體實(shí)施方式】
[0024] 為了進(jìn)一步闡述本發(fā)明，下面給出一系列實(shí)施例。送些實(shí)施例完全是例證性的，它 們僅用來(lái)對(duì)本發(fā)明進(jìn)行具體描述，不應(yīng)當(dāng)理解為對(duì)本發(fā)明的限制。
[00幼實(shí)施例1制備6S-4,5,6, 7-四氨-3H-咪哇并[4,5-C]化巧-6-駿酸（1)
[002引 10.OOg(64.SmmoUk組氨酸，30血水混合于100血茄瓶中，冰浴下，用恒壓漏斗 逐滴加入2mL濃硫酸，隨濃硫酸的加入，原料逐漸溶解，待其完全溶解后，向反應(yīng)液中加入 40 %的甲醒溶液IOmU在微波加速反應(yīng)儀65C下反應(yīng)5小時(shí)。反應(yīng)完畢后，冰浴下緩慢滴加 濃氨水調(diào)溶液P冊(cè)-7,有大量無(wú)色沉淀析出，減壓過(guò)濾，得到10. 76g巧9. 2 % )標(biāo)題化合物， 為無(wú)色固體。ESI-MS(m/z) : 168[M+田+。
[0027] 實(shí)施例2制備6S-4,5,6,7-四氨-3H-咪哇并[4,5-c]化巧-6-甲酸甲醋似
[0028] 冰浴下在100血茄瓶里加15. 6血甲醇，用恒壓漏斗緩慢滴加1. 56血二氯亞諷， SOmin后加入1.00g(6mmol)6S-4,5,6,7-四氨-3H-咪哇并[4,5-c]化巧-6-駿酸似，室 溫反應(yīng)3天后，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)完全，反應(yīng)混合物減壓濃縮，殘留物加甲醇溶解并減壓濃縮。該 操作重復(fù)3次得無(wú)色泡狀固體，再加己離抽干重復(fù)3次得無(wú)色粉末，最后用甲醇/己離重結(jié) 晶得0. 58g(53%)標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。ESI-MS(m/z)181[M+田+。
[002引實(shí)施例3制備3H-咪哇并[4, 5-C]化巧-6-甲酸甲醋（3)
[0030]冰浴下在100血茄瓶里加1.Ig化.lmmol)6S-4,5,6,7-四氨-3H-咪哇并[4,5-c] 化巧-6-甲酸甲醋（3)，加DMF使溶解。向該溶液中滴加ImLH己胺調(diào)抑到8,分H次加入 1.2g(7.6mmol)高儘酸鐘。反應(yīng)6小時(shí)后，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)完畢。反應(yīng)物吹干，得到的黑色固體 用1畑Cl溶液溶解，冰浴下滴加2關(guān)aOH溶液調(diào)抑到7,析出大量無(wú)色固體。該固體W二氯 甲焼/甲醇為洗脫劑用硅膠柱純化，得0. 68g(63. 2%)標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。ESI-MS(m/ z)177[]\Wl]+。
[00引]實(shí)施例4制備3H-咪哇并[4, 5-C]化巧-6-駿酸（4)
[00礎(chǔ)冰浴下在100血茄瓶里力日40mLNa0H溶液（2腳，IOmin后力日入 5. 30g(29.9mmol)3H-咪哇并[4,5-c]化巧-6-甲酸甲醋（4)，反應(yīng)1小時(shí)后TLC顯示反應(yīng) 完畢，冰浴下向反應(yīng)液中滴加2NHCl溶液調(diào)抑到7,析出大量無(wú)色固體。該固體W二氯甲 焼/甲醇為洗脫劑用硅膠柱純化，得1.50g(30% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。ESI-MS(m/ z)163[]\Wl]+。
[0033]實(shí)施例 5 制備Boc-Met-Phe-Cffizl
[0034] 稱(chēng)取2. 49g(IOmmol)Boc-Met于100血茄形瓶中，加入50血THF。在冰浴和攬拌下 依次加入 1. 42g(10.Smmo1)冊(cè)化及 2. 68g(13mmol)DCC,活化 30min。稱(chēng)取 4. 48g(10. ,Smmol) TOS?化e-OBzl于50血小H角瓶中，用THF溶解后，用NMM調(diào)抑至7,然后將該溶液滴加至 茄形瓶的反應(yīng)液中，最后用NMM調(diào)反應(yīng)液抑值至8。室溫反應(yīng)過(guò)夜，TLC顯示反應(yīng)完畢后， 反應(yīng)混合物減壓濃縮至干，殘留物加IOOmL己酸己醋溶解，過(guò)濾除去二環(huán)己基脈值CU),濾 液層依次用飽和Na肥〇3水溶液巧OmLX3)，飽和化Cl水溶液巧OmLX3)，飽和K服〇4水溶液 (50血X3)，飽和化Cl水溶液（50血X3)，飽和化Cl水溶液（50血X3)，飽和Na肥化水溶液 巧OmLX如和飽和NaCl水溶液巧OmLX如各洗立遍，有機(jī)層用無(wú)水Na2S〇4干燥，過(guò)濾、濾液 減壓濃縮至干，得到的黃色粉末狀固體，經(jīng)石油離和己離磨洗得到3. 2g化5. 8% )標(biāo)題化合 物，為無(wú)色固體。ESI-MS(m/z) ;487[M+田+。
[0035]實(shí)施例 6 制備肥I?Met-Phe-OBzl
[0036]稱(chēng)取2. 49g (5. Immol) Boc-Met-Phe-OBzl于10OmT,茄形瓶中，加入20mT4N氯化氨 的己酸己醋溶液。冰浴下攬拌，反應(yīng)2小時(shí)，TLC顯示反應(yīng)完畢后。用水泉將己酸己醋抽 干。加入無(wú)水己酸己醋30ml，抽干，重復(fù)兩次。加入無(wú)水己離30ml，抽干，重復(fù)兩次。得 1.9g(90%)標(biāo)題化合物，為無(wú)色粉末。ESI-MSWz) ;421[M-田。
[0037]實(shí)施例7制備3H-咪哇并[4, 5-e]化巧-6-甲醜-Met-Phe-OBzUS)
[003引稱(chēng)取610mg化TmmoU3H-咪哇并[4,5-C]化巧-6-駿酸于250血茄形瓶中，加入 10OmLDMFn在冰浴和攬拌下依次加入 524mg(3. 88mmol)HOBt及 991mg(4.Slmmol)DCC,活化 30min。稱(chēng)取 1. 720g(4. 07mmol)肥 1 .Met-Phe-OBzl于 50血H角瓶中，用DMF溶解后，用NMM 調(diào)抑至7,然后將該溶液滴加至茄形瓶的反應(yīng)液中，最后用NMM調(diào)反應(yīng)液抑值至8。室溫 反應(yīng)過(guò)夜，TLC顯示反應(yīng)完畢后，反應(yīng)混合物減壓濃縮至干，殘留物加120mL己酸己醋溶解， 過(guò)濾除去二環(huán)己基脈值CU)，濾液層依次用飽和NaHC化水溶液化OmLX3)，飽和化Cl水溶液 (60血X3)，飽和皿S〇4水溶液（60血X3)，飽和化Cl水溶液（60血X3)，飽和化Cl水溶液 (60血X3)，飽和Na肥化水溶液（60血X扣和飽和化Cl水溶液（60血X扣各洗立遍，有機(jī)層 用無(wú)水Na2S〇4干燥，過(guò)濾、濾液減壓濃縮至干，得到的黃色油狀物經(jīng)硅膠柱層析純化（二氯 甲焼/甲醇為洗脫劑），得到的淡黃色固體，經(jīng)二氯甲焼/石油離重結(jié)晶得40mg化0% )標(biāo) 題化合物，為無(wú)色固體。ESI-MS(m/z) ;532[M+田 +;Mp;99-10(TC;[a]。25 = -14(c= 0. 1，甲 醇）；IR(邸r) ;3255，1735，1651，1577，1454，1249,941，667;iH-NMR(300MHz，DMS0-d6) :5/ ppm= 8. 99 (s，IH)，8. 75 (d，J= 9Hz，IH)，8. 70 (d，J= 9Hz，IH)，8. 55 (s，IH)，8. 25 (s，IH)， 7. 23 (m,IOH), 5. 08 (s, 2H) 4. 62 (m, 2H), 3. 10 (m,IH), 3. 99 (m,IH), 2. 40 (m, 2H),I. 99 (s, 3H), I. 94(m，2H)。
[003引實(shí)驗(yàn)例I評(píng)價(jià)化合物5對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的抑巧[J作用
[0040] 1)化合物5用含0. 1%DMSO的培養(yǎng)基配制成所需濃度。
[0041]。實(shí)驗(yàn)用的腫瘤細(xì)胞為MCF-7(人乳腺癌細(xì)胞），UzOS(人骨肉瘤細(xì)胞）， SH-SySy(人神經(jīng)母細(xì)胞瘤），化化T(人永生化表皮細(xì)胞），化-60(人早幼粒細(xì)胞白血病細(xì) 胞），K562(人白血病慢性粒細(xì)胞）。
[0042]