一種從柑橘皮、果中提取橙皮苷、新橙皮苷和辛弗林的方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及植物提取領域，尤其是一種從枳實小果中提取黃酮的方法。
【背景技術】
[0002]柑橘是蕓香科柑橘屬重要的植物，主要是利用其果肉而很少對效果和果皮進行綜合利用，大多數(shù)被當作廢物填埋處理。由于柑橘果、皮含有較多生物活性物質，因此對其的利用已經(jīng)越來越廣泛。橙皮苷(Hesperidin)是柑橘果皮中的天然黃酮類化合物，采用堿浸酸析法從臍橙中提取出的橙皮苷純度為80.3%，得率為1.55%。新橙皮苷(Neohesperidin)是由橙皮素與新橙皮糖形成的糖苷，目前提取新橙皮苷的方法包括超聲輔助提取法、索氏提取法、和水浴回流提取法。辛弗林(Synephrine)是枳實生物堿類物質的主要成分，辛弗林的含量隨著柑橘果實的成熟而減少，因此一般選取未成熟的果實即落果來作為提取原料；辛弗林的提取方法有加熱回流法、超聲提取法和微波提取法。

【發(fā)明內容】

[0003]本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一種高效從枳實小果和柑橘皮中同時提取分離橙皮苷、新橙皮苷和辛弗林的方法，將枳實小果干燥、粉碎，滲漉提取，然后取藥渣進行橙皮苷提取，取滲漉液進行新橙皮苷和辛弗林提取；得到橙皮苷含量可達95%，收率為4.0%以上；新橙皮苷提取物含量可達98%，收率為2.0%以上，辛弗林提取物含量可達90%，收率為
2.5%以上。為了解決該技術問題，本專利具體實施步驟如下:
一、苦橙枳實小果前處理
收集枳實小果干燥、粉碎，過篩，置于提取罐中，在40-45°C，用35-50%乙醇水溶液，按照料液比為1: (10-20)的比例進行滲滴提取，滲滴提取10_12h ;然后添加0.01-0.1%的果膠酶，50 °C下攪拌30min，然后將溫度調到70 °C，處理15_30min，將果膠酶殺滅；然后過濾，將藥渣和濾液分離；藥渣用于橙皮苷提取，濾液用于新橙皮苷和辛弗林的提取。
[0004]所述過篩的篩網(wǎng)為10目、或者60目、或者100目；
所述滲漉提取可以進行3次。
[0005]二、橙皮苷提取、分離、純化
將上述藥渣按料液比為1: (5-10)，用pH值為10.0-11.0堿液浸泡，提取0.5_lh ;所得提取液用HC1調至pH值為2.0-3.0，在5-10°C放置，沉淀；將沉淀用水洗滌，洗至中性，再用70%低碳醇溶解，用HC1調至pH值為4.0-5.0，在5_10°C放置，重結晶后洗滌、干燥即為橙皮苷產(chǎn)品。該產(chǎn)品中橙皮苷含量可達95.0%，橙皮苷收率為4.0%以上。
[0006]所述堿液為Ca (0H) 2或者NaOH ；
所述低碳醇為甲醇或者乙醇。
[0007]三、新橙皮苷提取、分離、純化
取步驟一所述的濾液過強酸性苯乙烯型陽離子柱，收集離子柱流出液，然后用水洗。將離子柱流出液和水洗液混合，進大孔吸附樹脂柱，先用水洗，然后用20%低碳醇洗滌，再用70%低碳醇洗脫；取70%低碳醇洗脫液濃縮，在5-10°C放置，用濃縮液質量5.0%的比例添加(NH4)2S04/NaCl助析，得粗品；將粗品以料液比l:5g/mL的比例、用70%低碳醇溶解，在5-10°C放置，重結晶，所得晶體即為新橙皮苷產(chǎn)品。該產(chǎn)品中橙皮苷含量可達98.0%，橙皮苷收率為2.0%以上。
[0008]在新橙皮苷粗品用70%低碳醇溶液溶解時，還可以邊攪拌邊加活性炭脫色，趁熱抽濾，冷卻后在重結晶；
所述強酸性苯乙烯型陽離子柱優(yōu)選001X7陽離子柱；
所述大孔吸附樹脂優(yōu)選D101 ;
所述低碳醇優(yōu)選甲醇或者乙醇。
[0009]四、辛弗林的提取、分離、純化
取步驟一所述的濾液，用HC1調至pH值為1.0-2.0，先過D101大孔樹脂柱，水洗，收集流出液和水洗液，進行濃縮；然后添加硅藻土進行抽濾，將抽濾得到的濾液加入到強酸性苯乙烯型陽離子柱，進柱量為2BV，以流速2BV/h放出流出液；再用2BV去離子水洗樹脂柱，放出水洗液，往樹脂中加入1.5BV 1.5mol/L氨水洗脫，流速為lBV/h，收集氨水洗脫液，濃縮，用HC1調至pH值為2.0-3.0，再過D101大孔樹脂柱，用1.5mol/L氨水洗脫，取洗脫液濃縮后，在5-10°C放置，析晶，得粗晶體；將粗晶體用鹽酸溶解，再用1.5mol/L氨水調pH值，然后濃縮，再在5-10°C放置，重結晶，所得晶體即為辛弗林產(chǎn)品，該產(chǎn)品中辛弗林含量達90.0%以上，辛弗林收率達2.5%以上。
[0010]所述強酸性苯乙烯型陽離子柱優(yōu)選001X7陽離子柱；
所述大孔樹脂優(yōu)選D101 ;
所有結晶、重結晶都在5-10°C以下進行。
[0011]所述的滲漉、提取、過濾、吸附分離、洗脫、結晶、重結晶都為已知技術。
[0012]本發(fā)明具有下列優(yōu)點和特性:
1、綜合利用枳實小果資源
從枳實小果滲漉提取后的藥渣中提取橙皮苷，濾液中提取新橙皮苷、辛弗林，實現(xiàn)了橙皮苷、新橙皮苷、辛弗林同步綜合提取，枳實小果資源得到綜合利用。
[0013]2、組合技術新穎
通過本技術方案，將枳實小果滲漉提取后，從藥渣中提取橙皮苷，從濾液中提取新橙皮苷、辛弗林，得到橙皮苷含量達95%以上，收率為4.0%以上；得到新橙皮苷提取物含量可達98%以上，收率為2.0%以上，辛弗林提取物含量可達90%以上，收率可達2.5%以上。尤其是新橙皮苷提取和辛弗林的高效提取，是利用滲漉提取濾液，新橙皮苷先采用陽離子層析柱，再用D101大孔樹脂柱，然后采用20%低碳醇洗滌，再用70%低碳醇洗脫，取洗脫液濃縮，用(NH4) 2S04/NaCl助析，得粗晶；將粗晶再用70%低碳醇溶解，經(jīng)重結晶得到產(chǎn)品。辛弗林是將滲漉提取濾液先過D101大孔樹脂柱，然后過001X7陽離子柱，用氨水洗脫；用HC1調pH值，再過D101大孔樹脂柱，用氨水洗脫，洗脫液濃縮、結晶，重結晶，即得辛弗林產(chǎn)品。所有結晶、重結晶步驟都是在5-10°C進行。這些技術特征組合在一起，新橙皮苷和辛弗林提取物在含量和收率2個指標上產(chǎn)生了意想不到的效果。這些結果是技術組合方案種各技術特點互相支持、共同作用才實現(xiàn)的，已知技術沒有報道，也沒有該組合技術方案的技術啟示，不是簡單的疊加，具有突出的實質性特點和顯著的進步。
[0014]
【具體實施方式】
[0015]以下所述實例詳細地說明了本發(fā)明。
[0016]實施例1 苦橙枳實小果前處理
將苦橙第三次生理落果的枳實小果作為提取原料，干燥，用高速多功能粉碎機粉碎，取粉碎物過10目的篩，準確稱取粉碎物25.0g置于燒杯中，以料液比1:10g/mL加入250mL35%的乙醇水溶液，放入水浴鍋中40°C下浸泡水浴提取12h，過濾。以0.05%的比例往提取液中加入0.125g果膠酶處理，50°C下攪拌30min，然后將水浴鍋調至70 °C，處理15min，將果膠酶充分滅活。冷卻，然后用紗布初步過濾，用雙層濾紙抽濾，得到濾液和濾渣，濾渣用于提取橙皮苷，濾液用于提取新橙皮苷及辛弗林。
[0017]橙皮苷提取
取上述濾渣，按料液比1:30加水，在30°C下邊攪拌邊加入1.75g Ca(0H)2，此時pH為
10.6，攪拌提取lh后過濾；取濾液，加適量鹽酸，調體系pH為3.0，在5-10°C靜置12h ;析出晶體，抽濾，烘干得橙皮苷粗品。以料液比1:60g/mL加入甲醇，用NaOH溶液調體系pH為
11.0，30°C下反應30min，常壓過濾，再用稀鹽酸調濾液pH為5.0，在5_10°C以下靜置12h，重結晶，得橙皮苷晶體，橙皮苷的含量為95.70%，得率為4.16%ο
[0018]新橙皮苷提取
取前處理濾液過001X7強酸性苯乙烯型陽離子柱，收集離子柱流出液，然后用水洗。將離子柱流出液和水洗液混合，過D101大孔吸附樹脂柱，水洗，依次用20%乙醇和70%乙醇梯度洗脫。收