一種根皮苷衍生物合成方法
【專利說明】-種根皮昔衍生物合成方法 -、技術(shù)領(lǐng)域:
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種生物催化制備根皮巧衍生物的方法,具體設(shè)及一種根皮巧衍生物 合成方法。 二、【背景技術(shù)】:
[0002] 根皮巧是由根皮素和葡萄糖巧結(jié)合而成的一種天然產(chǎn)物,屬于自然界很少存在的 "少數(shù)黃酬"一二氨查爾酬類,其被證實具有多種生物活性,如降血糖、抗氧化、延緩衰老、治 療高尿酸血癥、抑制黑色素和抑菌作用等。
[0003] 黃酬類物質(zhì)對生物體的有效性與其達到生物體活性部位的有效劑量密切相關(guān)。在 生物體內(nèi),根皮巧會被乳糖-根皮巧水解酶(LPH)水解成為根皮素,降低或者失去其生物 活性,因此,改善或者修飾黃酬類物質(zhì)的結(jié)構(gòu),是提高其生物利用率的有效途徑。目前黃酬 類物質(zhì)結(jié)構(gòu)修飾的方法有化學法、微生物法和酶法,化學催化成本較低,但反應位點不易 控制,反應副產(chǎn)物較多;微生物法生成的產(chǎn)物不易分離;酶法反應條件溫和,且位點選擇性 高,是結(jié)構(gòu)復雜的黃酬巧類結(jié)構(gòu)修飾的普遍方法。 Ξ、
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004] 本發(fā)明提供一種反應條件溫和,溫度低,生產(chǎn)能耗小,環(huán)境污染少的根皮巧衍生物 的合成方法。
[0005] 為實現(xiàn)上述目的,本發(fā)明采用的技術(shù)方案為:一種根皮巧衍生物合成方法,其特征 在于:所述的合成方法為:根皮巧與酷基供體在脂肪酶Novozym? 435的存在下反應得到 根皮巧衍生物;
[0006] 所述的根皮巧衍生物的反應式為:
[0007]
陽00引 a為反應條件:溶劑丙酬,脂肪酶Novo巧m'K435,47°C真空恒溫攬拌3化~4她;
[0009] R為酷基供體,酷基供體為C17H35COOH,。品iCOOH或C13H27COOH。
[0010] 所述的一種根皮巧衍生物合成方法,其特征在于:所述的具體合成方法為:
[0011] (1)根皮巧、酷基供體、分子篩3A、催化劑和丙酬在反應器內(nèi)混合均勻,在45~ 48°C惰性氣體條件下保溫,同時不斷攬拌,反應36~4化后終止反應;
[0012] (2)然后采用丙酬作為洗脫劑將反應物洗脫入離屯、管中離屯、,將所有的反應產(chǎn)物 洗脫干凈,收集上清液,將收集的上清液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干,并稱量旋干后的粗產(chǎn)物,采用硅膠 柱層析,合并含根皮巧衍生物的流份;
[001引做將合并的含根皮巧衍生物的流份真空濃縮,干燥,得產(chǎn)品。
[0014] 步驟1)中催化劑是脂肪酶Novo巧mK' 435,濃度0. 17~0. 26g/mL;
[0015] 根皮巧純度> 98 %,反應體系中根皮巧的濃度0. 071~0.Ig/mL;
[0016] 攬拌W100~12化/min的速度進行。
[0017] 步驟似中硅膠柱層析方法為:采用干法上樣,W丙酬-甲苯為洗脫劑進行4次梯 度洗脫,4次洗脫劑體積比比例為1:6、30:75、1:1、2:3,全程TLC板檢測。
[0018] 步驟(3)中真空濃縮溫度為55~60°C,真空度為-0. 09MPa;
[0019] 干燥方法為:將濃縮物放在真空干燥箱中,在溫度55~60°C下真空干燥到產(chǎn)品恒 重。
[0020] 與現(xiàn)有技術(shù)相比,本發(fā)明具有如下優(yōu)點和效果: W21] 本發(fā)明采用酶法合成6" -0-豆違酸根皮巧醋、6" -0-硬脂酸根皮巧醋、6" -0-軟脂酸根皮巧醋,確定了酶法合成的工藝路線和條件,產(chǎn)品質(zhì)量符合產(chǎn)品質(zhì)量控制 標準。
[0022] 本發(fā)明采用硅膠柱層析對反應產(chǎn)物中6" -0-豆違酸根皮巧醋、6" -0-硬脂酸根 皮巧醋、6" -0-軟脂酸根皮巧醋進行分離純化,確定了洗脫劑組成等條件對分離效果的影 響,分離出純度高的根皮巧衍生物。 四、【具體實施方式】:
[0023] 一種根皮巧衍生物合成方法為:根皮巧與酷基供體在脂肪酶Novozym'w435的 存在下反應得到根皮巧衍生物;
[0024] 所述的根皮巧衍生物的反應式為: 陽0巧]
[0026] a為反應條件:溶劑丙酬,脂肪酶Novo巧nr"· 435,47°C真空恒溫攬拌3化~4她;
[0027] R為酷基供體,酷基供體為C17H35COOH,。品iCOOH或C13H27COOH。
[0028] 所述的具體合成方法為:
[0029] (1)根皮巧、酷基供體、分子篩3A(3A分子篩)、催化劑和丙酬在反應器內(nèi)混合均 勻,在45~48°C惰性氣體條件下保溫,同時不斷攬拌,反應36~4化后終止反應;
[0030] 似然后采用丙酬作為洗脫劑將反應物洗脫入離屯、管中離心將所有的反應產(chǎn)物 洗脫干凈,收集上清液,將收集的上清液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干,并稱量旋干后的粗產(chǎn)物,采用硅膠 柱層析,合并含根皮巧衍生物的流份;
[0031] (3)將合并的含根皮巧衍生物的流份真空濃縮,干燥,得產(chǎn)品。 陽0巧步驟1)中催化劑是脂肪酶Novozym'K435,濃度0. 17~0. 26g/mL;
[0033] 根皮巧純度> 98 %,反應體系中根皮巧的濃度0. 071~0.Ig/mL;
[0034] 攬拌W100~120;r/min的速度進行。
[0035] 步驟(2)中硅膠柱層析方法為:采用干法上樣,W丙酬-甲苯為洗脫劑進行4次梯 度洗脫,4次洗脫劑體積比比例為1:6、30:75、1:1、2:3,全程TLC板檢測。
[0036] 步驟(3)中真空濃縮溫度為55~60°C,真空度為-0. 09MPa;
[0037] 干燥方法為:將濃縮物放在真空干燥箱中,在溫度55~60°C下真空干燥到產(chǎn)品恒 重。
[003引為了便于理解本發(fā)明,特列舉W下實施例。 陽0例 實施例1
[0040] 取純度為98 %的根皮巧0. 5g,脂肪酶Novozym*· 435 1. 2g,硬脂酸2.llg,分 子篩200mg溶于5血丙酬中,混合均勻后置于恒溫振蕩器內(nèi)(47°C,lOOr/min),36h后用 薄層層析法判斷反應終點,經(jīng)硅膠柱層析得到硬脂酸根皮巧醋化642g產(chǎn)率為82% )。 古醒R(DMS0-de;500MHz) :5 10.62 (s,lH,Ar0H),9.10 化rS,lH,Ar0H),7.02 (d,2H,J =8. 0Hz,H-2,H-6),6. 65(d,2H,J=8. 0Hz,H-3,H-5),6. 02(s,lH,H-3 ' ),5. 83(s, ),5. 4Ubrs,lH,0H),5. :M化rs,2H,20H),4. 96(d,lH,J=6. 9Hz,H-l"), 4. 28 化rd,lH,J= 11.OHz,H-6a" ),4. 14(dd,lH,J= 10. 4Hz,6. 7Hz,H-6b" ),3. 58 化r t,J= 7.9Hz,H-4"),3.31-3.21(m,細,2XH。,H-2",H-3",H-5",0H),2.75化rt, 2H,J=6.細z,2XHp),2. 25(t,2H,J=6. 9Hz,2XH-2" ' ),1.44(m,2H,2XH-3"'), 1.22-1. 14(m,2 細,2(邸2)),0.88(brt,3H,J=6. 9Hz,邸3) ;1化NMR(DMS0-d6;125MHz): δ205. 09 (CO),173. 26 (OCO),165. 85 (C-4 ' ),164. 93 (C-6' ),161. 10 (C-2 '), 155. 76(C-4),131. 93(C-1),129. 55(C-2,C-6),115. 41 (C-3,C-5),105. 64(C-1 '), 101.09(C-1 " ),97.40(C-3 ' ),95.01 (C-5 ' ),76.90(C-3 " ),74.39(C-5 "), 73. 58(C-2" ),70. 28(C-4" ),63. 52(C-6" ),45. 43(CJ,33. 87(C-2" ' ),31.77(Cp), 29. 42,29. 35,29. 13 (C-4" ',C-5" ',C-6" ',C-7" ',C-8" ',C-9" ',C-10"', C-n" ',C-12" ',C-13" ',C-14" ',C-15" ',C-16" ' ),24.85(C-3"'), 22. 55 (C-17" ' ),14.38 (C-18"')