一種噴霧逆流法提取透明質(zhì)酸鈉的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及透明質(zhì)酸鈉提取領(lǐng)域，具體涉及一種噴霧逆流法提取透明質(zhì)酸鈉的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]透明質(zhì)酸是一種高分子的聚合物，是由單位D-葡萄糖醛酸及N-乙酰葡糖胺組成的高級(jí)直鏈粘多糖。D-葡萄糖醛酸及N-乙酰葡糖胺之間由β-1，3-配糖鍵相連，雙糖單位之間由β-1，4_配糖鍵相連。透明質(zhì)酸溶于水、不溶于有機(jī)溶劑，具有許多天然粘多糖共有的性質(zhì)。從生物體提取的透明質(zhì)酸呈白色，無異味、具有很強(qiáng)的吸濕性。如何提高透明質(zhì)鈉的發(fā)酵效率以及純度是現(xiàn)有技術(shù)需要解決的技術(shù)問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]為了克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，本發(fā)明提供了一種使用噴霧逆流法快速提取透明質(zhì)酸鈉的方法。
[0004]本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的:
[0005]—種噴霧逆流法提取透明質(zhì)酸鈉的方法，其包括如下步驟:1)發(fā)酵，2)攪拌中和，3)過濾，4)噴霧提取，5)離心干燥。
[0006]具體地，所述方法包括如下步驟:
[0007]1)發(fā)酵:將獸疫鏈球菌ATCC39920種子液和乳酸乳球菌ATCC11454種子液按照2: 1的體積比混合，然后按照8%的接種量接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，連續(xù)發(fā)酵60小時(shí)，得到透明質(zhì)酸發(fā)酵液；
[0008]2)攪拌中和:通過攪拌機(jī)將透明質(zhì)酸發(fā)酵液充分混合均勻，然后用1Μ的氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH為7.5，靜置12小時(shí)，得到液體A ;
[0009]3)過濾:往液體A中加入硅膠粉和竹炭纖維，攪拌均勻后，通過板框過濾，收集過濾液；
[0010]4)噴霧提取:先將酒精通過離心機(jī)打入噴射器，酒精度數(shù)為45-75°，調(diào)節(jié)酒精閥壓力，保證酒精管道壓強(qiáng)為0.02Mpa ;再將步驟3)所得過濾液通過離心機(jī)打入噴射器，調(diào)節(jié)進(jìn)料閥，保證進(jìn)料管道壓力為0.1Mpa ;觀察噴射后料酒混合物，提取完成以混合物中有少量纖維為準(zhǔn)；
[0011]5)離心干燥:將步驟4)所得混合物離心，收集上清液和沉淀，將沉淀干燥，包裝即得。優(yōu)選地，所述獸疫鏈球菌ATCC39920種子液和乳酸乳球菌ATCC11454種子液的濃度均為 IX 10s個(gè) /ml ο
[0012]優(yōu)選地，所述發(fā)酵培養(yǎng)基的組分為:葡萄糖6%、豆柏1 %、酵母粉1 %、七水硫酸鎂
0.1%、磷酸二氫鉀0.1%、磷酸氫二鈉0.05%、氯化鉀0.02%、氯化鋅0.05%，余量為水。
[0013]優(yōu)選地，所述硅膠粉和竹炭纖維的添加量分別占液體Α質(zhì)量的2%和1% ;所述硅膠粉和竹炭纖維的粒徑分別為200nm和lum。
[0014]本發(fā)明取得的有益效果主要包括:
[0015]本發(fā)明采用混合菌株發(fā)酵，發(fā)酵效率大大提高，優(yōu)于現(xiàn)有發(fā)酵菌株；本發(fā)明除雜用硅膠粉和竹炭纖維；孔徑大小合適，可以吸附不同的雜質(zhì)類型；本發(fā)明采用噴霧法將料液與酒精充分混合，能大幅度的減少做料時(shí)間；本發(fā)明生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單，適合工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)，收率高，并且大大降低了生產(chǎn)成本。
【具體實(shí)施方式】
[0016]為了使本技術(shù)領(lǐng)域的人員更好地理解本申請(qǐng)中的技術(shù)方案，下面將結(jié)合本申請(qǐng)具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更加清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本申請(qǐng)一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒旧暾?qǐng)中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有作出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都應(yīng)當(dāng)屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。
[0017]實(shí)施例1
[0018]—種噴霧逆流法提取透明質(zhì)酸鈉的方法，其包括如下步驟:
[0019]1)發(fā)酵:分別按照常規(guī)培養(yǎng)獸疫鏈球菌ATCC39920和乳酸乳球菌ATCC11454，獲得獸疫鏈球菌ATCC39920種子液和乳酸乳球菌ATCC11454種子液，按照2: 1的體積比混合得到混合種子液，然后按照8%的接種量接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，連續(xù)發(fā)酵60小時(shí)，得到透明質(zhì)酸發(fā)酵液；發(fā)酵過程中的溫度控制在32°C，pH控制在6.8，控制葡萄糖濃度不低于1%質(zhì)量分?jǐn)?shù)；兩種種子液的濃度均為1 X 10s個(gè)/ml ;
[0020]所述發(fā)酵培養(yǎng)基的組分為:葡萄糖6%、豆柏1%、酵母粉1%、七水硫酸鎂0.1%,磷酸二氫鉀0.1%、磷酸氫二鈉0.05%、氯化鉀0.02%、氯化鋅0.05%，余量為水。
[0021]2)通過攪拌機(jī)將透明質(zhì)酸發(fā)酵液充分混合均勻，然后用1M的氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH為7.5，靜置12小時(shí)，得到液體A:
[0022]3)往液體A中加入硅膠粉和竹炭纖維，攪拌均勻后，通過板框過濾，收集過濾液；
[0023]硅膠粉和竹炭纖維的添加量分別占液體A質(zhì)量的2%和1%;硅膠粉和竹炭纖維的粒徑分別為200nm和lum ；
[0024]4)先將酒精通過離心機(jī)打入噴射器，酒精度數(shù)為60°，調(diào)節(jié)酒精閥壓力，保證酒精管道壓強(qiáng)為0.02Mpa ;再將步驟3)所得過濾液通過離心機(jī)打入噴射器，調(diào)節(jié)進(jìn)料閥，保證進(jìn)料管道壓力為0.1Mpa;觀察噴射后料酒混合物，提取完成以混合物中有少量纖維為準(zhǔn)，排出混合物；其中，酒精和步驟3)所得過濾液的體積比為2: 1;
[0025]5)將步驟4)所得混合物離心，收集上清液和沉淀，將沉淀干燥，包裝即得。
[0026]本發(fā)明發(fā)酵液中含透明質(zhì)酸產(chǎn)品產(chǎn)率達(dá)3.3g/L，而采用單一的獸疫鏈球菌ATCC39920發(fā)酵，最高產(chǎn)率為1.8g/L，本發(fā)明組合菌株發(fā)酵效率大大提高；本發(fā)明透明質(zhì)酸鈉的收率為82%，純度為95%以上。
[0027]實(shí)施例2
[0028]—種噴霧逆流法提取透明質(zhì)酸鈉的方法，其包括如下步驟:
[0029]1)發(fā)酵:分別按照常規(guī)培養(yǎng)獸疫鏈球菌ATCC39920和乳酸乳球菌ATCC11454，獲得獸疫鏈球菌ATCC39920種子液和乳酸乳球菌ATCC11454種子液，按照3: 1的體積比混合，然后按照8%的接種量接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，連續(xù)發(fā)酵60小時(shí)，得到透明質(zhì)酸發(fā)酵液；發(fā)酵過程中的溫度控制在32°C，pH控制在6.8，控制葡萄糖濃度不低于1%質(zhì)量分?jǐn)?shù)；兩種種子液的濃度均為1 X 10s個(gè)/ml ;
[0030]所述發(fā)酵培養(yǎng)基的組分為:葡萄糖6%、豆柏1%、酵母粉1%、七水硫酸鎂0.1%,磷酸二氫鉀0.1%、磷酸氫二鈉0.05%、氯化鉀0.02%、氯化鋅0.05%，余量為水。
[0031]2)通過攪拌機(jī)將透明質(zhì)酸發(fā)酵液充分混合均勻，然后用1M的氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH為7.5，靜置12小時(shí)，得到液體A ;
[0032]3)往液體A中加入硅膠粉和竹炭纖維，攪拌均勻后，通過板框過濾，收集過濾液；
[0033]硅膠粉和竹炭纖維的添加量分別占液體A質(zhì)量的1%和1%;硅膠粉和竹炭纖維的粒徑分別為200nm和lum ；
[0034]4)先將酒精通過離心機(jī)打入噴射器，酒精度數(shù)為70°，調(diào)節(jié)酒精閥壓力，保證酒精管道壓強(qiáng)為0.02Mpa ;再將步驟3)所得過濾液通過離心機(jī)打入噴射器，調(diào)節(jié)進(jìn)料閥，保證進(jìn)料管道壓力為0.1Mpa;觀察噴射后料酒混合物，提取完成以混合物中有少量纖維為準(zhǔn)，排出混合物；其中，酒精和步驟3)所得過濾液的體積比為2: 1;
[0035]5)將步驟4)所得混合物離心，收集上清液和沉淀，將沉淀干燥，包裝即得。
[0036]其中，發(fā)酵液中含透明質(zhì)酸產(chǎn)品產(chǎn)率達(dá)3.4g/L，而采用單一的獸疫鏈球菌ATCC39920發(fā)酵，最高產(chǎn)率為1.8g/L ;透明質(zhì)酸鈉的收率為83%，純度為95%以上。
[0037]以上列舉的僅是本發(fā)明的最佳具體實(shí)施例。顯然，本發(fā)明不限于以上實(shí)施例，還可以有許多變形。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員能從本發(fā)明公開的內(nèi)容直接導(dǎo)出或聯(lián)想到的所有變形，均應(yīng)認(rèn)為是本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種噴霧逆流法提取透明質(zhì)酸鈉的方法，其包括如下步驟:1)發(fā)酵，2)攪拌中和，3)過濾，4)噴霧提取，5)離心干燥。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟: 1)發(fā)酵:將獸疫鏈球菌ATCC39920種子液和乳酸乳球菌ATCC11454種子液按照2: 1的體積比混合，然后按照8%的接種量接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，連續(xù)發(fā)酵60小時(shí)，得到透明質(zhì)酸發(fā)酵液； 2)攪拌中和:通過攪拌機(jī)將透明質(zhì)酸發(fā)酵液充分混合均勻，然后用1M的氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH為7.5，靜置12小時(shí)，得到液體A ; 3)過濾:往液體A中加入硅膠粉和竹炭纖維，攪拌均勻后，通過板框過濾，收集過濾液；4)噴霧提取:先將酒精打入噴射器，酒精度數(shù)為45-75°，調(diào)節(jié)酒精閥壓力，保證酒精管道壓強(qiáng)為0.02Mpa ;再將步驟3)所得過濾液打入噴射器，調(diào)節(jié)進(jìn)料閥，保證進(jìn)料管道壓力為0.1Mpa;獲得料酒混合物；其中，酒精和步驟3)所得過濾液的體積比為2: 1; 5)離心干燥:將步驟4)所得料酒混合物離心，收集上清液和沉淀，將沉淀干燥，包裝即得。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述獸疫鏈球菌ATCC39920種子液和乳酸乳球菌ATCC11454種子液的濃度均為1 X 10s個(gè)/ml。4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述發(fā)酵培養(yǎng)基的組分為:葡萄糖6%、豆柏1 %、酵母粉1 %、七水硫酸鎂0.1 %、磷酸二氫鉀0.1 %、磷酸氫二鈉0.05%、氯化鉀0.02%,氯化鋅0.05%，余量為水；以上均為質(zhì)量百分?jǐn)?shù)。5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述硅膠粉和竹炭纖維的添加量分別占液體A質(zhì)量的2%和1% ;所述娃膠粉和竹炭纖維的粒徑分別為200nm和lum。
【專利摘要】本發(fā)明屬于透明質(zhì)酸鈉提取領(lǐng)域，公開了一種噴霧逆流法提取透明質(zhì)酸鈉的方法，其包括如下步驟：1)發(fā)酵，2)攪拌中和，3)過濾，4)噴霧提取，5)離心干燥。本發(fā)明解決了透明質(zhì)酸鈉產(chǎn)率和純度低，生產(chǎn)中物料提取不完全，纖維過長(zhǎng)不宜打料的問題，從而縮短了生產(chǎn)周期，提升產(chǎn)品質(zhì)量。
【IPC分類】C12R1/01, C12R1/46, C12P39/00, C12P19/26, C08B37/08
【公開號(hào)】CN105368912
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510744297
【發(fā)明人】唐永強(qiáng), 魏璐, 崔國梁, 李取泉, 董爽
【申請(qǐng)人】新疆阜豐生物科技有限公司
【公開日】2016年3月2日
【申請(qǐng)日】2015年10月28日