一種從杜仲葉粗提物中制備高純度綠原酸的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及制備高純度綠原酸的方法，具體地說(shuō)是一種從杜仲葉粗提物中制備高 純度綠原酸的方法，屬于天然產(chǎn)物提純領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 杜仲巧ucommiaulmoidesOliv.)是杜仲科杜仲屬植物，是我國(guó)特有的經(jīng)濟(jì)樹(shù)種， 主要分布在甘肅、浙江、河南、廣西、四川、云南等地區(qū)。杜仲是一種傳統(tǒng)的名貴中藥材，具有 有病治病，無(wú)病保健的功能，《神農(nóng)本草經(jīng)》中將杜仲列為上品。其藥用價(jià)值一直備受關(guān)注， 具有補(bǔ)中益氣、強(qiáng)筋骨、補(bǔ)肝腎、抗疲勞、安胎、降壓、抗菌消炎、增強(qiáng)免疫力、抗癌等藥理作 用（馬柏林等，杜仲中綠原酸的提取分離研究進(jìn)展，2003)。
[0003] 綠原酸間ilorogenicacid)，又名咖啡較酸，分子式為CieHifA)，相對(duì)分子質(zhì)量為 354. 30,純品綠原酸為淺黃色固體粉末。杜仲中含有豐富的綠原酸，其中在葉片中含量最 高，約為2%~5%。綠原酸作為傳統(tǒng)名貴中藥杜仲的主要有效活性成分之一，具有很高的 藥用價(jià)值，如保肝護(hù)膽、抗菌、抗病毒、降壓、增加腸胃蠕動(dòng)、治療糖尿病、增加白細(xì)胞數(shù)量及 興奮中樞神經(jīng)系統(tǒng)等多種功能，廣泛應(yīng)用于保健品行業(yè)、食品行業(yè)、醫(yī)藥行業(yè)及化妝品行業(yè) 等（于瑞濤等，大孔樹(shù)脂NKA-9分離純化杜仲葉中的綠原酸，2007)。
[0004] 目前我國(guó)提純制備綠原酸多W金銀花為原料，但金銀花貴重、來(lái)源有限，制取成本 高，大部分綠原酸仍靠進(jìn)口得到。研究表明，杜仲葉中含有豐富的綠原酸，其中的主要化學(xué) 成分和杜仲皮基本一致，且杜仲葉來(lái)源廣泛，價(jià)格便宜，僅占金銀花價(jià)格的1/20-1/40,因此 用杜仲葉替代杜仲皮、金銀花來(lái)提取綠原酸有很高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和社會(huì)意義（盧琪等，杜仲 綠原酸的分離純化及結(jié)構(gòu)鑒定，2010)。中國(guó)專(zhuān)利201410678520. 8公開(kāi)了"一種從杜仲葉提 取液中純化綠原酸的方法"，采用大孔樹(shù)脂吸附和脫色精制方法從杜仲葉提取液中制備綠 原酸的方法，充分利用了我國(guó)豐富的杜仲葉資源。
[0005] 查閱文獻(xiàn)了解到膜分離技術(shù)，大孔樹(shù)脂分離純化技術(shù)和活性炭脫色技術(shù)均已用于 制備綠原酸工藝中，但Ξ者聯(lián)用技術(shù)在制備高純度綠原酸的研究中還未見(jiàn)有報(bào)道。另外，本 制備綠原酸技術(shù)方案還將洗脫液洗脫步驟和除雜步驟串聯(lián)操作，節(jié)省了操作程序和時(shí)間， 提高了綠原酸純度，純度可高達(dá)97%。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的在于采用膜分離，大孔樹(shù)脂柱吸附及除雜，活性炭脫色精制和冷凍 干燥聯(lián)用技術(shù)從杜仲葉粗提物中制備高純度綠原酸。
[0007] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為：
[0008] 一種從杜仲葉粗提物中制備高純度綠原酸的方法：
[0009] 1)W杜仲葉粗提物為原料，將其用去離子水充分溶解得杜仲葉粗提物水溶液，而 后通過(guò)膜分離，收集透過(guò)液；
[0010] 。將透過(guò)液經(jīng)串聯(lián)的樹(shù)脂吸附柱進(jìn)行吸附、并除雜，收集洗脫液并經(jīng)濃縮，濃縮液 經(jīng)活性炭精制后，冷凍干燥得高純度綠原酸。
[0011] 所述串聯(lián)的樹(shù)脂吸附柱為大孔樹(shù)脂A吸附柱和大孔樹(shù)脂B除雜柱串聯(lián)所得；所述 透過(guò)液經(jīng)大孔樹(shù)脂A柱吸附，而后流加洗脫液洗脫并串聯(lián)大孔樹(shù)脂B柱進(jìn)行除雜。
[0012] 所述大孔樹(shù)脂A吸附柱為極性或中極性大孔樹(shù)脂吸附柱；大孔樹(shù)脂B吸附柱為非 極性大孔樹(shù)脂吸附柱。 陽(yáng)01引 所述大孔樹(shù)脂A吸附柱為NKA-9型、HPD-450型、ADS-7型、ADS-F8型或S-8型大 孔樹(shù)脂吸附柱；大孔樹(shù)脂B吸附柱為BS-65型、D1400型、ADS-8型、HPD-300型或化07型大 孔樹(shù)脂吸附柱。
[0014] 所述步驟1)W杜仲葉粗提物為原料，將其由去離子水充分溶解得杜仲葉粗提物 水溶液，而后水溶液通過(guò)截留分子量為1000的超濾膜進(jìn)行分離，收集透過(guò)液，待用；其中， 杜仲葉粗提物與去離子水的比例為1 :5-1 :20(g/ml)。
[0015] 所述步驟2)將透過(guò)液經(jīng)大孔樹(shù)脂A柱吸附飽和后，用去離子水洗至流出液無(wú) 色，流加洗脫液洗脫并串聯(lián)大孔樹(shù)脂B柱進(jìn)行除雜，收集除雜后的洗脫液至高效液相色譜 0PLC)檢測(cè)無(wú)綠原酸流出，再將收集的洗脫液減壓濃縮、膜濃縮得濃縮液，將所得濃縮液加 入至活性炭，室溫?cái)埌栉?，再用乙醇洗脫，收集洗脫液，洗脫液?jīng)膜濃縮、減壓濃縮后得到 的濃縮液，濃縮液冷凍干燥得到純度為97%W上的高純度綠原酸。
[0016]所述透過(guò)液W1-10BVA的流速經(jīng)過(guò)大孔樹(shù)脂A吸附柱進(jìn)行充分吸附至飽和，然 后用去離水W2-6BVA淋洗至無(wú)色，而后再用體積分?jǐn)?shù)為10-100 %的乙醇溶液W5-9BVA 依次流經(jīng)吸附柱A柱和除雜柱B柱進(jìn)行洗脫和除雜，收集除雜后的洗脫液至高效液相色譜 0PLC)檢測(cè)無(wú)綠原酸流出，再將收集的洗脫液減壓濃縮、膜濃縮至原體積的10-15%。
[0017] 所述濃縮液每1血加入5-55mg活性炭，室溫?cái)埌栉?0-70min，再用10-100%乙 醇洗脫，收集洗脫液。洗脫液經(jīng)膜濃縮、減壓濃縮后得到的濃縮液，濃縮液冷凍干燥得到純 度為97%W上的高純度綠原酸。
[001引所述活性炭采用10-100目的食品脫色專(zhuān)用活性炭；所述活性炭經(jīng)再生后可重復(fù) 利用，其中，再生液為無(wú)水乙醇。
[0019]所述大孔樹(shù)脂A和大孔樹(shù)脂B經(jīng)再生后均可再利用，其中，再生液為無(wú)水乙醇。
[0020] 本發(fā)明有益效果在于：
[0021] 1.本發(fā)明聯(lián)用了膜分離技術(shù)，大孔樹(shù)脂分離純化技術(shù)和活性炭精制技術(shù)Ξ項(xiàng)技 術(shù)，依次處理后得到高純度的綠原酸，而不是W往的采取單一技術(shù)得到純度較低的綠原酸， 因此本發(fā)明為制備高純度綠原酸產(chǎn)品提供了思路和方法。另外，本發(fā)明還把大孔樹(shù)脂柱洗 脫及除雜步驟在同一設(shè)備中串聯(lián)完成，節(jié)省了時(shí)間和操作步驟，減少了綠原酸的損失。再 者，本發(fā)明技術(shù)方案采用了較大型設(shè)備對(duì)原料進(jìn)行處理，可一次性處理較大量樣品，工藝簡(jiǎn) 單可行，操作方便，試劑可回收利用，活性炭和大孔樹(shù)脂也可回收再生重復(fù)利用，成本較小， 適用于工業(yè)化生產(chǎn)。
[0022] 2.本發(fā)明采用杜仲葉粗提物為原料，變廢為寶，促進(jìn)了杜仲資源的合理利用，擴(kuò)大 綠原酸的原料來(lái)源，降低了綠原酸的生產(chǎn)成本，有較好的經(jīng)濟(jì)效益、環(huán)境效益和社會(huì)效益。
[0023] 3.本發(fā)明采用膜分離技術(shù)，能有效去除蛋白質(zhì)、多糖等大分子雜質(zhì)，降低了后續(xù)處 理的難度，提高了純化效果。
[0024] 4.本發(fā)明將洗脫液洗脫步驟和除雜步驟串聯(lián)操作，通過(guò)陰陽(yáng)交換柱設(shè)備，洗脫液 洗脫出的綠原酸直接經(jīng)過(guò)除雜柱進(jìn)行除雜，經(jīng)過(guò)此步處理既可w得到純度較高的綠原酸粗 品，也可W同時(shí)達(dá)到連續(xù)操作的目的，減少了操作程序次數(shù)，降低了制備成本，有較好的應(yīng) 用前景。
[0025] 5.本發(fā)明采用活性炭脫色精制技術(shù)，對(duì)綠原酸粗品既有脫色作用，又能精制綠原 酸，得到高純度的綠原酸產(chǎn)品。
[0026] 6.本發(fā)明分別采用不同型號(hào)的大孔樹(shù)脂對(duì)綠原酸進(jìn)行吸附和除雜，吸附速率快， 吸附容量大，選擇性好，除雜效果好，操作簡(jiǎn)單，適合綠原酸的高純度制備。
[0027] 7.本發(fā)明采用冷凍干燥的方法對(duì)濃縮液進(jìn)行干燥處理，得到純度較高的綠原酸產(chǎn) 品。
【附圖說(shuō)明】
[0028]圖1為本發(fā)明實(shí)施例提供從杜仲葉粗提物中制備高純度綠原酸的工藝流程圖。
【具體實(shí)施方式】
[0029]W下實(shí)施實(shí)例是對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步說(shuō)明，但本發(fā)明的內(nèi)容并不局限于此。
[0030] 本發(fā)明W杜仲葉粗提物為原料，用去離子水充分溶解配制成杜仲葉粗提物水溶 液，水溶液通過(guò)超濾膜分離后收集濾液，濾液經(jīng)大孔樹(shù)脂A柱吸附至飽和，流加洗雜液洗 雜至流出液無(wú)色，然后用洗脫液洗脫，同時(shí)串聯(lián)通過(guò)大孔樹(shù)脂B柱除雜至高效液相色譜 OPLC)檢測(cè)無(wú)綠原酸流出，收集乙醇洗脫液，洗脫液經(jīng)納濾膜濃縮，減壓濃縮，活性炭脫色 精制后，冷凍干燥得純度為97%W上的高純度綠原酸。
[0031] 本發(fā)明制備方法的創(chuàng)新點(diǎn)在于采用了陰陽(yáng)交換柱設(shè)備，把吸附、洗脫及除雜操作 程序在同一設(shè)備中完成，節(jié)省了時(shí)間和操作步驟。另外，該制備方法還采用了較大型設(shè)備對(duì) 原料進(jìn)行處理，可一次性處理大量樣品，工藝簡(jiǎn)單可行，操作方便，試劑綠色無(wú)污染并可回 收利用，活性炭和大孔樹(shù)脂也可回收再生重復(fù)利用，成本較小，適用于工業(yè)化生產(chǎn)，具有較 好的社會(huì)效益、經(jīng)濟(jì)效益和環(huán)境效益。 陽(yáng)0巧 實(shí)施例1
[0033]lOOg杜仲葉粗提物，加入500ml水充分溶解，攬拌配制成杜仲葉粗提物水溶液，用 PH計(jì)調(diào)水溶液PH為4,將上述水溶液先通過(guò)截留分子量為1000的超濾膜進(jìn)行膜分離，收 集透過(guò)液，將透過(guò)液W10BVA的流速經(jīng)過(guò)NKA-9型大孔樹(shù)脂進(jìn)行充分吸附至飽和，用去離 子水W3BV/h的流速淋洗上述大孔樹(shù)脂柱至流出液無(wú)色，此時(shí)將NKA-9型大孔樹(shù)脂A柱和 ADS-8型大孔樹(shù)脂B柱串聯(lián)一起，再用60%乙醇溶液W8BV/h的流速依次通過(guò)A柱和B柱 進(jìn)行洗脫和除雜，收集得到除雜后的洗脫液至高效液相色譜0PLC)檢測(cè)無(wú)綠原酸流出，收 集到乙醇洗脫液，先通過(guò)截留分子量為200的納濾膜進(jìn)行膜濃縮，再經(jīng)減壓濃縮得濃縮液， 將濃縮液和活性炭按l:5(ml/mg)混合充分吸附30