一種新的檸檬苦素類化合物及其制備方法和醫(yī)藥用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及從東風(fēng)桔的干燥根中分離得到的一種具有血 管保護(hù)作用的檸檬苦素化合物及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 東風(fēng)桔Atalantiabuxifolia(Poir).Oliv.為蕓香科酒餅勒屬植物，始載于《嶺南 采藥錄》，目前為《全國中草藥匯編》及《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第三冊附錄收載。 東風(fēng)桔藥用根與根莖，其性辛、苦，微溫，歸肺、胃、脾經(jīng)，有祛風(fēng)解表、化痰止咳、理氣定痛的 功效。海南、廣西、廣東、福建等地歷來沿用本品治療急、慢性氣管炎，臨床效果較好，另外有 研究表明其具有較好的化痰、止咳、平喘的功效。東風(fēng)桔作為一種民間用藥，其療效明顯，而 且廣泛應(yīng)用于各大醫(yī)院復(fù)方中，引起了國內(nèi)外學(xué)者的興趣，對其研究逐漸深入。隨著研究的 不斷深入，東風(fēng)桔的化學(xué)成分和藥理活性越來越受到人們的重視。
[0003] 東風(fēng)桔包含的化學(xué)成分復(fù)雜多樣，迄今為止主要分離得到揮發(fā)油、檸檬苦素類、生 物堿、香豆素類、黃酮類等成分。檸檬苦素類化合物是由大戟烷或甘遂烷型三萜衍生而來的 一類高度氧化的四降三萜類化合物，是蕓香科植物主要特征的化學(xué)成分，結(jié)構(gòu)獨(dú)特，具有明 顯的抗癌和抗菌等生物活性。近年來的研究比較多，主要集中在其化學(xué)結(jié)構(gòu)、生物合成和生 物活性等方面。蕓香科植物中檸檬苦素類化合物主要分為3類：檸檬苦素苷元類、降解型檸 檬苦素類和糖苷型檸檬苦素類，其中以苷元居多。
[0004] 海南、廣西、廣東、福建等地歷來沿用東風(fēng)桔治療急、慢性氣管炎，取得了較好的臨 床效果，但對于本品藥理活性研究的文獻(xiàn)報道相對比較少。曾廣輝等報道東風(fēng)桔藥材具有 止咳、化痰的功效，能減少痰液蛋白的水平，其生物堿有解痙作用，平喘效果較好。東風(fēng)桔糖 衣片是以東風(fēng)桔的根與莖經(jīng)過水煎液提取而成，在對東風(fēng)桔糖衣片的止咳平喘藥理實(shí)驗(yàn)研 究中，用18~22g小鼠按成人20倍劑量ig給藥，濃氨水噴霧致咳，EDT5。為131. 9%，表明 其有止咳作用；用220~250g豚鼠以磷酸組織胺噴霧致喘，給藥前致喘時間為136s，給藥 后為412s，平喘有效率302. 94%，證明東風(fēng)桔糖衣片有平喘作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種從東風(fēng)桔的干燥根中分離得到的一種具有血管保護(hù)作 用的檸檬苦素化合物及其制備方法。
[0006] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的：
[0007] 具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，
[0008]
[0009]所述的化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：(a)東風(fēng)桔的干燥根粉碎， 用乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁 醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步驟（a)中乙酸乙 酯萃取物用大孔樹脂除雜，依次用10~20%乙醇和70~80%乙醇洗脫，收集70~80%乙 醇洗脫液，減壓濃縮得70~80 %乙醇洗脫物浸膏；（c)步驟（b)中70~80 %乙醇洗脫浸膏 用正相硅膠分離，依次用體積比為75~85:1、45~55:1、25~35:1、10~20:1和0. 5~ 1.5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到5個組分；（d)步驟（c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步 分離，依次用體積比為15~25:1、10~14:1和4~6:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到 3個組分；（e)步驟（d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為 65~75%的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~10個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的 化合物（I)。
[0010] 進(jìn)一步地，所述大孔樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。
[0011] 進(jìn)一步地，所述用乙醇熱回流提取采用的乙醇濃度為80~90%。
[0012] 進(jìn)一步地，所述用乙醇熱回流提取采用的乙醇濃度為85 %。
[0013] 進(jìn)一步地，步驟（b)中乙酸乙酯萃取物用大孔樹脂除雜，依次用15%乙醇和75% 乙醇洗脫，收集75 %乙醇洗脫液，減壓濃縮得75 %乙醇洗脫物浸膏。
[0014] 藥物組合物，其中含有治療有效量的所述的化合物（I)和藥學(xué)上可接受的載體。
[0015] 所述的化合物（I)在制備血管保護(hù)的藥物中的應(yīng)用。
[0016] 所述的藥物組合物在制備血管保護(hù)的藥物中的應(yīng)用。
[0017] 本發(fā)明化合物用作藥物時，可以直接使用，或者以藥物組合物的形式使用。
[0018] 該藥物組合物含有治療有效量的本發(fā)明化合物（I)，其余為藥物學(xué)上可接受的、 對人和動物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
[0019] 所述的可藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料 以及藥物制品輔劑。將本發(fā)明的藥物組合物以單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明藥物可 通過口服或注射的形式施用于需要治療的患者。用于口服時，可將其制成片劑、緩釋片、控 釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等；用于注射時，可制成滅菌的 水性或油性溶液、無菌粉針、脂質(zhì)體或乳劑等。
[0020] 說明書附圖
[0021] 圖1為化合物（I)結(jié)構(gòu)式；
[0022] 圖2為化合物（I)理論E⑶值與實(shí)驗(yàn)E⑶值比較。
【具體實(shí)施方式】
[0023] 下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護(hù)范 圍。盡管參照較佳實(shí)施例對本發(fā)明作了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對 本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和范圍。
[0024] 實(shí)施例1 :化合物（I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0025] 試劑來源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購自上海凌峰化 學(xué)試劑有限公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學(xué)試劑有限公司。
[0026]制備方法：（a)東風(fēng)桔的干燥根（8kg)粉碎，用85%乙醇熱回流提取（25LX3次）， 合并提取液，濃縮至無醇味（6L)，依次用石油醚（6LX3次）、乙酸乙酯（6LX3次）和水飽和 的正丁醇（6LX3次）萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物（355g)和正丁醇萃取 物；(b)步驟（a)中乙酸乙酯萃取物用AB-8型大孔樹脂除雜，依次用15%乙醇（8L)和75% (12L)乙醇洗脫，收集75%乙醇洗脫液，減壓濃縮得75%乙醇洗脫物浸膏（136g) ;(c)步驟 (b)中75%乙醇洗脫浸膏用正相硅膠分離，依次用體積比為80:1 (8個柱體積）、50:1 (8個 柱體積）、30:U6個柱體積）、15:1 (8個柱體積）和1:1 (5個柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯 度洗脫得到5個組分；(d)步驟（c)中組分4 (31g)用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比 為20:1 (8個柱體積）、12:1 (10個柱體積）和5:U6個柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯度洗 脫得到3個組分；（e)步驟（d)中組分2 (llg)用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體 積百分濃度為70 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8-10個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得 到純的化合物（I) (23mg)。
[0027]結(jié)構(gòu)確證：HR-ES頂S顯示[M+Na]+為m/z667. 3512,結(jié)合核磁特征可得分子式為 QAA。，不飽和度為 11。核磁共振氫譜數(shù)據(jù) 5H(ppm，DMS0-d6,400MHz) :H-1(3.48,ddd，J =8· 7,3· 2,2· 4)，Η-2(2· 24,m)，Η-2(1· 89,ddd，J= 16. 3,2· 8,2· 4)，Η-3(5· 01，dd，J= 2· 8, 2· 8)，Η-5 (2· 22,d，J= 12. 5)，Η-6 (4· 12,dd，J= 12. 5, 3· 2)，Η-7 (5· 73,d，J= 3· 2)， Η-9(2· 98,dd，J= 1L8,7· 3)，H-11(L66,L71，m)，H-12(L48,ddd，J= 13. 2,9· 8,2· 9)， Η-12(2·36,m)，Η-15 (5.80,s)，Η-18 (1.01，s)，Η-19 (0.99,s)，Η-21 (7.44,dd，J= 1.7， 0· 8)，Η-22 (6· 27,dd，J= 1· 7,0· 8)，Η-23 (7· 30,dd，J= 1· 7,1· 7)，Η-28 (3· 28,br，d，J= 7.6)，H-28(3.44，d，J= 7.6)，Η-29(1· 17,s)，H-30 (1.25,s)，H-2'（2.22,m)，H-3'（1.41， 1. 68,m)，H-4'（0· 90,t，J= 7. 5)，H-5'（1. 14,d，J= 7. 0)，H-2"（2. 22,m)，H-3"（1. 38， 1.65，m)，H-4"（0.82，t，J= 7·4)，Η-5"（1. 10，d