一種淡水小環(huán)藻培養(yǎng)液及培養(yǎng)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及藻類培養(yǎng)領(lǐng)域，具體設(shè)及一種淡水小環(huán)藻培養(yǎng)液及培養(yǎng)方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 小環(huán)藻屬娃藻口圓篩藻目圓篩藻科，是淡水養(yǎng)殖中的常見娃藻種，該藻具有個體 小，生長繁殖快，營養(yǎng)豐富，無毒無副作用等特點，是水產(chǎn)動物苗種培育的良好開口巧料。有 學(xué)者調(diào)查發(fā)現(xiàn)小環(huán)藻是對郵養(yǎng)殖中后期池塘常見的優(yōu)勢種，可改善養(yǎng)殖水質(zhì)，有利于對郵 生長。
[0003] 但在天然水體中，小環(huán)藻與其他藻類混雜生長，種群密度很低，很難滿足水產(chǎn)養(yǎng)殖 的需要。目前，淡水小環(huán)藻的培養(yǎng)多采用CSI培養(yǎng)基，在該培養(yǎng)基中，小環(huán)藻生長速度較緩 慢，不利于小環(huán)藻的大規(guī)模培養(yǎng)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種淡水小環(huán)藻培養(yǎng)液，該培養(yǎng)液適用于淡水小環(huán)藻生長。
[0005] 本發(fā)明的另一個目的是提供一種小環(huán)藻的培養(yǎng)方法，該方法可提高淡水小環(huán)藻生 長速率，有利于淡水小環(huán)藻的規(guī)?；囵B(yǎng)。
[0006] 為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采取W下技術(shù)措施：
[0007] -種淡水小環(huán)藻培養(yǎng)液（本發(fā)明或稱LXC培養(yǎng)液），包括：
[0008] 4 水硝酸巧（Ca(N〇3)2 ·4Η20) 60~75mg/L 硝酸卸（KN(V) 40~50mg/L 7 水硫酸鎮(zhèn)CMgS〇4.7H2〇) 35~40mg/L 5 水β-甘油縣酸鋼（P-Na;glycerophosphate'5H:0) 20~25m呂/L 4-巧乙基脈嗦乙礙酸（HEP路） 400~彿Omg/L 9 水偏插酸鋼（Na2Si〇3.9H2〇) 150~200mg/L 6 水氯化鐵（FeCl3.6壓_0) 3.5~4ing/L 藝二胺四己酸二巧（Na^EDTA) 4~4.5mg/L 4 水'i'Yk化?·!?;ainCl:.4H;0) 0.25~化?5m狂也 7 水氯化粹（ZnCb7H2〇) 25~30ug/L 2 水合鋼酸納（Ν32Μο04·2Η2〇) 20~24ug/L 6水氯化鉆（CoCk6H2Q) 7-12雌化 鄰.?';南B|;*'ViurminB|.]) 0.05-0.111g/L 維生素Η(Biotin生物素） 0.05~0.lug/L
[0009] 維生素B1CT扣an血e:既C). 備-IQugiL..
[0010] 其余為雙蒸水，培養(yǎng)液的抑范圍是6~7。
[0011] 所述的小環(huán)藻為生長在淡水中的小環(huán)藻。
[0012] 一種小環(huán)藻的培養(yǎng)方法，包括下述步驟：
[0013] 1)將培養(yǎng)至對數(shù)期的小環(huán)藻進(jìn)行饑餓培養(yǎng)1~2d(培養(yǎng)液為不含氮、憐、娃、鐵的 CSI培養(yǎng)基），備用。
[0014] 2)將經(jīng)過饑餓培養(yǎng)的小環(huán)藻3000~400化/min離屯、5~lOmin，棄上清后接種至 LXC培養(yǎng)液中，接種量為1~10Xl〇4cells/mL。28~30°C，光照強度為3000~50001X，光 暗比為12h~14h:lOh~12h，每隔化振搖錐形瓶一次。
[0015] 本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有W下優(yōu)點：
[0016] 本發(fā)明所公開的培養(yǎng)液和培養(yǎng)方法，根據(jù)淡水小環(huán)藻生長的營養(yǎng)鹽、溫度、抑值等 的需求特性，達(dá)到促進(jìn)純種淡水小環(huán)藻快速生長的目的。本發(fā)明中培養(yǎng)液搭配合理，可W有 效地促進(jìn)小環(huán)藻的快速分裂增殖，促進(jìn)其更好地吸收利用各種營養(yǎng)物質(zhì)，加快小環(huán)藻細(xì)胞 的新陳代謝，提高其生產(chǎn)量。本發(fā)明中培養(yǎng)方法操作簡單，針對性強，適應(yīng)淡水小環(huán)藻的快 速生長，因此本發(fā)明具備了廣泛的市場前景，特別適合于在水產(chǎn)養(yǎng)殖領(lǐng)域推廣應(yīng)用。
【附圖說明】
[0017] 圖1為實施例1中的小環(huán)藻在LXC培養(yǎng)液和CSI培養(yǎng)液中的生長曲線示意圖。
【具體實施方式】
[0018]本發(fā)明所述技術(shù)方案，如未特別說明，均為常規(guī)技術(shù)，所述試劑或原料，如未特別 說明，均來源于商業(yè)渠道。
[001引實施例1 :
[0020] -種淡水小環(huán)藻培養(yǎng)液（本發(fā)明實施例或稱LXC培養(yǎng)液），包括：
[0021] 4 水稱酸巧（Ca(N〇3)2 ·4Η20) 75mg/L 硝酸狎（KN03) 50mg/L 7 水硫酸錢（MgSO.r7H2〇> 40mg/L 5 水β-甘油憐酸銷（β-Νπ;glycerophosphate·5H；!0) 25tng/L 4-程乙基嘛嗦己橫酸（HEP'ES) 500mg/L 9 水偏桂酸銷CNa：2SiO：r9H2〇) 200mg/L 6 水氯化鐵（FeCb6H2O) 4mg/L 乙二胺四乙酸二納（Na出DTA) 4.5mg/L
[0022] 4 氷含氯化輸（MnCV4H2〇) 0.25mg/L 7 水氯化巧（ZnCb7H2〇) 30ug/L 2 水合箱酸納（Ν32Μο04·2Η2〇) 24ug/L 6 水氯化鉆（CoCk6 巧2〇) 12ug/L 維生素Bn(VitaminB12) O.lug/L 維生素H(Biotin生物素） O.Iug/L 維生素BI(ThiamineHC) lOug/L 其余為雙蒸水。
[002引 實施例2 :
[0024] -種淡水小環(huán)藻培養(yǎng)方法，包括：
[00巧](1)按照實施例1所述配方配制LXC培養(yǎng)液，調(diào)節(jié)抑值為7。放入滅菌鍋中，120°C，滅菌20min。滅菌結(jié)束后，放入4°C冰箱中備用。
[0026] (2)將小環(huán)藻在CSI培養(yǎng)基（《HandbookofMicroalgalQilture》）中培養(yǎng)至 對數(shù)期，備用。
[0027] (3)將（2)中的小環(huán)藻進(jìn)行饑餓培養(yǎng)Id(培養(yǎng)液為不含氮、憐、娃、鐵的CSI培養(yǎng) 基），備用。
[0028] (4)將經(jīng)過饑餓培養(yǎng)的小環(huán)藻4000r/min離屯、lOmin，棄上清后分別接種到裝有 LXC培養(yǎng)液（試驗組）和CSI培養(yǎng)液（對照組）的錐形瓶中，接種量為1. 58X104cells/mL， 然后用封口膜封口。
[0029](5)將錐形瓶移入光照培養(yǎng)箱中，設(shè)定溫度為28°C，光照強度為30001X，光暗比為 12h:12h〇
[0030] (6)每隔化振搖錐形瓶一次，w上所有器皿均需滅菌，操作均在超凈工作臺中進(jìn) 行。
[0031] (7)每2d取樣于顯微鏡下觀察計數(shù)。
[0032] 細(xì)胞生長情況如表1和圖1所示，試驗組小環(huán)藻在接種的第Id藻細(xì)胞開始 分裂，第5d進(jìn)入對數(shù)期。生長速率一直遞增到接種后的第lld，最大藻細(xì)胞密度達(dá)到 78. 12X10"cells/ml〇
[003引表1小環(huán)藻細(xì)胞密度隨時間的變化（X104cells/ml)
[0034]
[0035] 對照組CSI培養(yǎng)基中的細(xì)胞生長趨勢與試驗組中基本一致，但細(xì)胞生長速率顯著 低于試驗組，在第1Id達(dá)到最大細(xì)胞密度，僅有8. 09X104cells/ml。
[003引實施例3 :
[0037] -種淡水小環(huán)藻培養(yǎng)方法，包括：
[0038] (1)按照實施例1所述配方配置好LXC培養(yǎng)液，調(diào)節(jié)抑值為6,放入滅菌鍋中， 120°C，滅菌20min，滅菌結(jié)束后。放入4°C冰箱中備用。
[003引 似將小環(huán)藻在CSI培養(yǎng)基中培養(yǎng)至對數(shù)期，備用。
[0040] (3)將（2)中的小環(huán)藻進(jìn)行饑餓培養(yǎng)Id(培養(yǎng)液為不含氮、憐、娃、鐵的CSI培養(yǎng) 基），備用。
[0041] (4)將經(jīng)過饑餓培養(yǎng)的小環(huán)藻4000r/min離屯、lOmin，棄上清后分別接種到裝有 LXC培養(yǎng)液（試驗組）和CSI培養(yǎng)液（對照組）的錐形瓶中，接種量為1.92X104cells/mL， 然后用封口膜封口。
[0042] (5)將錐形瓶移入光照培養(yǎng)箱中，設(shè)定溫度為將28°C，光照強度為30001X，光暗比 為1化：1化。
[0043] (6)每隔化振搖錐形瓶一次。W上所有器皿均需滅菌，操作均在超凈工作臺中進(jìn) 行。
[0044] (7)每2d取樣于顯微鏡下觀察計數(shù)。
[0045] 經(jīng)過lid培養(yǎng)，試驗組細(xì)胞密度可達(dá)79. 53 + 4. 33X104cells/ml。
[0046] 實施例4:
[0047] 一種小環(huán)藻培養(yǎng)方法，包括：
[0048] (1)按照實施例1所述培養(yǎng)液配方配置好LXC培養(yǎng)液，調(diào)節(jié)pH值為6,放入滅菌鍋 中，120°C，滅菌20min。滅菌結(jié)束后，放入4°C冰箱中備用。
[0049] (2)將小環(huán)藻在CSI培養(yǎng)基中培養(yǎng)至對數(shù)期，備用。
[0050] (3)將（2)中的小環(huán)藻進(jìn)行饑餓培養(yǎng)Id(培養(yǎng)液為不含氮、憐、娃、鐵的CSI培養(yǎng) 基），備用。
[0051] (4)將經(jīng)過饑餓培養(yǎng)的小環(huán)藻4000r/min離屯、lOmin，棄上清后分別接種到裝有 LXC培養(yǎng)液（試驗組）和CSI培養(yǎng)液（對照組）的錐形瓶中，接種量為1.92X105cells/mL， 然后用封口膜封口。
[0052] (5)將錐形瓶移入光照培養(yǎng)箱中，設(shè)定溫度為將30°C，光照強度為30001X，光暗比 為 12h:12h;
[0053] (6)每隔化振搖錐形瓶一次。W上所有器皿均需滅菌，操作均在超凈工作臺中進(jìn) 行。
[0054] (7)每2d取樣于顯微鏡下觀察計數(shù)。
[00巧]經(jīng)過lid培養(yǎng)，試驗組細(xì)胞密度可達(dá)82. 32 + 4. 55X 104cells/ml。
【主權(quán)項】
1. 一種淡水小環(huán)藻培養(yǎng)液，包括： 4水硝酸鈣 60~75mg/L 硝酸鉀 40~50mg/L 7水硫酸鎂 35~40mg/L 5水β-甘油磷酸鈉 20~25mg/L 4-羥乙基哌嗪乙磺酸 400~500mg/L 9水偏硅酸鈉 150~200mg/L 6水氯化鐵 3. 5~4mg/L 乙二胺四乙酸二鈉 4~4.5mg/L 4水合氯化錳 0· 25~0· 35mg/L 7水氯化鋅 25~30ug/L 2水合鉬酸鈉 20~24ug/L 6水氯化鈷 7~12ug/L 維生素B12 0. 05~0.lug/L 維生素Η 0. 05~0.lug/L 維生素B1 5~10ug/L 其余為雙蒸水，培養(yǎng)液的pH范圍是6~7。2. 利用權(quán)利要求1所述培養(yǎng)液培養(yǎng)小環(huán)藻的方法，包括： 將經(jīng)過饑餓培養(yǎng)的小環(huán)藻3000~4000r/min離心5~10min，棄上清后接種至權(quán)利要求1 所述培養(yǎng)液中，28~30°C，光照強度為3000~50001x，光暗比為12h~14h: 10h~12h，每隔3h振 搖錐形瓶一次。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種淡水小環(huán)藻培養(yǎng)液及培養(yǎng)方法，本發(fā)明所公開的培養(yǎng)液，配方組分簡單易得，根據(jù)淡水小環(huán)藻生長的營養(yǎng)鹽、溫度、pH值等的需求特性，可以有效地促進(jìn)小環(huán)藻的快速分裂增殖，促進(jìn)其更好地吸收利用各種營養(yǎng)物質(zhì)，加快小環(huán)藻細(xì)胞的新陳代謝，提高其生產(chǎn)量，達(dá)到促進(jìn)純種淡水小環(huán)藻快速生長的目的。將該培養(yǎng)液結(jié)合本發(fā)明提供的培養(yǎng)方法，培養(yǎng)方法操作簡單，針對性強，適應(yīng)淡水小環(huán)藻的快速生長，具備廣泛的市場前景，特別適合于在水產(chǎn)養(yǎng)殖領(lǐng)域推廣應(yīng)用。
【IPC分類】C12R1/89, C12N1/12
【公開號】CN105368713
【申請?zhí)枴緾N201510967854
【發(fā)明人】李曉莉, 李谷, 陶玲
【申請人】中國水產(chǎn)科學(xué)研究院長江水產(chǎn)研究所
【公開日】2016年3月2日
【申請日】2015年12月22日