一種大豆苷的分離純化方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種大豆巧的分離純化方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 葛根為豆科植物葛化6阿'1曰1〇6曰*曰卿111(1.)〇}^1的干燥根，習稱野葛，系常用中 藥，具有解肌退熱，生津止渴，透疹，升陽止瀉，通經(jīng)活絡(luò)，解酒毒之功效。葛根含有多種有效 成分，其中黃麗類化合物是其主要有效成分。葛根黃麗藥理活性十分廣泛，如其中的主要化 合物葛根素具有降血脂，抗炎，抗必律失常、對也、肌缺血的保護作用、腎保護、抗氧化、抗缺 血再灌注損傷、抗肝缺血再灌注損傷、抗酒精中樞抑制、調(diào)控骨代謝、降血糖、利尿等作用。
[0003] 隨著葛根黃麗的藥理作用的研究深入，對葛根黃麗的分離純化也越來越受到人們 的重視，而目前人們主要關(guān)注的是葛根素及大豆巧元的分離純化研究，而對葛根中另一黃 麗類成分大豆巧研究的文獻及專利均較少，其大豆巧的結(jié)構(gòu)式如下：
[0004]
[0005] 目前，現(xiàn)有技術(shù)中的分離純化技術(shù)仍比較落后，多采用傳統(tǒng)分離純化方法，如系統(tǒng) 溶劑法、萃取法、柱色譜法等，而送些方法多存在步驟繁瑣、周期長、效率低、溶劑消耗量大 等缺點，因此開發(fā)一種高效、環(huán)保的分離純化方法有望成為研究熱點。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是為了克服現(xiàn)有技術(shù)中大豆巧的分離純化方法分離純 化效果差、步驟繁瑣、周期長、效率低、溶劑消耗量大等缺陷，提供一種完全新的從大豆巧的 分離純化單體的方法。本發(fā)明方法能夠得到較高純度（大于92. 5%)的大豆巧單體純品， 能夠?qū)崿F(xiàn)一步分離純化，適用于不同的葛根黃麗粗品，并能夠快速、高效地實現(xiàn)分離。
[0007] 本發(fā)明提供了一種大豆巧的分離純化方法，包括W下步驟；W己酸己醋、正了醇、 己醇和水所組成的四元溶劑體系作為分離溶劑體系，采用高速離必分配色譜法對葛根黃麗 提取物進行分離純化，即可；其中，所述的四元溶劑體系中，所述的己酸己醋、正了醇、己醇 和水的體積比為20: (3-5) : (2-3) : (20-25);所述的高速離必分配色譜法在高速離必分配 色譜儀中進行。
[0008] 本發(fā)明中，所述的葛根黃麗提取物是指按本發(fā)明常規(guī)提取法提取葛根得到的葛 根黃麗提取物，一般采用普通超聲提取法、循環(huán)超聲提取法或者回流提取法提取葛根即可 得葛根黃麗粗提物。本發(fā)明中，所述的葛根黃麗提取物（按葛根素含量計）其純度可W為 5%~75%，所述的純度是指葛根素的質(zhì)量占葛根黃麗粗提物總質(zhì)量的百分比。
[0009] 本發(fā)明中，所述的高速離必分配色譜法（Fastcentrifugalpartition chromatography,FCPC)是屬于現(xiàn)代逆流色譜的范疇，是一種液液分配技術(shù)，它利用不同物 質(zhì)在兩相不混溶的溶液中的分配系數(shù)不同，經(jīng)過類似連續(xù)萃取的過程，對物質(zhì)進行分離。如 今FCPC已廣泛應用于化學、醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)、石油、生物工程、食品工程等十幾個領(lǐng)域，尤其在天 然活性產(chǎn)物分離純化方面應用廣泛，并成功分離多種化合物。
[0010] 本發(fā)明中，所述的高速離必分配色譜儀為本領(lǐng)域常規(guī)的高速離必分配色譜儀， 一般轉(zhuǎn)速可調(diào)節(jié)600-2000r/min的高速離必分配色譜儀都可W，較佳地為轉(zhuǎn)速可調(diào)節(jié) 1000-1800r/min的高速離必分配色譜儀，更佳地為法國RousseletRobatel型號為FCPCA 的高速離必分配色譜儀。
[0011] 本發(fā)明中，所述的高速離必分配色譜法較佳地包括如下步驟：
[0012] (1)Si、將所述的四元溶劑體系混合均勻、分層，取下層溶液作為高速離必分配色 譜法中的固定相，取上層溶液作為高速離必分配色譜法中的流動相；
[0013]S2、制備樣品；將葛根黃麗提取物溶解于混合溶液中；其中，所述的混合溶液是所 述四元溶劑體系混合分層后的下層溶液和上層溶液各取一部分后混合而得的；
[0014]步驟Si、S2順序不分先后；
[0015] (2)固定相加入至所述高速離必分配色譜儀后，加入流動相，達到體系平衡；其 中，流動相的流速為2. 0-7.Oml/min;
[0016] (3)將樣品加入至高速離必分配色譜儀分離純化，即可。
[0017] 本發(fā)明中，較佳地，步驟Si中所述的下層溶液還經(jīng)過過濾、超聲處理后作為高速 離必分配色譜法中的固定相；所述的上層溶液還經(jīng)過過濾、超聲處理后作為高速離必分 配色譜法中的流動相。其中，所述的過濾較佳地為微孔濾膜過濾，濾膜的孔徑較佳地為 0. 3-0. 5μm，更佳地為0. 45μm。所述的超聲處理的頻率較佳地為16-28KHZ，超聲處理的時 間較佳地為15-30min。
[0018] 步驟（1)中，所述的混合溶液中，所述的下層溶液和所述上層溶液的體積比較佳 地為1:1-1:5,更佳地為1:4。
[0019] 本發(fā)明中，所述的樣品還經(jīng)過濾后，再加入至高速離必分配色譜儀進行分離純化。 所述的過濾較佳地為微孔濾膜過濾，濾膜的孔徑較佳地為0. 3-0. 5μm。
[0020] 本發(fā)明中，所述的樣品中，所述葛根黃麗提取物和所述混合溶液的質(zhì)量體積比為 7-15m邑/ml。
[0021] 步驟（2)中，加入固定相的時候，固定相的流速較佳地為20-50ml/min，所述的高 速離必分配色譜儀的轉(zhuǎn)速為600-80化pm/min;當加入流動相的時候，所述的高速離必分配 色譜儀的轉(zhuǎn)速提高至1200-15(K)r/min。
[0022] 步驟（2)中，所述的流動相的流速較佳地為2. 0-3.Oml/min。
[0023] 本發(fā)明中，較佳地，步驟（3)分離純化后還進行去除溶劑過程和干燥過程。所述去 除溶劑過程為本領(lǐng)域常規(guī)過程，較佳地在壓強-0. 01-0. 〇8Mpa、溫度70-75°C條件下進行去 除溶劑。所述的干燥過程中的溫度較佳地為60-65°C。
[0024] 在符合本領(lǐng)域常識的基礎(chǔ)上，上述各優(yōu)選條件，可任意組合，即得本發(fā)明各較佳實 例。
[0025] 本發(fā)明所用試劑和原料均市售可得。
[0026] 本發(fā)明的積極進步效果在于：本發(fā)明的分離純化方法采用高速離必分配色譜儀對 葛根黃麗粗提物進行分離純化，分離時間短、分離能力強、分離到的大豆巧純度高（HPLC純 度92. 5%~99% )，并且溶劑消耗量小、環(huán)境友好，具有良好的市場開發(fā)前景。本發(fā)明能夠 適合于不同的葛根黃麗粗品，具有技術(shù)先進、分離效率高、分離時間短、產(chǎn)品純度高等優(yōu)點。
【附圖說明】
[0027] 圖1為經(jīng)本發(fā)明分離純化前，葛根黃麗粗提物（按葛根素計）純度16%~18%的 高效液相色譜圖。
[0028] 圖2為經(jīng)本發(fā)明分離純化前，葛根黃麗粗提物（按葛根素計）純度50%~70%的 高效液相色譜圖。
[0029] 圖3為經(jīng)本發(fā)明分離純化后，大豆巧單體的高效液相色譜圖。
[0030] 圖4為本發(fā)明實施例1高速離必分配色譜的色譜圖。
[0031] 圖5為本發(fā)明實施例2高速離必分配色譜的色譜圖。
[0032] 圖6為本發(fā)明實施例3高速離必分配色譜的色譜圖。
【具體實施方式】
[0033] 下面通過實施例的方式進一步說明本發(fā)明，但并不因此將本發(fā)明限制在所述的實 施例范圍之中。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，按照常規(guī)方法和條件，或按照商 品說明書選擇。
[0034] 本發(fā)明下述實施例中使用的葛根黃麗粗提物的制備：
[0035] 稱取50g粉碎的野葛根（過20目篩），加入40 %己醇下循環(huán)超聲提取2次，每次 30min，過濾，減壓回收并干燥至恒重得葛根黃麗粗提物，按葛根素的純度計，經(jīng)檢測葛根素 質(zhì)量百分含量在16%~18%，所述的質(zhì)量百分含量是指葛根素的質(zhì)量占葛根素提取物總 質(zhì)量的百分比。
[0036] 得到葛根素純度16%~18%的葛根黃麗粗提物，加入4%鹽酸在8(TC下，水解化， 氨水中和至5~6,過濾后，經(jīng)D101大孔吸附樹脂吸附洗脫后，洗脫液減壓回收并干燥至恒 重得到葛根黃麗粗提物，按葛根素的純度計，經(jīng)檢測葛根素質(zhì)量百分含量在50 %~70 %， 所述的質(zhì)量百分含量是指葛根素的質(zhì)量占葛根素提取物總質(zhì)量的百分比。
[0037] 實施例1
[003引 （1)將己酸己醋、正了醇、己醇和水按體積比20 ;4 ;2 ;20混合，置于分液漏斗中， 充分振搖后靜置分層，取下層溶液為固定相、上層溶液為流動相，將固定相和流動相用微濾 膜過濾后超聲15min備用。將純度為16. 3% (葛根素計）的葛根黃麗粗提物溶解于混合的 溶液（流動相/固定相=1/4)中，制成濃度為lOmg/mL的樣品溶液（進樣環(huán)10ml)，0.45um 微濾膜過濾后備用；
[0039] (2)高速離必分配色譜儀中在ascending模式下W流速20. 0血/min,轉(zhuǎn)速60化/ min充滿固定相；在ascending模式，提高轉(zhuǎn)速至HOOr/min后再將流動相W2. 0血/min的 流速泉入色譜儀；待體系平衡完畢后，由進樣閥