一種愈創(chuàng)木烷型倍半萜類化合物及其制備方法和應用
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術領域，特別涉及從現(xiàn)有中成藥制劑中提取的愈創(chuàng)木烷型倍半 萜類化合物及其制備方法和應用。
【背景技術】
[0002] 熱毒寧注射液（國藥準字Z20050217)為江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司自主研發(fā)的 原中藥二類新藥，其處方為青蒿、金銀花、梔子，輔料為聚山梨酯80。熱毒寧注射液在外感風 熱所致感冒、流感、咳嗽、上呼吸道感染等疾病的臨床治療中應用廣泛，其作用迅速、效果顯 著。
[0003] 研究人員在熱毒寧注射液中發(fā)現(xiàn)了新的化學成分，并且發(fā)現(xiàn)此化合物在各個批次 的熱毒寧注射液中均穩(wěn)定存在。經(jīng)查閱文獻可知，這是首次在熱毒寧注射液中發(fā)現(xiàn)并鑒定 出的新的化學成分，并經(jīng)過Scifinderscholar檢索發(fā)現(xiàn)該化合物為新化合物。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明從熱毒寧注射液中制備提取出一種具有生物活性的愈創(chuàng)木烷型倍半萜類 化合物，并提供了其在制備治療手足口病藥物中的應用。
[0005] 具體地說，本發(fā)明提供了一種新的愈創(chuàng)木烷型倍半萜類化合物，其結構如（I)所 示：
[0006]
[0007] 本發(fā)明還提供了上述化合物的制備方法，包括如下步驟：
[0008] (1)取熱毒寧注射液成品，經(jīng)HP-20大孔吸附樹脂色譜柱分離，依次以水、30%乙 醇、90~100 %乙醇梯度洗脫，分別收集各洗脫液，減壓濃縮至無醇味，得到水洗脫部位、 30%乙醇洗脫部位、90~100%乙醇洗脫部位；
[0009] ((2)取步驟（1)的90~100%乙醇洗脫部位，經(jīng)硅膠柱色譜分離，用氯仿-甲醇梯 度洗脫，以氯仿-甲醇體積比為95 : 5的洗脫液洗脫3~5BV，洗脫液合并，標記為餾分A， 餾分A經(jīng)SephadexLH-20柱色譜分離，氯仿-甲醇等體積、等度洗脫，去除色素帶后，收集餾 分，標記為A-2,餾分A-2經(jīng)0DS柱色譜分離，用甲醇-水梯度洗脫，其中甲醇濃度為50%~ 70%，收集甲醇-水體積比為3 : 2的餾分A-2-2,餾分A-2-2經(jīng)半制備液相分離，得到本發(fā) 明化合物。
[0010] 上述制備方法中，步驟（2)所述半制備液相色譜，以比例為25 : 75的乙腈-水為 流動相，檢測波長為208與220nm，流速4mL/min，柱溫為常溫。在半制備液相上，本發(fā)明化 合物的保留時間分別為31. 2min。
[0011] 發(fā)明人通過理化性質和現(xiàn)代波譜學手段（UV、IR、MS、⑶、1H-NMR、13C-NMR和 2D-NMR)對分離得到的化合物進行了結構鑒定，證實其為結構如式I所示的愈創(chuàng)木烷型倍 半萜類化合物。
[0012] 本發(fā)明的另一個目的在于提供一種圖（I)所示化合物在制備治療手足口病藥物 中的應用。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)本發(fā)明化合物對手足口病EV71病毒有一定的抑制作用。
[0013] 本發(fā)明的再一個目的在于提供一種藥物組合物，包含上述圖（I)所示化合物。
[0014] 本發(fā)明還提供了一種治療手足口病的藥物組合物，含有治療有效量的上述圖（I) 化合物以及一種或多種藥學上可接受的載體。
【附圖說明】
[0015] 圖 1 為化合物的HR-ESI-Q-T0F-MS
[0016] 圖2為化合物的1H-NMR譜
[0017] 圖3為化合物的13C_NMR譜和DEPT-135譜
[0018] 圖4為化合物的1H」HCOSY譜
[0019] 圖5為化合物的HMBC譜
[0020] 圖6為化合物的N0ESY譜
[0021] 圖7為化合物的⑶譜
[0022] 圖8為化合物的HSQC譜
[0023] 圖9為化合物的結構式
【具體實施方式】
[0024] 為了使本領域的技術人員更好地理解本發(fā)明的技術方案，下面結合具體實施例對 本發(fā)明作進一步的詳細說明。
[0025] 實施例1本發(fā)明化合物的制備
[0026] (1)取熱毒寧注射液成品，經(jīng)HP-20大孔吸附樹脂色譜柱分離，依次以水、30%乙 醇、95%乙醇梯度洗脫，分別收集各洗脫液，減壓濃縮至無醇味，得到水洗脫部位、30 %乙醇 洗脫部位、95%乙醇洗脫部位；
[0027] (2)取步驟（1)的90~100 %乙醇洗脫部位，經(jīng)硅膠柱色譜分離，用氯仿-甲醇 梯度洗脫，以氯仿-甲醇體積比為95 : 5的洗脫液洗脫3~5BV，洗脫液合并，標記為餾分A7.8g，餾分A經(jīng)SephadexLH-20柱色譜分離，氯仿-甲醇等體積、等度洗脫，去除色素帶后， 收集餾分，標記為A-25. 4g，餾分A-2經(jīng)ODS柱色譜分離，用甲醇-水梯度洗脫，其中甲醇濃 度為50%~70%，收集甲醇-水體積比為3 : 2的餾分A-2-285mg，餾分A-2-2經(jīng)半制備液 相分離，得到本發(fā)明化合物。
[0028] 所述半制備液相HPLC分離，是以25 : 75的乙腈-水為流動相，檢測波長為208 與220nm，流速4mL/min，在半制備液相上本發(fā)明化合物的保留時間分別為31. 2min。分離所 得溶液干燥，得到本發(fā)明化合物4. 9mg。
[0029] 實施例2本發(fā)明化合物的結構鑒定
[0030] 本發(fā)明化合物為黃色無定性固體，ESI-MS(positive)給出m/z323 [M+Na]+ ; ESI-MS(negative)給出 345 [M+HC00]，提示化合物分子量為 300。HR-ESI-Q-T0F-MS給出 m/z299. 1497[M-H](計算值為299. 1495)(圖1)，確定化合物分子式為C15H2406,計算不飽和 度為5。
[0031]本發(fā)明化合物的1H-NMR(600MHz，inra30D)譜（見圖2)，顯示了高場區(qū)4個甲基 信號，其中3個甲基也呈現(xiàn)單峰，表明其與季碳直接相連；1個呈現(xiàn)d峰，表明其與叔碳直接 相連。13C-NMR(100MHz，inCD30D)結合DEPT-135譜（見圖3)共顯示15個碳信號，包括4 個甲基，3個亞甲基，2個次甲基，以及6個季碳信號[1個羰基，3個連氧SP3雜化季碳，1對 四取代雙鍵]。綜合以上NMR數(shù)據(jù)和不飽和度信息，可以推測化合物可能為1個倍半萜類化 合物，結構中含有4個甲氧基、2個環(huán)、1個酮羰基和1個雙鍵。根據(jù)HSQC譜（見圖8)，對化 合物的碳氫信號進行了歸屬。
[0032]根據(jù)HMBC(見圖5)相關峰H-15/C_3,4,5和H-2/C_l，3,5,推出α，β-不飽和環(huán) 戊酮的結構片段。1H-1!!COSY實驗中（見圖4)，可見H-8/H-9/H-10，H-10/CH3-14的相關峰， 結合H-6/C-l，4,5,7 的HMBC遠程相關；CH3-14/C-1，10,9 和H-8/C-7,9,10 的HMBC遠程相 關，構建環(huán)庚烷的結構片段。兩個單峰甲基CH3-12和CH3-13與C-7和C-11均具有HMBC遠 程相關，推測結構中含有片段c。在已經(jīng)推定的3個結構片段中，我們可以發(fā)現(xiàn)1，5,7碳原 子為公用碳，從而將其連接為1個愈創(chuàng)木烷型的倍半萜骨架，結合分子式C15H2406，確定結構 中還存在3個羥基及1個過氧羥基根據(jù)1位碳的化學位移為δ94. 0,確定過氧羥基的連接 位置為1