Pzp基因在膽管癌診斷和治療中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地設(shè)及PZP基因在膽管癌診斷和治療中的用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 膽管癌是指原發(fā)于左右肝管匯合部至膽總管下端的肝外膽管惡性腫瘤，其病因尚 不清楚，與其發(fā)病可能有關(guān)的因素有：潰瘍性結(jié)腸炎、膽結(jié)石、中華分枝睪吸蟲感染、膽總管 囊腫等，運些因素都能增加膽管癌發(fā)病的危險性。臨床表現(xiàn)主要為伴有上腹部不適的進(jìn)行 性黃痘、食欲不振、消瘦、痊癢等。如腫瘤破潰出血，可有黑便或大便潛血試驗陽性、貧血等 表現(xiàn)。
[0003] 膽管癌的惡性程度極高，在歐美地區(qū)發(fā)病率很低，但在東南亞地區(qū)及我國的發(fā)病 率成上升趨勢，且整體治療水平很不理想，迄今無滿意的治療方法。由于臨床上出現(xiàn)癥狀較 晚，早期診斷困難，同時由于膽管癌具有沿膽管壁局部浸潤的生物學(xué)特性，易侵犯肝口部血 管及二級膽管，根治性手術(shù)切除的機(jī)會不多（約15%~20% )，常規(guī)手術(shù)后導(dǎo)致局部復(fù)發(fā)， 預(yù)后較差平均生存期為6~12個月，而5年存活率為2%~16. 5%。由于其對化療與放療 等非手術(shù)治療不敏感，綜合治療手段目前仍無明確改善遠(yuǎn)期療效的意義，早期預(yù)防、早期發(fā) 現(xiàn)、早期治療是提高人膽管癌手術(shù)根治率的關(guān)鍵。
[0004] 目前臨床上用于膽管癌診斷的方法包括：臨床表現(xiàn)、血液檢查、血清腫瘤標(biāo)記物檢 查、膽管癌目前并沒有發(fā)現(xiàn)特異性腫瘤標(biāo)記物，僅CA-19、CA125、CEA有一定價值；影像學(xué)檢 查、ERCP和PTC、十二指腸鏡、腸道母子鏡、細(xì)胞學(xué)和組織學(xué)診斷。但是上述方法的使用不能 提供一種特意和敏感的診斷。盡管現(xiàn)在臨床上會使用一些腫瘤標(biāo)記物進(jìn)行檢查，但由于運 些腫瘤標(biāo)記物相對于膽管癌是非特異性性的，其僅具有一定的參考價值，因此發(fā)現(xiàn)一種特 異性的膽管癌標(biāo)記物具有重要的意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 為了彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種可用于膽管癌早期診斷的 分子標(biāo)志物-PZP基因。相比傳統(tǒng)的膽管癌的診斷方法，使用基因標(biāo)志物來診斷膽管癌具有 及時性、特異性和靈敏性，使患者在癌癥早期就能知曉癌癥風(fēng)險，針對風(fēng)險高低，采取相應(yīng) 的預(yù)防和治療措施。
[0006] 為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
[0007]本發(fā)明提供了一種PZP基因及其表達(dá)產(chǎn)物在制備診斷膽管癌的產(chǎn)品中的應(yīng)用。
[0008] 進(jìn)一步，上面所提到的診斷產(chǎn)品包括：通過RT-PCR、實時定量PCR、免疫檢測、原位 雜交或忍片檢測PZP基因及其表達(dá)產(chǎn)物的表達(dá)水平W診斷膽管癌的產(chǎn)品。
[0009] 進(jìn)一步，所述用RT-PCR診斷膽管癌的產(chǎn)品至少包括一對特異擴(kuò)增PZP基因的引 物；所述用實時定量PCR診斷膽管癌的產(chǎn)品至少包括一對特異擴(kuò)增PZP基因的引物；所述 用免疫檢測診斷膽管癌的產(chǎn)品包括：與PZP蛋白特異性結(jié)合的抗體；所述用原位雜交診斷 膽管癌的產(chǎn)品包括：與PZP基因的核酸序列雜交的探針；所述用忍片診斷膽管癌的產(chǎn)品包 括：蛋白忍片和基因忍片；其中，蛋白忍片包括與PZP蛋白特異性結(jié)合的抗體，基因忍片包 括與PZP基因的核酸序列雜交的探針。
[0010] 本發(fā)明提供了一種診斷膽管癌的產(chǎn)品，所述的產(chǎn)品能夠通過檢測膽管組織中PZP基因的表達(dá)水平來診斷膽管癌。
[0011] 進(jìn)一步，上面所述的產(chǎn)品包括忍片、或試劑盒。其中，所述忍片包括基因忍片、蛋白 質(zhì)忍片；所述基因忍片包括固相載體W及固定在固相載體上的寡核巧酸探針，所述寡核巧 酸探針包括用于檢測PZP基因轉(zhuǎn)錄水平的針對PZP基因的寡核巧酸探針；所述蛋白質(zhì)忍片 包括固相載體W及固定在固相載體上的PZP蛋白的特異性抗體；所述試劑盒包括基因檢測 試劑盒和蛋白免疫檢測試劑盒；所述基因檢測試劑盒包括用于檢測PZP基因轉(zhuǎn)錄水平的試 劑；所述蛋白免疫檢測試劑盒包括PZP蛋白的特異性抗體。
[0012] 進(jìn)一步，上面所述試劑包括使用RT-PCR、實時定量PCR、免疫檢測、原位雜交或忍 片方法檢測PZP基因表達(dá)水平過程中所需的試劑。優(yōu)選地，所述試劑包括針對PZP基因的 引物和/或探針。
[0013] 進(jìn)一步，所述基因忍片可用于檢測包括PZP基因在內(nèi)的多個基因（例如，與膽管癌 相關(guān)的多個基因）的表達(dá)水平。所述蛋白質(zhì)忍片可用于檢測包括PZP蛋白在內(nèi)的多個蛋白 質(zhì)（例如與膽管癌相關(guān)的多個蛋白質(zhì)）的表達(dá)水平。通過將多個與膽管癌的標(biāo)志物同時檢 巧。，可大大提高膽管癌診斷的準(zhǔn)確率。
[0014] 本發(fā)明還提供了PZP基因及其表達(dá)產(chǎn)物在制備治療膽管癌的藥物組合物中的應(yīng) 用。
[0015] 進(jìn)一步，所述藥物組合物包括能夠促進(jìn)PZP基因表達(dá)或增強(qiáng)PZP表達(dá)功能的試劑。
[0016] 進(jìn)一步，所述試劑包括：含有能編碼功能性PZP蛋白的核酸的試劑、PZP蛋白的激 活劑、含有PZP蛋白質(zhì)的試劑。
[0017] 其中，所述含有能編碼功能性PZP蛋白的核酸的試劑可W是在有利條件下翻譯成 活性形式的PZP蛋白的單鏈核酸（如mRNA)或雙鏈核酸（如DNA)，所述的核酸可W連接在 表達(dá)載體上或重組到宿主細(xì)胞里，只要能編碼成活性PZP蛋白，任何一種PZP基因的攜帶方 式均可。所述的PZP蛋白激活劑是指刺激PZP蛋白活性、增加PZP蛋白活性、促進(jìn)PZP蛋白 活性、增強(qiáng)PZP蛋白激活、使PZP蛋白活性敏感化或上調(diào)PZP蛋白活性的試劑，如去甲基化 試劑、PZP啟動子和/或增強(qiáng)子特異性的轉(zhuǎn)錄激活劑、PZP蛋白的激動劑（如激活抗體）等。
[0018] 本發(fā)明還提供了上面所述的試劑在制備治療膽管癌的藥物組合物中的應(yīng)用。
[0019] 本發(fā)明還提供了一種治療膽管癌的藥物組合物，所述藥物包括能夠促進(jìn)PZP基因 表達(dá)或增強(qiáng)PZP表達(dá)功能的試劑。
[0020] 本發(fā)明的藥物可W用于補(bǔ)充內(nèi)源性的PZP蛋白的缺失或不足，通過提高PZP蛋白 的表達(dá)，從而治療因PZP蛋白減少導(dǎo)致的膽管癌。
[0021] 本發(fā)明所述攜帶基因的載體是本領(lǐng)域已知的各種載體，如市售的載體、包括質(zhì)粒、 粘粒、隧菌體、病毒等。
[0022] 在本發(fā)明中，術(shù)語"宿主細(xì)胞"包括原核細(xì)胞和真核細(xì)胞。常用的原核宿主細(xì)胞的 例子包括大腸桿菌、枯草桿菌等。常用的真核宿主細(xì)胞包括酵母細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞和哺乳動物 細(xì)胞。較佳地，該宿主細(xì)胞是真核細(xì)胞，如CH0細(xì)胞、cos細(xì)胞等。
[0023] 進(jìn)一步，本發(fā)明中PZP蛋白或編碼PZP蛋白的核酸可W通過脂質(zhì)體給予，所述脂質(zhì) 體的作用是將藥物祀向于特定的組織，w及增加藥物的半衰期。脂質(zhì)體包括乳化劑、起泡 劑、液態(tài)脂質(zhì)、固態(tài)脂質(zhì)、不溶性單層、憐脂分散劑、表面活性劑等。所述的脂質(zhì)體中還可W 包括能與祀向的細(xì)胞中的受體分子結(jié)合或其他治療性或免疫原性組合物。
[0024] 進(jìn)一步，本發(fā)明的藥物還包括藥學(xué)上可接受的一種或多種載體，運類載體包括 (但并不限于）：稀釋劑或填充劑如乳糖、葡萄糖、薦糖、甘露醇、山梨醇、纖維素（如乙基纖 維素、微晶纖維素）、糖膠、果膠、聚丙締酸醋和/或憐酸氨巧、硫酸巧，潤滑劑如娃石、滑石、 硬脂酸、硬脂酸儀或硬脂酸巧、金屬硬脂酸鹽、膠體二氧化娃、氨化植物油、玉米淀粉、苯甲 酸鋼和/或聚乙二醇，粘合劑如娃酸儀侶、淀粉糊、明膠、黃巧膠、甲基纖維素、簇甲基纖維 素鋼、聚乙締化咯燒酬和/或徑丙基纖維素，崩解劑如淀粉（如馬鈴馨淀粉或淀粉鋼）、乙醇 酸鹽（醋）、瓊脂、褐藻酸或其鋼鹽、或起泡混合物，濕潤劑如月桂基硫酸鋼和/或吸收劑、著 色劑、芳香劑和甜味劑。可W將本發(fā)明的化合物和藥劑及它們生理學(xué)上可接受的鹽及溶劑 化物進(jìn)行配制，用于通過任何合適的途徑給藥，包括吸入給藥、局部給藥、經(jīng)鼻給藥、經(jīng)口給 藥、腸胃外給藥或直腸給藥。
[0025] 藥物組合物可W被配制成任何的給藥類型，例如，利用注射器或其它裝置的皮內(nèi) 注射、皮下注射、靜脈內(nèi)注射、腹膜內(nèi)注射、胸膜內(nèi)注射、膀脫內(nèi)注射、冠狀動脈內(nèi)或腫