一種愈創(chuàng)木烷型倍半萜類化合物及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及從現(xiàn)有中成藥制劑中提取的愈創(chuàng)木烷型倍半 萜類化合物及其制備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 熱毒寧注射液（國(guó)藥準(zhǔn)字Z20050217)為江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司自主研發(fā)的 原中藥二類新藥，其處方為青蒿、金銀花、梔子，輔料為聚山梨酯80。熱毒寧注射液在外感風(fēng) 熱所致感冒、流感、咳嗽、上呼吸道感染等疾病的臨床治療中應(yīng)用廣泛，其作用迅速、效果顯 著。
[0003] 研究人員在熱毒寧注射液中發(fā)現(xiàn)了新的化學(xué)成分，并且發(fā)現(xiàn)此化合物在各個(gè)批次 的熱毒寧注射液中均穩(wěn)定存在。經(jīng)查閱文獻(xiàn)可知，這是首次在熱毒寧注射液中發(fā)現(xiàn)并鑒定 出的新的化學(xué)成分，并經(jīng)過(guò)Scifinder scholar檢索發(fā)現(xiàn)該化合物為新化合物。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明從熱毒寧注射液中制備提取出一種具有生物活性的愈創(chuàng)木烷型倍半萜類 化合物，并提供了其在制備治療手足口病藥物中的應(yīng)用。
[0005] 具體地說(shuō)，本發(fā)明提供了一種愈創(chuàng)木烷型倍半萜類化合物，其結(jié)構(gòu)如1所示：
[0006]
[0007] 本發(fā)明還提供了上述化合物的制備方法，包括如下步驟：
[0008] (1)取熱毒寧注射液成品，經(jīng)HP-20大孔吸附樹脂柱色譜分離，依次以水、30%乙 醇、90~100 %乙醇梯度洗脫，分別收集各洗脫液，減壓濃縮至無(wú)醇味，得到水洗脫部位、 30%乙醇洗脫部位、90~100%乙醇洗脫部位；
[0009] (2)取步驟（1)的90~100%乙醇洗脫部位，經(jīng)硅膠柱色譜分離，用氯仿-甲醇梯 度洗脫，以氯仿-甲醇體積比為95 : 5的洗脫液洗脫3~5BV，洗脫液合并，標(biāo)記為餾分A， 餾分A經(jīng)SephadexLH-20柱色譜分離，氯仿-甲醇等體積、等度洗脫，去除色素帶后，收集餾 分，標(biāo)記為A-2,餾分A-2經(jīng)0DS柱色譜分離，用甲醇-水梯度洗脫，其中甲醇濃度為50%~ 70%，收集甲醇-水體積比為3 : 2的餾分A-2-2,餾分A-2-2經(jīng)半制備液相分離，得到本發(fā) 明化合物。
[0010] 上述制備方法中，步驟（2)所述半制備液相色譜，以比例為25 : 75的乙腈-水為 流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為208與220nm，流速4mL/min，柱溫為常溫。在半制備液相上，本發(fā)明化 合物的保留時(shí)間分別為28. 4min。
[0011] 發(fā)明人通過(guò)理化性質(zhì)和現(xiàn)代波譜學(xué)手段（UV、IR、MS、⑶、1H-NMR、13C-NMR和 2D-NMR)對(duì)分離得到的化合物進(jìn)行了結(jié)構(gòu)鑒定，證實(shí)其為結(jié)構(gòu)如式1所示的愈創(chuàng)木烷型倍 半萜類化合物。
[0012] 本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種圖1所示化合物在制備治療手足口病藥物中 的應(yīng)用。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)本發(fā)明化合物對(duì)手足口病EV71病毒有一定的抑制作用。
[0013] 本發(fā)明的再一個(gè)目的在于提供一種藥物組合物，包含上述圖1所示化合物。
[0014] 本發(fā)明還提供了一種治療手足口病的藥物組合物，含有治療有效量的上述圖1化 合物以及一種或多種藥學(xué)上可接受的載體。
【附圖說(shuō)明】
[0015] 圖 1 為化合物1 的HR-ESI-Q-T0F-MS
[0016] 圖2為化合物1的1H-NMR譜
[0017] 圖3為化合物1的13C_NMR譜和DEPT-135譜
[0018] 圖4為化合物1的結(jié)構(gòu)片段a，b和c
[0019] 圖5為化合物1的HMBC譜
[0020] 圖6為化合物1的1Η」ΗCOSY譜
[0021] 圖7為化合物1的N0ESY譜
[0022] 圖8為化合物1的⑶譜
[0023] 圖9為化合物1的HSQC譜
[0024] 圖10為化合物1的結(jié)構(gòu)式
【具體實(shí)施方式】
[0025] 為了使本領(lǐng)域的技術(shù)人員更好地理解本發(fā)明的技術(shù)方案，下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì) 本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。
[0026] 實(shí)施例1本發(fā)明化合物的制備
[0027] (1)取熱毒寧注射液成品，經(jīng)HP-20大孔吸附樹脂柱色譜分離，依次以水、30%乙 醇、90~100 %乙醇梯度洗脫，分別收集各洗脫液，減壓濃縮至無(wú)醇味，得到水洗脫部位、 30%乙醇洗脫部位、90~100%乙醇洗脫部位；
[0028](2)取步驟（1)的90~100 %乙醇洗脫部位，經(jīng)硅膠柱色譜分離，用氯仿-甲醇 梯度洗脫，以氯仿-甲醇體積比為95 : 5的洗脫液洗脫3~5BV，洗脫液合并，標(biāo)記為餾分 A7.8g，餾分A經(jīng)SephadexLH-20柱色譜分離，氯仿-甲醇等體積、等度洗脫，去除色素帶后， 收集餾分，標(biāo)記為A-25. 4g，餾分A-2經(jīng)0DS柱色譜分離，用甲醇-水梯度洗脫，其中甲醇濃 度為50%~70%，收集甲醇-水體積比為3 : 2的餾分A-2-285mg，餾分A-2-2經(jīng)半制備液 相分離，得到本發(fā)明化合物。
[0029] 半制備液相HPLC分離，以25 : 75的乙腈-水為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為208與220nm， 流速4mL/min，在半制備液相上本發(fā)明化合物的保留時(shí)間分別為28. 4min。分離所得溶液干 燥，得到本發(fā)明化合物14. 5mg。
[0030] 實(shí)施例2本發(fā)明化合物的結(jié)構(gòu)鑒定
[0031] 化合物1為黃色無(wú)定性固體。ESI-MS(positive)給出m/z323[M+Na]+; ESI-MS(negative)給出m/z299[M-H] ，345[M+HC00]，提示化合物分子量為 300。 HR-ESI-Q-T0F-MS給出m/z301. 1646[M+H] + (計(jì)算值為301. 1651)(見圖1)確定化合物分子 式為C15H2406，計(jì)算不飽和度為5。
[0032] 化合物1的1H-NMR(600MHz，in⑶觀）（見圖2)的高場(chǎng)區(qū)可以觀察到4個(gè)明顯的 甲基信號(hào)，其中3個(gè)甲基呈單峰[δ1.36 (3H，s)，1.38 (3H，s)，1.76 (3H，s)]，表明其與季碳 直接相連；另外1個(gè)甲基信號(hào)為d峰[δ1. 06 (3Η，d，J= 7. 1Hz)]，表明其與叔碳直接相連。 13C-NMR(100MHz，inCD30D)結(jié)合DEPT-135譜（見圖3)共顯示15個(gè)碳信號(hào)，包括4個(gè)甲基 (δ26. 4, 25. 4,18. 5,8. 9)，3 個(gè)亞甲基（δ40. 7, 37. 5, 29. 8)，2 個(gè)次甲基（δ77. 4, 34. 1)，以 及6個(gè)季碳信號(hào)[1個(gè)羰基（δ209. 7)，3個(gè)連氧SP3雜化季碳（δ94. 0, 79. 1，79. 0)，1對(duì)四 取代雙鍵[(S166. 3,144. 6)]。綜合以上NMR數(shù)據(jù)和不飽和度信息，可以推測(cè)本發(fā)明化合物 可能為1個(gè)倍半萜類化合物，結(jié)構(gòu)中含有4個(gè)甲氧基、2個(gè)環(huán)、1個(gè)酮羰基和1個(gè)雙鍵。根據(jù) 化合物的HSQC譜（見圖9)，對(duì)化合物的碳?xì)湫盘?hào)進(jìn)行了歸屬。
[0033]如所示：根據(jù)HMBC(圖 5)相關(guān)峰H-15/C_3,4,5 和H-2/C_l，3,5,推出α，β-不 飽和環(huán)戊酮的結(jié)構(gòu)片段a(圖4)。4-?COSY實(shí)驗(yàn)中（見圖6)，可見Η-8/Η-9/Η-10,Η-10/ CH3-14 的相關(guān)峰，結(jié)合H-6/C-l，4,5,7 的HMBC遠(yuǎn)程相關(guān)；CH3-14/C-1，10,9 和H-8/C-7,9， 10的HMBC遠(yuǎn)程相關(guān)，構(gòu)建環(huán)庚烷的結(jié)構(gòu)片段b(圖4)。兩個(gè)單峰甲基CH3-12和CH3-13與 C-7和C-11均具有HMBC遠(yuǎn)程相關(guān)，推測(cè)結(jié)構(gòu)中含有片段c(圖4)。在已經(jīng)推定的3個(gè)結(jié)構(gòu) 片段中，我們