一種麻風(fēng)樹烷型二萜類單體化合物的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及化合物生產(chǎn)領(lǐng)域，尤其是一種麻風(fēng)樹烷型二萜類單體化合物的制備方 法。
【背景技術(shù)】
[0002] 萜類化合物（Terpenoids)是一類骨架多樣、數(shù)量龐大、生物活性廣泛的一類重要 的天然藥物化學(xué)成分。中藥甘遂的主要成分就是此類化合物，包括三萜類和二萜類化合物， 而麻風(fēng)樹烷型二萜類化合物是甘遂二萜類成分之一，多為一個(gè)5元環(huán)與一個(gè)12元環(huán)駢合在 一起而形成，同時(shí)某些位置的羥基形成醚或酯橋。kansuininG就是其中一種，具有廣泛的 生物活性，其結(jié)構(gòu)如下：
[0003]
[0004] 研究表明，kansuininG存在于甘遂中?，F(xiàn)行《中國(guó)藥典》收錄的甘遂為大戟科大 戟屬植物甘遂的干燥塊根。性寒，味苦；有毒?，F(xiàn)代研究表明，甘遂化學(xué)成分具有抗氧化、 抗腫瘤、抗生育、抗病毒、瀉下和免疫抑制等作用。
[0005] 但是關(guān)于甘遂的化學(xué)成分，傳統(tǒng)提取方法都是通過液液萃取的方式進(jìn)行，該種方 法存在許多缺陷，如批次之間不具有重復(fù)性，整個(gè)提取過程的時(shí)間周期長(zhǎng)，試劑耗費(fèi)量大 等。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供一種麻風(fēng)樹烷型二萜類單體化合物的制備 方法。
[0007] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的技術(shù)方案是：
[0008] -種麻風(fēng)樹燒型二砲類單體化合物（kansuininG)的制備方法，具體步驟如下：
[0009] (1)制備甘遂粗提物：以甘遂為原料，磨成粉末狀得到干燥的甘遂粗粉，甘遂粗粉 與乙酸乙酯的料液比按kg/L計(jì)1: (8-10)將甘遂粗粉用乙酸乙酯常溫下浸泡5h，間歇攪拌， 提取1-3次，靜置過夜，取上清，過濾，所得濾液進(jìn)行減壓濃縮至干，溶于正己烷-乙醇溶液 中，進(jìn)行減壓抽濾，得到甘遂濃度為50-500mg/mL的提取液；
[0010] (2)對(duì)所得到的提取液進(jìn)行一維液相色譜分離：采用的流動(dòng)相為二元混合有機(jī) 相，其中A相是正己烷，B相是乙醇；進(jìn)樣量為50-300mL/針；流動(dòng)相流速為600mL/min;檢 測(cè)器為紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)200-260nm;梯度洗脫；根據(jù)紫外吸收光譜收集目的組分，減 壓濃縮至干，得到一維液相組分；
[0011] (3)用乙醇體積分?jǐn)?shù)為30-70 %的乙醇-正己烷二元混合溶劑溶解一維液相組分， 溶解至濃度為50-100mg/mL;
[0012] (4)進(jìn)行二維液相色譜分離：采用的流動(dòng)相為二元混合有機(jī)相，其中A相是正 己烷，B相是乙醇；進(jìn)樣量為0. 3-1.OmL/針；流動(dòng)相流速為10-18mL/min;檢測(cè)器為紫外 檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)200-260nm;等度洗脫；根據(jù)紫外吸收光譜收集目的組分（GS-7-5峰 (35. 0-41. 5min)作為目的組分），減壓濃縮至干，得到二維液相組分；
[0013] (5)用乙醇體積分?jǐn)?shù)為10-50 %的乙醇-正己烷二元混合溶劑溶解二維液相組分， 溶解至濃度為50-200μg/mL;
[0014] (6)進(jìn)行三維液相色譜分離：采用的流動(dòng)相為二元混合有機(jī)相，其中A相是正己 烷，B相是乙醇；進(jìn)樣量為10-100μL/針；流動(dòng)相流速為3-5mL/min;檢測(cè)器為紫外檢測(cè)器， 檢測(cè)波長(zhǎng)200-260nm;等度洗脫；根據(jù)紫外吸收光譜收集目的組分，減壓濃縮至干，得到目 的產(chǎn)物。
[0015] 優(yōu)選的，上述麻風(fēng)樹烷型二萜類單體化合物的制備方法，所述步驟（2)中一 維液相色譜分離采用的色譜柱為正相硅膠軸向加壓色譜柱，填料為AgelaInnoval silica(250mmX150mm; 10μm，100A:)，使用時(shí)柱溫為室溫或 25-40°C。
[0016] 優(yōu)選的，上述麻風(fēng)樹烷型二萜類單體化合物的制備方法，所述步驟（4)中二維液 相色譜采用的色譜柱為：HanbonSilica色譜柱（250mmX20mm;10ym，1〇〇A)，使用時(shí)柱 溫為室溫或25-40 °C。
[0017] 優(yōu)選的，上述麻風(fēng)樹烷型二萜類單體化合物的制備方法，所述步驟(6)中三維液 相色譜采用的色譜柱為：AcchromX-Amide色譜柱（250mmX10mm;10ym，1〇〇/\ )，使用時(shí) 柱溫為室溫或25-40 °C。
[0018] 優(yōu)選的，上述麻風(fēng)樹烷型二萜類單體化合物的制備方法，所述步驟（1) (2) (4) (6) 中減壓濃縮采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行，工藝條件為真空度0. 05-0. 08Mpa、溫度50-60°C。
[0019] 優(yōu)選的，上述麻風(fēng)樹烷型二萜類單體化合物的制備方法，具體步驟如下：
[0020] (1)制備甘遂粗提物：以甘遂為原料，磨成粉末狀得到干燥的甘遂粗粉，甘遂粗粉 與乙酸乙酯的料液比按kg/L計(jì)1:9將甘遂粗粉用乙酸乙酯常溫下浸泡5h，間歇攪拌，提取 3次，靜置過夜，取上清，過濾，所得濾液進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，溶于正己烷-乙醇溶液中，進(jìn)行 減壓抽濾，得到甘遂濃度為94mg/mL的提取液；
[0021] (2)對(duì)所得到的提取液進(jìn)行一維液相色譜分離：采用的流動(dòng)相為二元混合有機(jī) 相，其中A相是正己烷，B相是乙醇；進(jìn)樣量為150mL/針；流動(dòng)相流速為600mL/min;檢測(cè)器 為紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)210nm;梯度洗脫--0-20%B洗脫25min，100%B洗脫8min;根 據(jù)紫外吸收光譜收集目的組分，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至干，得到一維液相組分；
[0022] (3)用乙醇體積分?jǐn)?shù)為60 %的乙醇-正己烷二元混合溶劑溶解一維液相組分，溶 解至濃度為73mg/mL;
[0023] (4)進(jìn)行二維液相色譜分離：采用的流動(dòng)相為二元混合有機(jī)相，其中A相是正己 燒，B相是乙醇；進(jìn)樣量為0. 7mL/針；流動(dòng)相流速為13mL/min;檢測(cè)器為紫外檢測(cè)器，檢測(cè) 波長(zhǎng)210nm;等度洗脫一一5%B等度洗脫60min;根據(jù)紫外吸收光譜收集目的組分（GS-7-5 峰（35. 0-41. 5min)作為目的組分），旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至干，得到二維液相組分；
[0024] (5)用乙醇體積分?jǐn)?shù)為50%的乙醇-正己烷二元混合溶劑溶解二維液相組分，溶 解至濃度為84 μ g/mL ;
[0025] (6)進(jìn)行三維液相色譜分離：采用的流動(dòng)相為二元混合有機(jī)相，其中A相是正己 烷，B相是乙醇；進(jìn)樣量為20μL/針；流動(dòng)相流速為4mL/min;檢測(cè)器為紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波 長(zhǎng)210nm;等度洗脫一一10%B等度洗脫16min;根據(jù)紫外吸收光譜收集目的組分，旋轉(zhuǎn)蒸 發(fā)濃縮至干，得到目的產(chǎn)物。
[0026] 本發(fā)明的有益效果是：
[0027] 上述麻風(fēng)樹燒型二砲類單體化合物，采用三維液相色譜技術(shù)提取kansuininG，將 提取物直接溶解，通過制備型高效液相色譜技術(shù)進(jìn)行分離，大大減少了提取分離的工作量， 具有分離效率高，產(chǎn)品純度高達(dá)98%以上，重復(fù)性好，儀器自動(dòng)化程度高，得到的物質(zhì)組分 批次之間一致性高，可操作性好，經(jīng)工藝放大后可以運(yùn)用于工業(yè)生產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)，所得單體化合 物容易積累到一定量，為進(jìn)一步探索單體化合物的藥效學(xué)奠定基礎(chǔ)，適合大規(guī)模生產(chǎn)的要 求。
【附圖說明】
[0028] 圖1是從甘遂中分離純化kansuininG的一維高效制備液相色譜圖；
[0029] 圖2是從甘遂中分離純化kansuininG的二維高效制備液相色譜圖；
[0030] 圖3是從甘遂中分離純化kansuininG的三維高效制備液相色譜圖；
[0031] 圖4是本發(fā)明所得到的目的組分kansuininG的分析型高效液相色譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0032] 為了使本領(lǐng)域的技術(shù)人員更好的理解本發(fā)明的技術(shù)方案，下面結(jié)合附圖及具體實(shí) 施方式對(duì)本發(fā)明所述技術(shù)方案作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。除非另有說明，本發(fā)明使用的所有科 學(xué)和技術(shù)術(shù)語具有與本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域人員通常理解的相同含義。
[0033] 實(shí)施例1
[0034] 以甘遂為原料，磨成粉末狀后用乙酸乙酯在室溫下浸泡5