主鏈含雙抗癌藥兩親性高分子、制備方法及其納米膠束的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于化學合成藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體設及一種主鏈含雙抗癌藥兩親性高分 子、制備方法及其納米膠束。
【背景技術(shù)】
[000引 自1965年Rosenberg意外地發(fā)現(xiàn)了順銷抗癌活性W來，順銷、卡銷及奧沙利銷等 二價銷藥作為癌癥化療藥物用W治療一半W上的癌癥，如睪丸癌、膀脫癌、肺癌等。然而J頓 銷等銷藥幾乎缺乏選擇性，對正常組織和器官造成了極大的毒副作用，降低了病人對藥物 的耐受度。更為嚴重的是，很多癌癥對順銷等銷藥表現(xiàn)出先天耐藥性，或者在多次化療后產(chǎn) 生后天獲得耐藥性，都進一步限制了銷藥的化療效用并增加了后期治療的難度。
[0003] 二價銷藥的"四價化"改性近年來受到了研究者們的重視。八面體結(jié)構(gòu)的四價銷 藥相比二價銷藥，其惰性程度較高，在血液循環(huán)中不易水解失活，毒副作用較低，而進入腫 瘤細胞后卻可W在細胞內(nèi)還原環(huán)境下還原成更具抗癌活性的二價銷藥發(fā)揮作用，故又稱為 "四價銷前藥"。
[0004] 然而，就癌癥治療而言單一化療藥物的效果往往是有限的，尤其是針對上述多種 機制并存的順銷耐藥性，僅靠銷藥自身往往無法獲得良好的綜合效果。近年來研究與臨床 結(jié)果表明，將兩種或兩種W上化療藥物同時或先后應用進行聯(lián)合化療是一種非常有吸引力 的化療手段，和單獨藥物化療相比，聯(lián)合化療能夠作用于腫瘤細胞不同的分子祀點，最大化 不同藥物的化療效果甚至逆轉(zhuǎn)耐藥性。然而無論上述哪種四價銷前藥形式的聯(lián)合化療，依 然存在體內(nèi)分布廣，易被代謝，生物利用率低，有時毒副作用還更大等問題。
[0005] 納米藥物控制釋放體系尤其是高分子納米控制釋放體系，能夠延長藥物血液循環(huán) 時間，改善藥代動力學；增加藥物溶解性，控制釋放降低藥物的毒副作用和免疫原性；通過 "EPR效應"在腫瘤部位被動祀向蓄積藥物，主動祀向修飾進一步增加腫瘤細胞主動攝取藥 物。
[0006] 因此，將四價銷前藥，聯(lián)合化療W及高分子納米控制釋放體系相結(jié)合，設計簡單、 確定、可控、有效的高分子納米聯(lián)合藥物輸送體系并解決順銷毒性和耐藥性等問題依然有 非常大的探索和研究空間?；诖耍诒緦＠暾埲诉x用兩親性嵌段配位高分子納米體系 進行聯(lián)合藥物輸送：即針對腫瘤細胞產(chǎn)生順銷耐藥性的細胞內(nèi)銷藥攝取蓄積減少機制、增 強的損傷DNA修復機制和解毒機制，選用能夠抑制蛋白憐酸酶（PP2A)活性阻斷損傷DNA修 復的化療藥物去甲基斑莖素（demethylcantharidin，DMC)與銷藥聯(lián)用，設計主鏈含雙抗癌 藥高分子膠束體系。該兩親性嵌段配位高分子納米聯(lián)合藥物輸送體系與其它結(jié)合四價銷 前藥的高分子納米聯(lián)合藥物輸送體系有很大的不同：一是通過一步縮聚反應就可W合成主 鏈含有上述兩種化療藥物的兩親性嵌段配位高分子并自組裝成納米膠束，制備簡單、結(jié)構(gòu) 明確；二是含有兩種藥物的四價銷前藥作為單體直接參與聚合，藥物間比例精確確定的同 時減少了其它輔料提高了藥物在體系中的負載比例；Ξ是該體系藥物是在主鏈上的，可W 避免突釋；而進入細胞后四價銷藥在細胞內(nèi)還原環(huán)境下或者光照條件下會還原釋放二價銷 藥，使得膠束主鏈結(jié)構(gòu)迅速崩解；隨后通過溶酶體酸性環(huán)境酸解釋放去甲基斑莖素，因此該 體系具有非?？煽氐募毎麅?nèi)祀向藥物釋放能力；四是該體系同時針對腫瘤細胞產(chǎn)生順銷耐 藥性的多種耐藥機制即四價銷前藥緩和的解毒機制，去甲基斑莖素阻斷的DNA修復機制W 及納米膠束增加的細胞攝取機制，多種機制共同作用下W期徹底逆轉(zhuǎn)順銷耐藥性。本專利 研究為解決高分子納米聯(lián)合輸送體系中的問題提供了全新的設計思路，同時為有效逆轉(zhuǎn)順 銷耐藥性和重新認識癌癥順銷耐藥性機制等關(guān)鍵科學問題奠定實驗研究基礎(chǔ)。本專利成果 的運用一方面有望在臨床上克服目前常用的抗癌藥物存在的毒副作用大的缺點，另一方面 可通過兩親性嵌段配位高分子納米聯(lián)合藥物輸送體系逆轉(zhuǎn)順銷耐藥性的策略，開辟一條具 有實際應用價值的簡單、確定、可控、有效的抗癌新路徑，具有相當大的社會效益和經(jīng)濟效 益。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的是為了提供一種主鏈含雙抗癌藥兩親性高分子、制備方法及其納米 膠束，該高分子具有較高的抗腫瘤活性和較低的細胞毒性。
[0008] 本發(fā)明首先提供一種主鏈含雙抗癌藥兩親性高分子，具有式（I)所示結(jié)構(gòu)：
[0009]
(I)
[0010] 其中，表示聚乙二醇mPEG-NHz或mPEG-OH;
[0011] ，，…，，隸示四價銷斑莖素配合物或四價銷去甲斑基莖素配合物；
[001引 胃一表示二胺。
[0013] 優(yōu)選的是，所述的二胺為乙二胺、下二胺或贓嗦。
[0014] 本發(fā)明還提供一種主鏈含雙抗癌藥兩親性高分子的制備方法，包括如下：
[001引步驟一：將銷（Π)化合物與雙氧水反應，得到銷（IV)化合物；
[0016] 步驟二：將步驟一得到的銷（IV)化合物和斑莖素反應，或者將步驟一得到的銷 (IV)化合物和去甲基斑莖素反應，得到銷（IV)斑莖素配合物或銷（IV)去甲基斑莖素配合 物；
[0017] 步驟Ξ:將步驟二得到的銷（IV)斑莖素配合物或銷（IV)去甲基斑莖素配合物和 二胺、聚乙二醇反應，得到主鏈含雙抗癌藥兩親性高分子。
[0018] 優(yōu)選的是，所述的銷（II)化合物為順銷、奧沙利銷、卡銷或二價銷雙疊氮配合物。
[0019] 優(yōu)選的是，所述的二價銷雙疊氮配合物的結(jié)構(gòu)如下：
[0020]
[0021] 優(yōu)選的是，所述的步驟二的反應溫度為65-70°C，反應時間為12-2地。
[0022]優(yōu)選的是，所述的銷（IV)化合物和斑莖素的摩爾比為1 :(2-6)，銷（IV)化合物和 去甲斑莖素的摩爾比為1:(2-6)。
[0023] 優(yōu)選的是，所述的將步驟二得到的銷（IV)斑莖素配合物或銷（IV)去甲基斑莖素 配合物和二胺、聚乙二醇反應，具體步驟為：
[0024] ①將1-乙基-3-二甲氨丙基-碳二亞胺和N-徑基班巧酷亞胺加入到銷（IV)斑 莖素配合物或銷（IV)去甲基斑莖素配合物中，加入二胺反應，得到反應溶液；
[0025] ②將聚乙二醇加入上述反應溶液中反應，得到主鏈含雙抗癌藥兩親性高分子。
[0026] 優(yōu)選的是，所述的銷（IV)斑莖素配合物、二胺和聚乙二醇摩爾比為1: (0.9-0.95) :(0.2-0.4);銷（IV)去甲基斑莖素配合物、二胺和聚乙二醇摩爾比為1 : (0. 9-0. 95) : (0. 2-0. 4)。
[0027] 優(yōu)選的是，所述的①的反應溫度為室溫，反應時間為24-7化。
[0028] 優(yōu)選的是，所述的②的反應溫度為室溫，反應時間為12-2地。
[0029] 本發(fā)明還提供上述主鏈含雙抗癌藥兩親性高分子制備得到的納米膠束。
[0030] 本發(fā)明的有益效果
[0031] 本發(fā)明首先提供一種主鏈含雙抗癌藥兩親性高分子，結(jié)構(gòu)式如式（I)所示，該兩 親性高分子將四價銷斑莖素配合物或四價銷去甲斑莖素配合物引入高分子主鏈中，四價銷 斑莖素或四價銷去甲斑莖素配合物為主體，通過酷胺鍵連接作為疏水段，聚乙二醇鏈為親 水段，得到的高分子具有較高的抗腫瘤活性和較低的細胞毒性。
[0032] 本發(fā)明還提供一種主鏈含雙抗癌藥兩親性高分子的制備方法，該方法是將四價銷 與斑莖素或去甲基斑莖素配合使用，再經(jīng)酷胺化縮聚生成兩親性嵌段配位直鏈高分子，該 制備方法簡單、原料易得。
[0033] 本發(fā)明還提供上述主鏈含雙抗癌藥兩親性高分子制備得到的納米膠束，對制備的 納米膠束進行細胞毒性測試，細胞毒性實驗結(jié)果表明，本發(fā)明提供的納米膠束對癌細胞如 人肺腺癌A549細胞有很強的殺傷效果，提高銷類藥物的抗癌效果。
【附圖說明】
[0034] 圖1為本發(fā)明實施例4得到的順銷去甲基斑莖素配合物的核磁譜圖；
[0035] 圖2為本發(fā)明實施例4得到的順銷去甲基斑莖素配合物的質(zhì)譜譜圖；
[0036] 圖3為本發(fā)明實施例4制備得到的順銷去甲基斑莖素配合物和本發(fā)明實施例4制 備得到主鏈含雙抗癌藥兩親性高分子mPEGzk-Pt-mPEGzk的紅外光譜圖；
[0037] 圖4為本發(fā)明實施例4制備得到的主鏈含雙抗癌藥兩親性高分子 mPEGzk-Pt-mPEGzk的GPC譜圖；
[0038] 圖5為本發(fā)明實施例11制備得到的主鏈含雙抗癌藥兩親性高分子藥物 mPEGzk-Pt-mPEGzk納米膠束的DLS圖；
[0039] 圖6為本發(fā)明實施例11制備得到的主鏈為雙抗癌藥兩親性高分子藥物 mPEGzk-Pt-mPEGzk納米膠束的掃描電鏡照片；
[0040] 圖7為順銷、去甲基斑莖素、本發(fā)明實施例4中順銷去甲基斑莖素配合物W及本發(fā) 明實施例11中mPEGzk-Pt-mPEGzk納米膠束分別處理L929細胞2地，4化和72h的細胞毒性 曲線圖；
[00川圖8為順銷、去甲基斑莖素、本發(fā)明實施例4中順銷去甲基斑莖素配合物W及本發(fā) 明實施例11中mPEGzk-Pt-mPEGzk納米膠束分別處理化La細胞2地，4化和72h的細胞毒性 曲線圖；
[004引圖9為順銷、去甲基斑莖素、本發(fā)明實施例4中順銷去甲基斑莖素配合物W及本發(fā) 明實施例11中mPEGzk-Pt-mPEGzk納米膠束分別處理A549細胞2地，4化和72h的細胞毒性 曲線圖。
【具體實施方式】
[0043] 本發(fā)明首先提供一種主鏈含雙抗癌藥兩親性高分子，具有式（I)所示結(jié)構(gòu)：
[0044]
(I)
[004引其中，細WWW:表示聚乙二醇mPEG-NHz或mPEG-OH，所述的聚乙二醇的數(shù)據(jù)分子量 優(yōu)選為 1000-5000 ;
[0046].....，隸示四價銷斑莖素配合物或四價銷去甲基斑莖素配合物；
[0