一種黑色素細(xì)胞激素的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說涉及一種制備黑色素細(xì)胞激素的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]黑色素細(xì)胞激素(MSH)，是在1916年，從切除蛙的腦下垂體后，其表皮色素細(xì)胞及細(xì)胞內(nèi)色素均減少的變化中發(fā)現(xiàn)的。1932年進(jìn)一步證明對色素細(xì)胞有影響的一種激素，存在于腦下垂體的中葉。后來，臨床報告長期使用ACTH制品有引起皮膚黑色素沉著的作用，引起了人們的重視和深入的研究。
[0003]MSH來源于腦下垂體主要作用是促進(jìn)皮膚黑色素細(xì)胞分泌黑色素，使皮膚變黑，對于皮膚、頭發(fā)的黑色素缺乏癥有顯著地療效。據(jù)稱，MSH能游離脂肪組織的的脂肪酸，改善人的視覺。
[0004]經(jīng)專利檢索，并沒有黑色素細(xì)胞激素制備方法方面的專利文獻(xiàn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是提供了一種黑色素細(xì)胞激素的制備方法。
[0006]本發(fā)明的技術(shù)方案是:將哺乳動物腦垂體經(jīng)脫水干燥、取垂體前葉研磨成粉后，經(jīng)有機(jī)溶劑、無機(jī)酸兩次提取，過濾去雜蛋白等步驟得黑色素細(xì)胞激素，包括如下步驟:
(1)原料處理:將豬腦垂體取出后，立即投入丙酮中，浸泡脫水3~5次，每次約24小時，至腦垂體變硬為止，分離前葉，真空干燥，磨粉，得前葉干粉；
(2)一次提取:取前葉干粉，按1:5-1:10的比例加入丙酮，再按1:2-1:5的比例，加入
0.5 mol / L~5 mol / L鹽酸溶液，攪拌溶解，加熱至40°C ~60°C，保溫20~40分鐘，然后冷卻至10~25°C，離心20~40分鐘，過濾，取上清液，上清液預(yù)冷至1~5°C ；
(3)二次提取:將一次提取中的渣子再加入步驟(2)—半量的丙酮0.05 mol / L~0.5mol / L鹽酸溶液，攪拌溶解，加熱至40°C -60°C，保溫20~40分鐘，然后冷卻至10~25°C，離心20~40分鐘，去渣過濾，取上清液；
(4)沉淀:合并兩次上清液，將上清液冷卻至1~5°C，過濾至澄清；加入5~10倍量體積的丙酮，沉淀10~30分鐘后，去上清液，立即用丙酮洗滌去除沉淀物上的上清液，沉淀物用無水丙酮脫水洗滌2~5次；
(5)干燥:真空干燥，即得黑色素細(xì)胞激素。
[0007]本發(fā)明的優(yōu)點和積極效果:
本制備方法的的優(yōu)勢之處在于，工藝簡單，成本低，過程溫和，制得的黑色素細(xì)胞激素的效價達(dá)到3單位/mg。
【具體實施方式】
[0008]下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
[0009]實施例1 所述的利用將哺乳動物腦垂體經(jīng)脫水干燥、研磨成粉后，經(jīng)有機(jī)溶劑、無機(jī)酸兩次提取，去雜蛋白過濾等步驟得黑色素細(xì)胞激素，包括如下步驟:
(1)原料處理:將豬腦垂體取出后，立即投入丙酮中，浸泡脫水3次，每次約24小時，至腦垂體變硬為止，分離前葉，分別干燥，磨粉，得前葉干粉；
(2)—次提取:取3.2kg前葉干粉，加入22.4L丙酮，在攪拌下加入10L的1 mol / L鹽酸溶液，攪拌溶解后，加熱至50°C，保溫28分鐘，然后冷卻至18°C，離心30分鐘，過濾，取上清液，上清液預(yù)冷至:TC ;
(3)二次提取:將一次提取中的渣子加入11.2L丙酮，攪拌下加入5L的0.1 mol / L鹽酸溶液，攪拌溶解后，加熱至50°C，保溫30分鐘，然后冷卻至20°C，離心25分鐘，過濾，取上清液；
(4)沉淀:合并兩次上清液，將上清液冷卻至3°C，過濾至澄清；加入336L丙酮，沉淀15分鐘后，吸出上清液，立即用丙酮洗滌去除沉淀物上的上清液，沉淀物用無水丙酮脫水洗滌3次；
(5)干燥:真空干燥，天平稱重即得黑色素細(xì)胞激素成品230g。
[0010]實施例2
(1)原料處理:將豬腦垂體取出后，立即投入丙酮中，浸泡脫水4次，每次約24小時，至腦垂體變硬為止，分離前葉，分別干燥，磨粉，得前葉干粉；
(2)—次提取:取3.6kg前葉干粉，加入21.6L丙酮，在攪拌下加入8L的1 mol / L鹽酸溶液，攪拌溶解后，加熱至40°C，保溫35分鐘，然后冷卻至25°C，離心20分鐘，過濾，取上清液，上清液預(yù)冷至2 °C ;
(3)二次提取:將一次提取中的渣子加入10.8L丙酮，攪拌下加入4L的0.1 mol / L鹽酸溶液，攪拌溶解后，加熱至40°C，保溫35分鐘，然后冷卻至20°C，離心20分鐘，過濾，取上清液；
(4)沉淀:合并兩次上清液，將上清液冷卻至2°C，過濾至澄清；加入200L丙酮，沉淀20分鐘后，吸出上清液，立即用丙酮洗滌去除沉淀物上的上清液，沉淀物用無水丙酮脫水洗滌5次；
(5)干燥:真空干燥，天平稱重即得黑色素細(xì)胞激素成品248g。
[0011]以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實施例而已，并非是對本發(fā)明作其它形式的限制，任何熟悉本專業(yè)的技術(shù)人員可能利用上述揭示的技術(shù)內(nèi)容加以變更或改型為等同變化的等效實施例。但是凡是未脫離本發(fā)明技術(shù)方案內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實質(zhì)對以上實施例所作的任何簡單修改、等同變化與改型，仍屬于本發(fā)明技術(shù)方案的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項】
1.一種黑色素細(xì)胞激素的制備方法，其特征在于:將哺乳動物腦垂體前葉經(jīng)脫水干燥、研磨成粉后，經(jīng)有機(jī)溶劑、無機(jī)酸兩次提取，過濾去雜蛋白等步驟，得黑色素細(xì)胞激素。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備黑色素細(xì)胞激素的方法，其特征在于，該方法包括如下步驟: 原料處理:將哺乳動物的腦垂體取出后，用丙酮浸泡脫水，至垂體變硬，分離出前葉；真空干燥，磨粉； (2)—次提取:取前葉干粉，加入有機(jī)溶劑、無機(jī)酸，攪拌溶解，然后加熱、保溫、冷卻，離心過濾取上清液； (3)二次提取:將一次提取中的渣子再次加入步驟(2) —半量的有機(jī)溶劑和無機(jī)酸，攪拌溶解，然后加熱、保溫、冷卻，離心過濾取上清液，預(yù)冷； (4)沉淀:合并兩次上清液，冷卻，過濾，加入有機(jī)溶劑進(jìn)行沉淀，沉淀完成后，去上清液，沉淀物用無水丙酮脫水洗滌； (5)干燥:真空干燥，得黑色素細(xì)胞激素。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于:步驟(1)中，所述的哺乳動物為豬、狗、牛、羊、馬中的一種，優(yōu)選為豬、牛、羊。4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于:步驟(2)中，有機(jī)溶劑為丙酮，前葉干粉與有機(jī)溶劑的重量比為1:5至1:10 ;無機(jī)酸為0.5 mol / L~5 mol / L鹽酸溶液，前葉干粉與無機(jī)酸的重量比為1:2至1:5。5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于:步驟(2)、步驟(3)中，加熱至40°C~60°C，保溫20~40分鐘，然后冷卻至10°C ~25°C，離心過濾上清液預(yù)冷至1~5°C。6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于:步驟(4)上清液冷卻至1~5°C;用有機(jī)溶劑丙酮沉淀，上清液與丙酮的體積比例為1:5至1:10，沉淀10~30分鐘。7.一種由權(quán)利要求1-6任意之一所述的方法制備得到的黑色素細(xì)胞激素。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種以哺乳動物腦垂體前葉為原料，提取黑色素細(xì)胞激素的制備方法。將哺乳動物腦垂體前葉經(jīng)干燥、研磨成粉后，添加有機(jī)溶劑、無機(jī)酸提取，過濾去雜蛋白等步驟，得到黑色素細(xì)胞激素。該技術(shù)的優(yōu)點在于操作簡單，成本低，產(chǎn)品的效價達(dá)到3單位/mg。
【IPC分類】C07K1/36, C07K1/30, C07K1/34, C07K14/68
【公開號】CN105384810
【申請?zhí)枴緾N201510826532
【發(fā)明人】劉乃山, 趙葉華, 劉翠珍
【申請人】青島康原藥業(yè)有限公司
【公開日】2016年3月9日
【申請日】2015年11月25日