一種提高中溫ɑ-淀粉酶的酶活的方法
【專利說明】
[0001]技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及α-淀粉酶的生產(chǎn)方法，特別是一種提高中溫α-淀粉酶的酶活的方法。
[0002]【背景技術(shù)】:
中溫α-淀粉酶是一種十分重要的酶制劑，大量應(yīng)用于糧食加工、食品工業(yè)、釀造、發(fā)酵、紡織品工業(yè)和醫(yī)藥行業(yè)等，占整個酶制劑市場份額的25%左右；我國主要以枯草芽孢桿菌發(fā)酵法生產(chǎn)中溫α-淀粉酶，由于所產(chǎn)酶活不高，產(chǎn)量嚴重不足，每年需大量進口，造成數(shù)億美元的外匯損失。因此亟需一種可以工業(yè)化應(yīng)用的提高中溫α-淀粉酶的酶活的方法。
[0003]
【發(fā)明內(nèi)容】
:
本發(fā)明的目的是設(shè)計一種工藝方法簡單、并且生產(chǎn)效率較高的提高中溫α-淀粉酶的酶活的方法。
[0004]本發(fā)明的技術(shù)方案是，一種提高中溫α-淀粉酶的酶活的方法，其特征在于:它包括以下步驟:①將占發(fā)酵液總重量2%的枯草芽孢桿菌種子液接種到裝有2.5L發(fā)酵液的發(fā)酵罐中；?再控制通氣量，其通氣量為:按照發(fā)酵液體積與空氣體積的比例進行設(shè)置，在O?1h為1:0.4，在10-18h為1:0.8，在18h?發(fā)酵結(jié)束時為1:1.1 ;③在發(fā)酵過程中進行補料，補料培養(yǎng)基按照重量百分比為:麥芽糊精27.50%，豆餅粉8.75%，Na2HPO4.12H20
1.25%, (NH4)2SO4 0.5%, (NH4)2Cl 0.19%，CaCl2 0.25%，其余為水，每次補料 20mL，整個培養(yǎng)過程為51h-56h。所述的發(fā)酵液的組成為:按照重量百分比為:糊精5%，豆餅粉7%，Na2HPO4.12H20 1%，(NH4)2SO4 0.4%, (NH4)2Cl 0.15%, CaCl2 0.2%，其余為水。在培養(yǎng)的第
8-10h時向發(fā)酵罐中添加SNP，當(dāng)罐內(nèi)的SNP含量達到0.05-0.15 mmol/L時停止加入。所述的枯草芽孢桿菌為產(chǎn)中溫α-淀粉酶的Bacillus.Sub tilis BF7658。上文所述的SNP為亞硝基鐵氰化鈉。
[0005]本發(fā)明的方法制備工藝簡單、方便易行，無需增加特殊設(shè)備，成本低，介導(dǎo)后枯草芽孢桿菌產(chǎn)α -淀粉酶效率顯著增高，工業(yè)化生產(chǎn)效率高。
[0006]【具體實施方式】:
實施例1，
一種提高中溫α-淀粉酶的酶活的方法，它包括以下步驟:①將占發(fā)酵液總重量2%的枯草芽孢桿菌種子液接種到裝有2.5L發(fā)酵液的發(fā)酵罐中再控制通氣量，其通氣量為:按照發(fā)酵液體積與空氣體積的比例進行設(shè)置，在O?1h為1:0.4，在10-18h為1:0.8，在18h?培養(yǎng)結(jié)束時為1:1.1 ;③在發(fā)酵過程中進行補料，補料培養(yǎng)基按照重量百分比為:麥芽糊精 27.50%，豆餅粉 8.75%，Na2HPO4.12H20 1.25%, (NH4)2SO4 0.5%, (NH4)2Cl 0.19%,CaCl2 0.25%，其余為水，每次補料20mL，整個培養(yǎng)過程為51h。本實施例所述的發(fā)酵液的組成為:按照重量百分比為:糊精 5%，豆餅粉 7%，Na2HPO4.12H20 1%，(NH4)2SO4 0.4%，(NH4)2Cl0.15%，CaCl2 0.2%，其余為水；本實施例在培養(yǎng)的第8h時向發(fā)酵罐中添加亞硝基鐵氰化鈉，當(dāng)罐內(nèi)的亞硝基鐵氰化鈉含量達到0.05mmol/L時停止加入；本實施例所述的枯草芽孢桿菌為產(chǎn)中溫α-淀粉酶的ifeciWiAs.Subtilis BF7658。 實施例2，
一種提高中溫α-淀粉酶的酶活的方法，它包括以下步驟:①將占發(fā)酵液總重量2%的枯草芽孢桿菌種子液接種到裝有2.5L發(fā)酵液的發(fā)酵罐中再控制通氣量，其通氣量為:按照發(fā)酵液體積與空氣體積的比例進行設(shè)置，在O?1h為1:0.4，在10-18h為1:0.8，在18h?培養(yǎng)結(jié)束時為1:1.1 ;③在發(fā)酵過程中進行補料，補料培養(yǎng)基按照重量百分比為:麥芽糊精 27.50%，豆餅粉 8.75%，Na2HPO4.12H20 1.25%, (NH4)2SO4 0.5%, (NH4)2Cl 0.19%,CaCl2 0.25%，其余為水，每次補料20mL，整個培養(yǎng)過程為53h。本實施例所述的發(fā)酵液的組成為:按照重量百分比為:糊精 5%，豆餅粉 7%，Na2HPO4.12H20 1%，(NH4)2SO4 0.4%，(NH4)2Cl0.15%，CaCl2 0.2%，其余為水；本實施例在培養(yǎng)的第9h時向發(fā)酵罐中添加亞硝基鐵氰化鈉，當(dāng)罐內(nèi)的亞硝基鐵氰化鈉含量達到0.1OmmoI/L時停止加入；本實施例所述的枯草芽孢桿菌為產(chǎn)中溫α-淀粉酶的ifeciWiAs.Subtilis BF7658。
[0007]實施例3，
一種提高中溫α-淀粉酶的酶活的方法，它包括以下步驟:①將占發(fā)酵液總重量2%的枯草芽孢桿菌種子液接種到裝有2.5L發(fā)酵液的發(fā)酵罐中再控制通氣量，其通氣量為:按照發(fā)酵液體積與空氣體積的比例進行設(shè)置，在O?1h為1:0.4，在10-18h為1:0.8，在18h?培養(yǎng)結(jié)束時為1:1.1 ;③在發(fā)酵過程中進行補料，補料培養(yǎng)基按照重量百分比為:麥芽糊精 27.50%，豆餅粉 8.75%，Na2HPO4.12H20 1.25%, (NH4)2SO4 0.5%, (NH4)2Cl 0.19%,CaCl2 0.25%，其余為水，每次補料20mL，整個培養(yǎng)過程為56h。本實施例所述的發(fā)酵液的組成為:按照重量百分比為:糊精 5%，豆餅粉 7%，Na2HPO4.12H20 1%，(NH4)2SO4 0.4%，(NH4)2Cl
0.15%，CaCl2 0.2%，其余為水；本實施例在培養(yǎng)的第1h時向發(fā)酵罐中添加亞硝基鐵氰化鈉，當(dāng)罐的內(nèi)亞硝基鐵氰化鈉含量達到0.15mmol/L時停止加入；本實施例所述的枯草芽孢桿菌為產(chǎn)中溫α-淀粉酶的ifeciWiAs.Subtilis BF7658。
[0008]對上述各實施例加工結(jié)束后的發(fā)酵液檢測其中的α-淀粉酶酶活，發(fā)現(xiàn)酶活由421 U/mL提高至685U/mL，測定方法為:參照中溫α -淀粉酶活力測定QB-T 1803-1993。
[0009]上述實施例僅僅是為清楚地說明所作的舉例，而并非對實施方式的限定。對于所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在上述說明的基礎(chǔ)上還可以做出其它不同形式的變化或變動。這里無需也無法對所有的實施方式予以窮舉，而由此所引伸出的顯而易見的變化或變動仍處于本實用新型創(chuàng)造的保護范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項】
1.一種提高中溫α-淀粉酶的酶活的方法，其特征在于:它包括以下步驟:①將占發(fā)酵液總重量2%的枯草芽孢桿菌種子液接種到裝有發(fā)酵液的發(fā)酵罐中再控制通氣量，其通氣量為:按照發(fā)酵液體積與空氣體積的比例進行設(shè)置，在O?1h為1:0.4，在10-18h為1:0.8，在18h?發(fā)酵結(jié)束時為1:1.1 ;③在發(fā)酵過程中進行補料，補料培養(yǎng)基按照重量百分比為:麥芽糊精 27.50%，豆餅粉 8.75%，Na2HPO4.12H20 1.25%，(NH4)2SO4 0.5%，(NH4)2Cl0.19%，CaCl2 0.25%，其余為水，每次補料20mL，整個培養(yǎng)過程為51h_56h。2.如權(quán)利要求1所述的一種提高中溫α-淀粉酶的酶活的方法，其特征在于:所述的發(fā)酵液的組成為:按照重量百分比為:糊精5%，豆餅粉7%，Na2HPO4.12Η20 1%，(NH4)2SO4 0.4%，(NH4)2Cl 0.15%，CaCl2 0.2%，其余為水。3.如權(quán)利要求1所述的一種提高中溫α-淀粉酶的酶活的方法，其特征在于:在培養(yǎng)的第8-10h時向發(fā)酵液中添加亞硝基鐵氰化鈉，當(dāng)罐內(nèi)的亞硝基鐵氰化鈉含量達到0.05-0.15 mmol /I,時停止加入。4.如權(quán)利要求1所述的一種提高中溫α-淀粉酶的酶活的方法，其特征在于:所述的枯草芽孢桿菌為產(chǎn)中溫α-淀粉酶的Bacillus.Sub tills BF7658。
【專利摘要】一種提高中溫ɑ-淀粉酶的酶活的方法，它包括以下步驟：①將占發(fā)酵液總重量2%的枯草芽孢桿菌種子液接種到裝有2.5L發(fā)酵液的發(fā)酵罐中；②再控制通氣量，其通氣量為：按照發(fā)酵液體積與空氣體積的比例進行設(shè)置，在0～10h為1：0.4，在10-18h為1：0.8，在18h～發(fā)酵結(jié)束時為1：1.1；③在發(fā)酵過程中進行補料，補料培養(yǎng)基按照重量百分比為：麥芽糊精27.50%，豆餅粉8.75%，Na2HPO4·12H2O？1.25%，(NH4)2SO4？0.5%，(NH4)2Cl？0.19%，CaCl2？0.25%，其余為水，每次補料20mL，整個培養(yǎng)過程為51h-56h。本發(fā)明的方法制備工藝簡單、方便易行，無需增加特殊設(shè)備，成本低。
【IPC分類】C12N9/28, C12R1/125
【公開號】CN105219752
【申請?zhí)枴緾N201510723558
【發(fā)明人】孫俊良, 梁新紅, 胡梁斌, 王田林, 張永帥, 張萬利
【申請人】河南科技學(xué)院
【公開日】2016年1月6日
【申請日】2015年10月29日