一種胸腺肽α1脫鹽的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及胸腺膚α1脫鹽的方法，尤其是設(shè)及一種批量化產(chǎn)業(yè)化胸腺膚α1脫 鹽的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 胸腺膚是胸腺分泌的具有生物活性的多膚的混和物，是一種免疫增強(qiáng)劑。在機(jī)體 的免疫系統(tǒng)、神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)中起到重要的調(diào)節(jié)作用。它能夠改善機(jī)體的免疫狀 態(tài)，協(xié)調(diào)內(nèi)分泌，提高機(jī)體對(duì)細(xì)菌病毒感染的抵抗力。胸腺膚已經(jīng)用于多種疾病的輔助治 療，療效顯著，在飼料中添加亦能起到促生長(zhǎng)作用。胸腺膚含有的多種多膚均具有一定的藥 效，其中一些已經(jīng)用于疾病的治療。
[0003] 胸腺膚α1是一種治療慢性乙型肝炎和增強(qiáng)免疫系統(tǒng)反應(yīng)性的多膚類(lèi)藥物。多項(xiàng) 體外試驗(yàn)顯示，該膚通過(guò)刺激外周血液淋己細(xì)胞絲裂原來(lái)促進(jìn)Τ淋己細(xì)胞的成熟，增加抗 原或絲裂原激活后Τ細(xì)胞分泌的干擾素α、干擾素丫W(wǎng)及白介素2、白介素3等淋己因子 水平，同時(shí)增加Τ細(xì)胞表面淋己因子受體水平。該膚還可通過(guò)對(duì)CD4細(xì)胞的激活，增強(qiáng)異體 和自體的人類(lèi)混合淋己細(xì)胞反應(yīng)。該膚可能增加前ΝΚ細(xì)胞的聚集，而干擾素可使其細(xì)胞毒 性增強(qiáng)。體內(nèi)試驗(yàn)顯示，該膚可W提高經(jīng)刀豆蛋白A激活后小鼠淋己細(xì)胞白介素2受體的 表達(dá)水平，同時(shí)提高白介素2的分泌水平。
[0004] 多膚在合成、裂解及純化的過(guò)程中，會(huì)使用大量的TFA(Ξ氣乙酸）、醋酸、等，從而 引入了大量對(duì)人體有害的酸根離子，特別是TFA酸根，在純化后干燥前必須去除運(yùn)些有害 的酸根離子。目前使用Se地adexG25(葡聚糖凝膠G25)柱或者使用離子交換樹(shù)脂（專(zhuān)利 號(hào)200910304817. 7)進(jìn)行脫鹽的方法，不但耗時(shí)長(zhǎng)，前處理比較麻煩，而且一次樣品處理量 小，工作效率低，重現(xiàn)性比較差，不適合于大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】
陽(yáng)0化]本發(fā)明的目的在于提供一條適于大規(guī)模工業(yè)化胸腺膚α1脫鹽的方法，主要解決 使用離子交換樹(shù)脂進(jìn)行脫鹽存在的耗時(shí)長(zhǎng)，前處理比較麻煩，而且一次樣品處理量小，工作 效率低，重現(xiàn)性比較差，不適合于大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)的技術(shù)問(wèn)題。
[0006] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下：一種純化胸腺膚α1的方法，包括如下 步驟： 1)將胸腺膚α1溶液W0. 45μm濾膜過(guò)濾，調(diào)節(jié)抑為6-8 ; 2 )固定相為十八烷基硅膠鍵合硅膠的反相硅膠柱，水溶液為A相，甲醇溶液為B相，采 用HPLC法脫鹽，收集目的峰值的膚溶液； 3)將最終收集的膚溶液減壓旋蒸濃縮冷凍干燥，得粉末狀成品膚。
[0007] 優(yōu)選的方案是：所述B相的甲醇溶液為色譜純。所述色譜甲醇溶液的濃度為 20-60%，檢測(cè)波長(zhǎng)為220皿。
[0008] 優(yōu)選的方案是：所述的A相為純水。
[0009] 本發(fā)明的有益技術(shù)效果：本發(fā)明提供了一種胸腺膚α 1脫鹽的工藝，采用HPLC法 去除胸腺膚α1中的有害酸根離子。利用色譜原理對(duì)酸根離子不能吸附而能吸附膚類(lèi)物質(zhì) 的特點(diǎn)進(jìn)行離子交換，從而達(dá)到有效去除酸根離子的目的。使用HPLC法脫鹽，生產(chǎn)成本低， 工藝簡(jiǎn)單，環(huán)境污染低，便于工業(yè)化實(shí)施。
【具體實(shí)施方式】
[0010] 實(shí)施例1 1.樣品處理：稱(chēng)取5g胸腺膚α1溶解后，溶液調(diào)節(jié)抑值為7,用孔徑為0.45um濾膜過(guò) 濾后收集濾液。
[0011] 2.脫鹽 條件：色譜柱：W十八烷基硅膠鍵合硅膠為固定相的色譜柱，柱子直徑和長(zhǎng)度為： 5cmX25cm.流動(dòng)相：A相：，水溶液巧相：甲醇溶液。流速：60-80ml/min。檢測(cè)波長(zhǎng)：220皿。 濃度梯度：B% :20-60%，30-50min。
[0012] 過(guò)程：將色譜柱用質(zhì)量百分濃度5%的B相平衡好后上樣，線性梯度洗脫，收集目的 峰，將收集好的膚溶液放置收集瓶中。
[0013]3.將轉(zhuǎn)鹽后所得的所有膚溶液，進(jìn)行減壓濃縮至lg/50ml，濃縮溫度不超過(guò)37°C， 然后冷凍干燥得胸腺膚α1樣品，收率88. 2%，含鹽0. 44%。
[0014] 實(shí)施例2 1.樣品處理：稱(chēng)取40g胸腺膚α1溶解后，溶液調(diào)節(jié)抑值為8,用孔徑為0. 45um濾膜 過(guò)濾后收集濾液。 陽(yáng)0巧]2.脫鹽 條件：色譜柱：W十八烷基硅膠鍵合硅膠為固定相的色譜柱，柱子直徑和長(zhǎng)度為： 10cmX25cm.流動(dòng)相：A相：水溶液；B相：甲醇溶液。流速：180-200ml/min。檢測(cè)波長(zhǎng)： 220nm。濃度梯度：B%:20-60%，30-50min。
[0016] 過(guò)程：將色譜柱用質(zhì)量百分濃度5%的B相平衡好后上樣，線性梯度洗脫，收集目的 峰，將收集好的膚溶液放置收集瓶中。
[0017] 3.將轉(zhuǎn)鹽后所得的所有膚溶液，進(jìn)行減壓濃縮至lg/50ml，濃縮溫度不超過(guò)37°C， 然后冷凍干燥得胸腺膚α1樣品，收率90. 4%，含鹽0. 36%。 陽(yáng)〇1引 實(shí)施例3 1.樣品處理：定量胸腺膚α1純化后溶液含量為5. 5g，溶液調(diào)節(jié)抑值為6. 5,用孔徑 為0. 45um濾膜過(guò)濾后收集濾液。
[0019] 2.脫鹽 條件：色譜柱：W十八烷基硅膠鍵合硅膠為固定相的色譜柱，柱子直徑和長(zhǎng)度為： 5cmX25cm.流動(dòng)相：A相：水溶液；B相：甲醇溶液。流速：60-80ml/min。檢測(cè)波長(zhǎng)：220皿。 濃度梯度：B% :20-60%，30-50min。
[0020] 過(guò)程：將色譜柱用質(zhì)量百分濃度5%的B相平衡好后上樣，。線性梯度洗脫，收集目 的峰，將收集好的膚溶液放置收集瓶中。
[0021] 3.將轉(zhuǎn)鹽后所得的所有膚溶液，進(jìn)行減壓濃縮至lg/50ml，濃縮溫度不超過(guò)37°C， 然后冷凍干燥得胸腺膚α1樣品，收率89. 3%，含鹽0. 26%。 陽(yáng)0巧 實(shí)施例4 1.樣品處理：定量胸腺膚α1純化后溶液含量為42g，溶液調(diào)節(jié)抑值為7. 5,用孔徑為 0. 45um濾膜過(guò)濾后收集濾液。 陽(yáng)02引 2.脫鹽 條件：色譜柱：W十八烷基硅膠鍵合硅膠為固定相的色譜柱，柱子直徑和長(zhǎng)度為： 10cmX25cm.流動(dòng)相：A相：純水；B相：色譜純甲醇溶液。流速：180-200ml/min。檢測(cè)波長(zhǎng)： 220nm。濃度梯度：B%:20-60%，30-50min。
[0024]過(guò)程：將色譜柱用質(zhì)量百分濃度5%的B相平衡好后上樣，線性梯度洗脫，收集目的 峰，將收集好的膚溶液放置收集瓶中。
[00巧]3.將轉(zhuǎn)鹽后所得的所有膚溶液，進(jìn)行減壓濃縮至lg/50ml，濃縮溫度不超過(guò)37°C， 然后冷凍干燥得胸腺膚α1樣品，收率91. 2%，含鹽0. 23%。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種胸腺肽α1脫鹽的方法，其特征是包括如下步驟： 1) 將胸腺肽α1溶液以0. 45μm濾膜過(guò)濾，調(diào)節(jié)pH為6-8 ; 2) 固定相為十八烷基硅膠鍵合硅膠的反相硅膠柱，水溶液為A相，甲醇溶液為B相，采 用HPLC法脫鹽，收集目的峰值的肽溶液； 3) 將最終收集的肽溶液減壓旋蒸濃縮冷凍干燥，得粉末狀成品肽。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種胸腺肽α1脫鹽的方法，其特征是：A相為純水，B相為色 譜純甲醇溶液。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種胸腺肽α1脫鹽的方法，其特征是：所述HPLC法脫鹽，B相 的濃度梯度為20-60%，檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種胸腺肽α1利用反相高效液相色譜脫鹽的方法，主要解決使用離子交換樹(shù)脂進(jìn)行脫鹽存在的耗時(shí)長(zhǎng)，前處理比較麻煩，而且一次樣品處理量小，工作效率低，重現(xiàn)性比較差，不適合于大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)的技術(shù)問(wèn)題。本發(fā)明技術(shù)方案包括如下步驟：1）將胸腺肽α1純化后的溶液調(diào)節(jié)pH為6-8，以0.45μm濾膜過(guò)濾后待用，以固定相為十八烷基鍵合硅膠的反相硅膠柱，水溶液為A相，甲醇溶液為B相，進(jìn)行梯度洗脫純化，收集目的峰值的肽溶液；將最終的肽溶液減壓旋蒸濃縮冷凍干燥，得粉末狀成品肽。本發(fā)明用于批量化產(chǎn)業(yè)化胸腺肽α1脫鹽。
【IPC分類(lèi)】C07K1/04, C07K14/575, C07K1/34
【公開(kāi)號(hào)】CN105254746
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510675097
【發(fā)明人】徐紅巖, 秦敬國(guó)
【申請(qǐng)人】吉爾生化（上海）有限公司
【公開(kāi)日】2016年1月20日
【申請(qǐng)日】2015年10月19日