一種茶籽糖蛋白及其制備方法與應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種茶籽糖蛋白及其制備方法和該糖蛋白作為抗 疲勞藥物的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 糖蛋白是一類由糖類和蛋白質(zhì)或多肽以共價鍵連接而形成的結(jié)合蛋白，具有重要 的生理作用。天然糖蛋白具有調(diào)節(jié)免疫、抗腫瘤、抗炎、降血糖、降血脂、抗氧化、防衰老等功 效。
[0003] 茶籽中的多糖成分大多以糖蛋白的形式存在。茶籽多糖是由阿拉伯糖、半乳糖、甘 露糖、葡萄糖等多種組成的雜多糖，茶籽蛋白質(zhì)則含有17種氨基酸，其中8種為人體必需氨 基酸。茶籽多糖的提取方法主要有酸降解法、氧化降解法和酶降解法，但這些方法均破壞了 其中蛋白質(zhì)活性。茶籽蛋白的提取方法主要有等電點(diǎn)法、離子交換法及超濾法，但這些方法 對蛋白提取率不足50 %，且沒有獲取多糖組分。
[0004] 疲勞是一種亞健康狀態(tài)，其發(fā)生主要?dú)w因于能源物質(zhì)耗竭、代謝紊亂、體內(nèi)環(huán)境失 調(diào)等。糖蛋白不僅能提供運(yùn)動所需能量，還能夠清除自由基，達(dá)到抗疲勞的目的。
[0005] 茶籽糖蛋白的緩沖鹽提取方法及其作為抗疲勞藥物的應(yīng)用未見報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 為了克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)與不足，本發(fā)明的首要目的在于提供一種茶籽糖蛋白的 制備方法。
[0007] 本發(fā)明的另一目的在于提供通過上述制備方法得到的茶籽糖蛋白。
[0008] 本發(fā)明的再一目的在于提供所述的茶籽糖蛋白在抗疲勞藥物中的應(yīng)用。
[0009] 本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：一種茶籽糖蛋白的制備方法，包括如下步 驟：
[0010] (1)將脫脂茶籽柏用乙醇水溶液回流提取，過濾，得到濾渣和乙醇水提取液；然后 將濾渣蒸出乙醇至無醇味，備用；
[0011] (2)將步驟（1)的濾渣用磷酸緩沖液保溫浸泡，過濾，得到濾液；所述磷酸緩沖液 的pH為8~10;所述磷酸緩沖液的濃度為0. 05~0. 1M;
[0012] (3)將濾液用2000Da的超濾膜超濾，再將超濾膜上的截留部分冷凍干燥，得到茶 軒糖蛋白。
[0013] 步驟（1)中所述脫脂茶籽柏為脫脂油茶籽柏或脫脂茶葉籽柏；
[0014] 步驟⑴中所述乙醇水溶液與脫脂茶籽柏的液固比為（10~20)mL:lg;所述提取 條件為于60~80°C下提取0. 5~3小時。
[0015] 步驟⑴所述乙醇水溶液的體積百分比濃度為80~90%。
[0016] 步驟（2)所述磷酸緩沖液與步驟⑴的脫脂茶籽柏的液固比為（15~30)mL:lg。
[0017] 步驟（2)所述保溫浸泡的條件為于50~60°C保溫1~3h。
[0018] 步驟（3)所述冷凍干燥的條件為-30~-50°C冷凍干燥4~8小時。
[0019] -種茶籽糖蛋白由上述方法制備得到，其糖含量為40~70%、蛋白含量30~ 60%〇
[0020] 所述茶籽糖蛋白應(yīng)用于制備抗疲勞的藥物制劑。
[0021] 所述藥物制劑為口服制劑（粉劑或液體）或注射制劑等劑型中的任何一種；
[0022] 所述藥物制劑為含有茶籽糖蛋白的單方或復(fù)方制劑。
[0023] 本發(fā)明相對于現(xiàn)有技術(shù)具有如下的優(yōu)點(diǎn)及效果：
[0024] (1)本發(fā)明采用同一原料先經(jīng)80~90%乙醇水溶液提取除去了脫脂原料中皂素 和其他脂溶性成分，再經(jīng)磷酸鹽緩沖液提取濾渣中糖蛋白，可顯著提高糖蛋白的純度；
[0025] (2)本發(fā)明采用堿性磷酸緩沖液提取糖蛋白，既保持pH穩(wěn)定，從而保留了糖蛋白 的活性，又將糖蛋白溶解，使之充分被提取出來；再通過超濾膜除去鹽分，從而使產(chǎn)品純度 和活性顯者提尚；
[0026] (3)由于茶籽糖蛋白利用速度較慢而能夠較長時間進(jìn)行能量補(bǔ)充，維持血糖水平， 且滲透壓比單糖低，更適合作為運(yùn)動補(bǔ)充劑，因此本發(fā)明茶籽糖蛋白可作抗疲勞藥物或功 能性添加劑；
[0027] (4)本發(fā)明制備工藝簡單，反應(yīng)條件溫和，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，便于工業(yè)化生產(chǎn)。
【具體實(shí)施方式】
[0028] 下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。 [00 29] 實(shí)施例1
[0030] 取1kg的市售脫脂茶葉籽柏，加入12L的體積分?jǐn)?shù)85%的乙醇水溶液，于65°C回 流提取1小時，過濾，然后將濾渣于80°C蒸出乙醇至無醇味；再將濾渣用20LpH為8的0. 1M 磷酸緩沖液浸泡并于55°C保溫3h，過濾，得到浸泡過濾后的濾液；將浸泡過濾后的濾液用 2000Da的超濾膜超濾，將超濾膜上的截留部分冷凍干燥（_50°C冷凍干燥4小時），得到茶籽 糖蛋白180g。
[0031] 實(shí)施例2
[0032] 取1kg的市售脫脂油茶籽柏，加入10L的體積分?jǐn)?shù)80%的乙醇水溶液，于70°C回 流提取3小時，過濾，然后將濾渣于80°C蒸出乙醇至無醇味；再將濾渣用30LpH為10的 0. 05M磷酸緩沖液浸泡并于60°C保溫3h，過濾，得到浸泡過濾后的濾液；將浸泡過濾后的濾 液用2000Da的超濾膜超濾，將超濾膜上的截留部分冷凍干燥（-30°C冷凍干燥8小時），得 到茶籽糖蛋白190g。
[0033] 實(shí)施例3
[0034] 取1kg的市售脫脂茶葉籽柏，加入20L的體積分?jǐn)?shù)82 %的乙醇水溶液，65°C回流提 取2小時，過濾，然后將濾渣于80°C蒸出乙醇至無醇味；再將濾渣用15LpH為9的0. 1M磷 酸緩沖液浸泡，60°C保溫2h，過濾，得到浸泡過濾后的濾液；將浸泡過濾后的濾液用2000Da 的超濾膜超濾，將超濾膜上的截留部分冷凍干燥（-40°C冷凍干燥6小時），得到茶籽糖蛋白 165g〇
[0035] 實(shí)施例4
[0036] 取1kg的市售脫脂油茶籽柏，加入15L的體積分?jǐn)?shù)90%的乙醇水溶液，60°C回流 提取2小時，過濾，然后將濾渣于80°C蒸出乙醇至無醇味；再將濾渣用15LpH為8. 5的 0. 08M磷酸緩沖液浸泡，50°C保溫2h，過濾，得到浸泡過濾后的濾液；將浸泡過濾后的濾液 用2000Da的超濾膜超濾，將超濾膜上的截留部分冷凍干燥（_35°C冷凍干燥7小時），得到 茶籽糖蛋白165g。
[0037] 實(shí)施例5
[0038] 取1kg的市售脫脂茶葉籽柏，加入10L的體積分?jǐn)?shù)87%的乙醇水溶液，70°C回流 提取2. 5小時，過濾，然后將濾渣于80°C蒸出乙醇至無醇味；再將濾渣用25LpH為9. 5的 〇. 1M磷酸緩沖液浸泡并于55°C保溫2h，過濾，得到浸泡過濾后的濾液；將浸泡過濾后的濾 液用2000Da的超濾膜超濾，將超濾膜上的截留部分冷凍干燥（_45°C冷凍干燥5小時），得 到茶籽糖蛋白187g。
[0039] 實(shí)施例6
[0040] 取1kg的市售脫脂油茶籽柏，加入15L的體積分?jǐn)?shù)90%的乙醇水溶液，65°C回流 提取1. 5小時，過濾，然后將濾渣于80°C蒸出乙醇至無醇味；再將濾渣用20LpH為8. 5的 0. 05M磷酸緩沖液浸泡，60°C保溫3h，過濾，得到浸泡過濾