1-(乙基氨基酸芐酯)-β-咔啉-3-羧酸芐酯,納米結(jié)構(gòu),制備,活性和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及1-(己基-Val-Glu(OBzI)-OBzI)-目-巧晰-3-駿酸予醋及其制備方 法，涉及它抑制腫瘤細(xì)胞增殖的活性，涉及它對(duì)荷S180小鼠腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用，進(jìn)一步 涉及它逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞耐藥的作用。因而本發(fā)明涉及它在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明 屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域。 技術(shù)背景
[0002] 近年來(lái)，鑒于全球癌癥發(fā)病率和死亡率急劇上升，癌癥已經(jīng)成為了一個(gè)世界問(wèn)題。 我國(guó)的癌癥患者人數(shù)處于世界前列，癌癥患者人數(shù)不斷增加，對(duì)抗腫瘤藥的需求也不斷增 加。目前臨床應(yīng)用的抗腫瘤藥物存在許多局限性，隨著科技的進(jìn)步W及科學(xué)的發(fā)展，尋找安 全有效的抗腫瘤新藥是藥物研究的熱點(diǎn)之一。
[0003] 癌癥是一組可影響身體任何部位的多種疾病的通稱。使用的其它術(shù)語(yǔ)為惡性腫瘤 和賞生物。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，癌癥是世界上的頭號(hào)死因之一，尤其是在發(fā)展中國(guó)家。而 全世界癌癥死亡人數(shù)預(yù)計(jì)將繼續(xù)上升，到2030年將超過(guò)1310萬(wàn)。因此，開(kāi)發(fā)新的高效，低 毒，毒副作用小的抗腫瘤藥物一直是新藥研究的重要課題之一。
[0004] 隨著對(duì)腫瘤特性和發(fā)病本質(zhì)的認(rèn)識(shí)，最近幾年抗腫瘤藥物不斷從傳統(tǒng)的細(xì)胞毒藥 物向發(fā)展非細(xì)胞毒藥物過(guò)渡。目-巧晰是天然來(lái)源的細(xì)胞毒性抗腫瘤化合物。發(fā)明人認(rèn)識(shí) 至IJ，目-巧晰抗腫瘤的細(xì)胞毒性本質(zhì)是與腫瘤細(xì)胞DNA之間的嵌插。送種形式的桿插可造成 細(xì)胞毒性。發(fā)明人曾經(jīng)發(fā)現(xiàn)，目-巧晰可W插入腫瘤細(xì)胞DNA之間的雙螺旋堿基之間。在進(jìn) 一步的研究中，發(fā)明人認(rèn)識(shí)到，目-巧晰的抗腫瘤活性來(lái)自嵌插。發(fā)明人還認(rèn)識(shí)到，在目-巧 晰的1位引入二膚生成目-巧晰-3-駿酸予醋及衍生物可增強(qiáng)目-巧晰與腫瘤細(xì)胞的作 用，增強(qiáng)抗腫瘤活性。根據(jù)送些認(rèn)識(shí)，發(fā)明人提出1-(己基-Val-Glu(OBzl)-OBzl)-目-巧 晰-3-駿酸予醋。與發(fā)明人前期的發(fā)明1-(己基-AA-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋相比， 本發(fā)明的突出創(chuàng)造性在于，保留了目-巧晰與腫瘤細(xì)胞DNA之間的嵌插作用，在低劑量下顯 示高抗腫瘤活性。于是，1-(己基-Val-Glu (OBzl)-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋顯示了良 好的抑制腫瘤細(xì)胞增殖作用和抗腫瘤活性。
[000引發(fā)明的內(nèi)容
[0006] 本發(fā)明的第一個(gè)內(nèi)容是提供下式的1-(己基-Val-Glu(OBzl)-OBzl)-目-巧 晰-3-駿酸予醋。
[0007]
[0008] 本發(fā)明的第二個(gè)內(nèi)容是提供1-(己基-Val-Glu(OBzl)-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸 予醋的制備方法，該方法包括：
[0009] (1)將心色氨酸予醋在H氣醋酸的催化下與1，1，3,3-四甲氧基丙焼進(jìn)行 Pictet-Spengler縮合，得到1- (2, 2-二甲氧己基）-1，2, 3,4-四氨-目-巧晰-3-駿酸予 醋；
[0010] 似將1-化2-二甲氧己基）-1，2,3,4-四氨-目-巧晰-3-駿酸予醋在四氨巧喃 中，用高儘酸鐘水溶液氧化得到1- (2，2-二甲氧己基）-目-巧晰3-駿酸予醋；
[00川做在冰醋酸、濃鹽酸、混合液中1-化2-二甲氧己基）-目-巧晰3-駿酸予醋水解 為1-己醒基-目-巧晰3-駿酸予醋；
[001引 （4)將1-己醒基-0 -巧晰3-駿酸予醋與肥1 ?Val-Glu(OBzl)-OBzl偶聯(lián)得到 1-(己基-Val-Glu(OBzl) -OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋。
[0013] 本發(fā)明的第H個(gè)內(nèi)容是評(píng)價(jià)1-(己基-Val-Glu(OBzl)-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸 予醋抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用。
[0014] 本發(fā)明的第四個(gè)內(nèi)容是評(píng)價(jià)1-(己基-Val-Glu(OBzl)-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸 予醋抑制S180腫瘤小鼠腫瘤生長(zhǎng)的作用。
[0015] 本發(fā)明的第五個(gè)內(nèi)容是測(cè)定1-(己基-Val-Glu(OBzI)-OBzI)-目-巧晰-3-駿酸 予醋逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞耐藥的作用。
[0016] 本發(fā)明的第六個(gè)內(nèi)容是闡述1-(己基-Val-Glu(OBzl)-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸 予醋的納米結(jié)構(gòu)。
【附圖說(shuō)明】
[0017] 圖1 1-(己基-Val-Glu(OBzl)-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋的合成路線.U多 聚磯酸，苯甲醇；ii) H氣醋酸，1，1，3,3-四甲氧基丙焼；iii)高儘酸鐘，四氨巧喃，水；iv)溶濃鹽酸，冰醋酸，水；V)N-甲基嗎晰，無(wú)水硫酸鎮(zhèn)，氯基測(cè)氨化鋼，Val-Glu(OBzl)-OBzl。 [001引圖2 1-(己基-Val-Glu(OBzl)-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋在抑7. 4環(huán)境中，濃 度為6X 10 濃度下的透射電鏡照片。
【具體實(shí)施方式】
[0019] 為了進(jìn)一步闡述本發(fā)明，下面給出一些列實(shí)施例.送些實(shí)施例完全是例證性的， 它們僅用來(lái)對(duì)本發(fā)明進(jìn)行具體描述，不應(yīng)當(dāng)理解為對(duì)本發(fā)明的限制。
[0020] 實(shí)施例1制備1-化2-二甲氧己基）-1，2,3,4-四氨-目-巧晰-3-駿酸予醋
[0021] 先將5gk色氨酸予醋用飽和胞肥〇3水溶液洗，用70血己酸己醋萃取，共萃取 3次，醋相用飽和氯化鋼溶液洗至中性，無(wú)水硫酸鋼干燥，過(guò)濾至250mL的圓底燒瓶中，濾 液減壓濃縮至干得4g無(wú)色固體.在100血的圓底燒瓶中，先將4mLl，1，3, 3-四甲氧基丙 焼溶于40mL二氯甲焼溶劑中，再加入4mLH氣醋酸，活化45min，在冰浴下，將剛剛得到的 4g無(wú)色固體加入到反應(yīng)瓶中.反應(yīng)52小時(shí)，化C(石油離/丙麗=4/1)顯示反應(yīng)完成，用 飽和NaHC〇3水溶液中和反應(yīng)液中的酸，然后用70mL二氯甲焼萃取，共萃取3次.二氯甲 焼層用飽和氯化鋼水溶液洗至中性，二氯甲焼相用無(wú)水硫酸鋼干燥，過(guò)濾，濾液減壓濃縮， 殘留物用硅膠濕法柱層析純化，得到3. 5g(51 % )標(biāo)題化合物，為黃色油狀物.ESI-MS(m/ 6)395[]\1+田+。
[002引實(shí)施例2制備1-化2-二甲氧己基）-目-巧晰3-駿酸予醋
[0023] 將Sg(12.7mmol)1- (2, 2-二甲氧己基）-1，2, 3,4-四氨-目-巧晰-3-駿酸予醋， 與150mL四氨巧喃加入到250mL的茄瓶中，冰浴攬拌，分批加入5g(31.6mmol)高儘酸鐘的 水溶液，室溫反應(yīng)5小時(shí)，TLC(石油離/丙麗=4/1)顯示反應(yīng)完成，過(guò)濾，并加入四氨巧喃 沖洗濾餅，濾液減壓濃縮，再將殘余水相用70mL二氯甲焼提取，共提取3次，合并的二氯甲 焼相，用飽和食鹽水洗涂3次，無(wú)水硫酸鋼干燥，過(guò)濾，濾液減壓濃縮，殘留物用硅膠濕法柱 層析純化，再用石油離-丙麗重結(jié)晶得到3g(60% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體.ESI/MS(m/ 6)391[]?+田+。
[0024] 實(shí)施例3制備1-己醒基-目-巧晰3-駿酸予醋
[002引先加入72血冰醋酸使344mg(ImmoU1-化2-二甲氧己基）-目-巧晰3-駿酸予醋 完全溶解，再依次加入9mL濃鹽酸和9mL水.攬拌地，TLC顯示原料斑點(diǎn)消失，反應(yīng)化合物 加入大量冰水混合物，攬拌使大量固體析出，過(guò)濾并用90mL冰水沖洗濾餅.收集濾餅，充分 干燥，備下一步反應(yīng)使用。
[0026] 實(shí)施例4制備1-(己基-Val-Glu(OBzl)-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋巧）
[0027]冰浴下，往 550mg(l. 2mmol)肥1 ?Val-Glu(OBzl)-OBzl與 20ml無(wú)水四氨巧喃的 溶液中滴加N-甲基嗎晰調(diào)節(jié)溶液抑值至8,往溶液中加344mg(Immol) 1-己醒基-目-巧 晰-3-駿酸予醋與20mL二氯甲焼的懸浮液，攬拌10分鐘后加入200mg無(wú)水硫酸鎮(zhèn)攬拌 15分鐘.往反應(yīng)混合物中加63mg(lmmol)氯基測(cè)氨化鋼，室溫?cái)埌?比.化C(C肥Is/MeOH =27/1)顯示反應(yīng)完成.反應(yīng)混合物過(guò)濾，濾液減壓濃縮，剩余物加入飽和NaHC〇3水溶液 溶解，得到的溶液用50ml己酸己醋液萃取，共萃取3次.己酸己醋層用飽和氯化鋼溶液 洗至中性，收集的己酸己醋相用無(wú)水硫酸鋼干燥，過(guò)濾，濾液減壓濃縮，得到的糖漿狀物先 后經(jīng)硅膠柱層析（二氯甲焼/甲醇=50/1)及制備薄層層析（二氯甲焼/甲醇=22/1) 純化，得到94mg(12. 5% )標(biāo)題化合物，為淡黃色油狀物.651-18〇11/6)755.9[1±田+; [CC巧4.2 =-14.769(C= 0.33,CH3OH);IR化Br) :3346. 50,3078. 39,3039. 81,2960. 73， 2872.01,1865. 17,1826. 59,1718. 58,1701. 22,1680.00,1653.00,1624.06,1560.41, 1458. 18, 1425. 40,1375. 25,1340. 53,1282. 66,1253. 73,1213.23,1155.36,1136.07, 1001. 06,985. 62,831. 32,785. 03,746. 45,742. 59,731. 02,719. 45,698. 23cm'；'H NMR(300MHz，CDCI3) 5/ppm;10. 43(s，lH)，8. 7^s，lH)，8. 16(d，J= 9. 0Hz，lH)，7. 92(d，J =9.OHz，IH)，7. 59 ~7. 48 (m，4H)，7. 56 ~7. 25 (m，13H)，5. 52(s，2H)，5. 30 (d，J= 12.OHz, 1H)，5. 21(d，J= 12. 0Hz，lH)，5. 10(m，2H)，4. 83(m，lH)，3. 52(m，lH)，3. 36(m，lH)，3. 13(d， J= 9.0Hz，1H) ,3.10 (d，J= 6.0Hz，1H) ,2.98 (m，lH) ,2.46 (m，2H) ,2.26 (m，2H) ,2.08 (m, 3H)，1.01(d，J= 9. 0Hz，3H)，0. 97(d，J=6. 0Hz，3H)。
[0028] 實(shí)驗(yàn)例I測(cè)定化合物5對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的抑制作用
[0029] 1)本發(fā)明的化合物5用含0. 1 %DMSO的培養(yǎng)基配巧喊所需濃度。
[0030] 2)實(shí)驗(yàn)用的腫瘤細(xì)胞為化-60(人早幼粒細(xì)胞白血病細(xì)胞）、A549(肺癌細(xì)胞）、 Bel7402 (肝癌細(xì)胞）、SH-sy5y(人神經(jīng)母細(xì)胞瘤）、S180 (小鼠腹水瘤細(xì)胞）、MCF-7 (人乳 腺癌細(xì)胞）。
[0031] 3)實(shí)驗(yàn)方法HL-60,MCF-7,Bel-7402,A549 和S180 細(xì)胞選用RPMI-1640 培養(yǎng)基； SH-sy5y細(xì)胞選用DMEM培養(yǎng)基.培養(yǎng)基中均含10 %經(jīng)滅活的胎牛血清和1XIO5IVL青霉 素和lOOmg/L鏈霉素。
[0032] 貼壁細(xì)胞MCF-7,Bel-7402,A549,SH-sy5y和半貼壁細(xì)胞S180的培養(yǎng)：分別將生 長(zhǎng)狀態(tài)良好，