一種夏天無生物堿單體的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種夏天無生物堿單體的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 夏天無為S粟科紫堇屬延胡索亞屬植物伏生紫堇Ccxrydalis decumbens Crhunb.) Pers.的塊莖。又名一粒金丹、野延胡、洞里神仙、伏地延胡索、落水珠。早在清代趙學(xué)敏《本 草綱目拾遺》中便記載了本藥（一粒金丹）；"一名洞里神仙，又名野延胡，江南人呼飛來牡 丹"。
[0003] 夏天無植物生長(zhǎng)于丘陵或低山山坡、草地，喜生于氣候溫暖潮濕、向陽(yáng)、排水良好、 ±層深厚的沙質(zhì)地。主產(chǎn)于江西、湖南、福建、浙江、安徽等省，W江西產(chǎn)質(zhì)量為佳。夏天無 是一種常用民間中藥，具有鎮(zhèn)痛、消炎的作用，用于治療胃痛、癌痛、坐骨神經(jīng)痛、風(fēng)濕性關(guān) 節(jié)炎、小兒麻瘦后遺癥。近代藥理研究發(fā)現(xiàn)夏天無在必腦血管疾病方面顯示出較好的療效， 如治療老年性癡呆、抗必律失常、抑制血小板聚集等。
[0004] 夏天無的活性成分是生物堿?！吨袊?guó)藥典》2010版一部也將生物堿作為夏天無的 定性和定量指標(biāo)。
[0005] 夏天無總生物堿主要包括原阿片堿、延胡索己素、夏無寧堿、比枯枯靈、鹽酸己馬 汀。原阿片堿是一種異哇晰類生物堿，具有必血管方面的活性如降低高血壓、抗必率失常； 還具有抗血小板聚集、抗免疫、抗氧化損傷等多種藥理活性。延胡索己素同樣也具有抗腫 瘤、抗血小板聚集、抗必律失常、鎮(zhèn)痛等多種藥理作用。夏天無生物堿眾多的藥理活性引起 了廣泛的關(guān)注，因此它們的分離純化方法不僅是進(jìn)一步研究藥理作用的需要，同時(shí)也為臨 床研究提供物質(zhì)基礎(chǔ)?？v觀現(xiàn)有的夏天無生物堿單體分離純化方法，大多采用柱色譜、結(jié)晶 W及制備液相的方法，工藝繁瑣、回收率低、成本較高等。
[0006] FCPC技術(shù)即高速離必分配色譜，它利用待分離物質(zhì)在互不相溶的兩相溶液中的分 配系數(shù)不同，經(jīng)過類似于連續(xù)萃取的過程，對(duì)物質(zhì)進(jìn)行分離。它與服CCC稍有不同，HSCCC屬 于流體動(dòng)力平衡系統(tǒng)，由聚四氣己帰軟管繞制成的色譜柱除繞離必軸旋轉(zhuǎn)外，還圍繞自軸 旋轉(zhuǎn)產(chǎn)生變化的重力場(chǎng)；FCPC屬于流體靜力平衡系統(tǒng)，色譜柱由一系列刻在圓盤上的腔室 組成，通過單軸旋轉(zhuǎn)產(chǎn)生恒定的離必力場(chǎng)從而實(shí)現(xiàn)對(duì)固定相的保留。20世紀(jì)90年代，Ito發(fā) 明了抑-區(qū)帶精制逆流色譜，該方法十分適用于分離有機(jī)酸W及有機(jī)堿類化合物。此方法 同樣也適用于FCPC中，此方法有W下特點(diǎn)；溶質(zhì)被高度濃縮在矩形峰中，且不同矩形峰之 間重疊較少，分離的基礎(chǔ)是基于不同溶質(zhì)具有不同的疏水性W及地a值。與傳統(tǒng)的逆流色 譜方法相比較，pH-區(qū)帶精制逆流色譜具有許多重要的優(yōu)勢(shì)，如大大提高了樣品的上樣量， 為普通方法的10倍W上；大組分高度濃縮，微量組分的高度濃縮。該方法目前己經(jīng)被廣泛 的應(yīng)用于分離天然產(chǎn)物W及人工合成的物質(zhì)，尤其是生物堿與有機(jī)酸。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是為了克服現(xiàn)有技術(shù)中夏天無生物堿單體的制備方 法成本較高、分離效率低、回收率低、產(chǎn)品純度低、制備量小等缺點(diǎn)而提供了一種夏天無生 物堿單體的制備方法，該制備方法能夠大規(guī)模地制備各生物堿單體，制備最高能夠達(dá)到克 級(jí)量；且制得的單體純度高，達(dá)98%W上；成本低、分離效率高、回收率高、產(chǎn)品純度高、制 備量較大。
[0008] 本發(fā)明提供了一種夏天無生物堿單體的制備方法，其包括W下步驟：采用高速離 必分配色譜法對(duì)夏天無提取物進(jìn)行分離純化，即得夏天無生物堿單體；所述的夏天無生物 堿單體為原阿片堿、延胡索己素或夏無寧堿；
[0009] 其中，所述的高速離必分配色譜法使用的固定相和流動(dòng)相由下述方法制得：將石 油離、己酸己醋、己醇和水混合均勻，靜置分層后，將上相、下相溶液分開，將上相溶液與Η 己胺混合均勻即得固定相，將下相溶液與鹽酸混合均勻即得流動(dòng)相；所述的石油離、己酸己 醋、己醇和水的體積比為（1~5) :(1~10) :(1~5) :(1~10);所述的固定相中Η己胺的 摩爾濃度為5ηΜ~25ηΜ;所述的流動(dòng)相中肥1的摩爾濃度為5ηΜ~25ηΜ。
[0010] 本發(fā)明中，所述的夏天無提取物可為本領(lǐng)域常規(guī)使用的夏天無提取物；所述的夏 天無提取物中夏天無總生物堿的質(zhì)量百分含量為50%~99%，所述的質(zhì)量百分含量是指 夏天無提取物中總生物堿的質(zhì)量占夏天無提取物質(zhì)量的百分比。夏天無總生物堿中幾種 主要生物堿的組成比例如下：原阿片堿15%~35%、延胡索己素10%~25%、比枯枯靈 5%~15%、鹽酸己馬汀0.05%~0.2%、紫堇爾明5%~15%，夏無寧堿15%~30%、其 他生物堿及提取物10 %~25 % ;所述的夏天無提取物優(yōu)選0. 5g~4g，進(jìn)一步優(yōu)選0. 8g~ 1. 6g。所述的夏天無提取物優(yōu)選夏天無超臨界提取物；所述的夏天無超臨界提取物按照 CN101058576A記載的夏天無的超臨界提取方法制備（見本申請(qǐng)參考實(shí)施例1)。
[0011] 本發(fā)明中，所述的石油離、己酸己醋、己醇和水的體積比優(yōu)選（3~w;7 :(3~w: 7。
[0012] 本發(fā)明中，所述的固定相中Η己胺的摩爾濃度優(yōu)選5nM~20nM，進(jìn)一步優(yōu)選lOnM。
[0013] 本發(fā)明中，所述的鹽酸優(yōu)選濃鹽酸。
[0014] 本發(fā)明中，所述的流動(dòng)相中肥1的摩爾濃度優(yōu)選5nM~lOnM。
[0015] 本發(fā)明中，在所述的固定相和流動(dòng)相的制備過程中，所述靜置分層的時(shí)間可為本 領(lǐng)域常規(guī)的靜置分層時(shí)間，優(yōu)選2~12h，進(jìn)一步優(yōu)選4~12h。
[0016] 本發(fā)明中，所述的高速離必分配色譜法在高速離必分配色譜儀中進(jìn)行；所述的高 速離必分配色譜儀為本領(lǐng)域常規(guī)的高速離必分配色譜儀，優(yōu)選法國(guó)RousseletRobatel Kromaton公司生產(chǎn)的型號(hào)為FCPCA200的高速離必分配色譜儀。所述的高速離必分配色譜 儀的使用參數(shù)條件可為本領(lǐng)域常規(guī)的參數(shù)條件。
[0017] 本發(fā)明中，所述的高速離必分配色譜法較佳地包括如下步驟：
[0018] (1)將夏天無提取物溶解于上相溶液或下相溶液中，得進(jìn)樣溶液；
[0019] (2)用固定相填充高速離必分配色譜儀的轉(zhuǎn)鼓，待轉(zhuǎn)鼓內(nèi)充滿固定相后，調(diào)節(jié)固定 相流速，并將所述的進(jìn)樣溶液進(jìn)樣，在1000巧m~1600巧m轉(zhuǎn)速下泉入流動(dòng)相，收集相應(yīng)的 流出的流動(dòng)相。
[0020] 步驟（1)中，所述的進(jìn)樣液中所述的夏天無提取物與所述的固定相或流動(dòng)相的質(zhì) 量體積比優(yōu)選0. 1~0. 8g/mL，進(jìn)一步優(yōu)選0. 32g/mL。
[0021] 步驟（2)中，轉(zhuǎn)鼓內(nèi)充滿固定相之前，固定相流速優(yōu)選15mL/min。
[0022] 步驟（2)中，所述的充滿為有固定相流出轉(zhuǎn)鼓。
[0023] 步驟（2)中，轉(zhuǎn)鼓內(nèi)充滿固定相之后，固定相流速優(yōu)選2~6mL/min，進(jìn)一步優(yōu)選 4mL/min。
[0024] 步驟（2)中，所述的進(jìn)樣的流速、流動(dòng)相流速，與轉(zhuǎn)鼓內(nèi)充滿固定相之后的固定相 流速相同。
[00幼步驟似中，所述的轉(zhuǎn)速優(yōu)選1200巧m/min。
[0026] 步驟（2)中，所述的收集根據(jù)FCPC譜圖確定，F(xiàn)CPC采用紫外線監(jiān)測(cè)，所述的紫外 線的波長(zhǎng)為282皿。
[0027] 本發(fā)明中所用試劑和原料均市售可得。
[0028] 本發(fā)明的積極進(jìn)步效果在于：本發(fā)明能夠大規(guī)模地制備各生物堿單體，制備最高 能夠達(dá)到克級(jí)量；且制得的單體純度高，達(dá)98%W上；分離效率高、回收率高、產(chǎn)品純度高、 制備量較大。
【附圖說明】
[0029] 圖1為夏天無超臨界提取物FCPC圖。
[0030] 圖2為夏天無超臨界提取物HPLC圖。
【具體實(shí)施方式】
[0031] 下面通過實(shí)施例的方式進(jìn)一步說明本發(fā)明，但并不因此將本發(fā)明限制在所述的實(shí) 施例范圍之中。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，按照常規(guī)方法和條件，或按照商 品說明書選擇。
[0032] 儀器；超臨界萃取儀HA121-50-01-C(江蘇南通華安超臨界有限公司），Agilent HP1260型高效液相色譜儀、四元梯度泉、Hpcheme色譜工作站。MSU224S-100-DUZ天 平（Sartorius);高速離必分配色譜（FCPCHKromaton,RousseletRobatel);SHIMDZU LC-IOAD泉；皿-21-2紫外檢測(cè)器（上海嘉鵬科技有限公司）；SHIMDZU-7725i進(jìn)樣器。
[0033] 參考實(shí)施例1夏天無超臨界提取物的制備
[0034] 取夏天無的干燥塊莖，粉碎成20目~100目的藥材粉末；取藥材粉末一定量，加入 氨水，拌至P冊(cè)~10;將藥材投入萃取蓋中，在萃取溫度4(TC~75°C，解析蓋I溫度3(TC~ 7(TC，解析蓋II溫度3(TC~7(TC時(shí)，萃取壓力30MPa~50MPa下萃取，萃取過程中連續(xù)加入 己醇作為夾帶劑，加入流速為260mLA;當(dāng)萃取2~3小時(shí)后，停止萃取，從解析蓋I得到總 生物堿提取物，即為夏天無總生物堿提取物。W下所有實(shí)例均采用同一批樣品進(jìn)行，其