一種促進(jìn)紫杉醇分泌的紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)基的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種促進(jìn)紫杉醇分泌的紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)基。
【背景技術(shù)】
[0002]紅豆杉又稱紫杉，也稱赤柏松，是中國國家一級(jí)珍稀保護(hù)樹種，也是世界上公認(rèn)的瀕臨滅絕的天然珍稀抗癌植物。
[0003]紫杉醇及其類似物迄今為止僅存在于裸子植物紅豆杉科的紅豆杉屬和澳洲紅豆杉屬中，紅豆杉屬植物全世界共有11種，廣泛分布于歐亞大陸和北美的寒帶、溫帶及亞熱帶地區(qū)，但分布零散且生長緩慢。澳洲紅豆杉屬僅分布于南半球，數(shù)量稀少，紫杉醇在紅豆杉植物中含量普遍很低，即使當(dāng)前公認(rèn)含量最高的短葉紅豆杉樹皮中也不到0.1%，但其需求量很大。
[0004]為了解決紫杉醇供需之間的尖銳矛盾，多年來相關(guān)研究者在尋找及擴(kuò)大紫杉醇藥源途徑方面進(jìn)行了大量研究。紫杉醇的化學(xué)全合成雖已取得成功，但因路線長、收率低等原因目前無法實(shí)現(xiàn)工業(yè)化。近年來，利用紅豆杉細(xì)胞離體培養(yǎng)以制備紫杉醇得到了越來越多的關(guān)注，由于離體條件下細(xì)胞的培養(yǎng)方式可以得到更加多樣的控制，因此其生產(chǎn)效率相對(duì)較高。然而，以制備紫杉醇為目的的細(xì)胞培養(yǎng)并不容易，首先需要篩選生產(chǎn)性能強(qiáng)的細(xì)胞株，同時(shí)還要匹配適宜的培養(yǎng)條件，此外在營養(yǎng)供給等方面需要針對(duì)細(xì)胞株特點(diǎn)及代謝特性進(jìn)行設(shè)計(jì)，從而保證較高的培養(yǎng)密度和紫杉醇產(chǎn)率。現(xiàn)有技術(shù)的培養(yǎng)基在促進(jìn)紅豆杉細(xì)胞分泌紫杉醇方面仍不夠理想。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明旨在針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的技術(shù)缺陷，提供一種促進(jìn)紫杉醇分泌的紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)基，以解決現(xiàn)有技術(shù)中促進(jìn)紫杉醇分泌的紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)基對(duì)其分泌紫杉醇的促進(jìn)作用較低的技術(shù)問題。
[0006]為實(shí)現(xiàn)以上技術(shù)目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案:
[0007]—種促進(jìn)紫杉醇分泌的紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)基，包括以下重量份的成分:硝酸鈉8?
10份，磷酸氫二鉀4?6份，硫酸鎂2?3份，氯化鈣1?2份，蛋白胨1?2份，大發(fā)汗1?2份，巨勝子1?2份，寬筋藤1?2份，蘭香草1?2份，菊三七1?2份，水50?60份。
[0008]作為優(yōu)選，還包括1?2重量份的金不換。
[0009]作為優(yōu)選，還包括1?2重量份的金絲草。
[0010]作為優(yōu)選，還包括1?2重量份的藏紅花。
[0011]作為優(yōu)選，還包括1?2重量份的白茅花。
[0012]作為優(yōu)選，所述培養(yǎng)基由以下重量份的成分組成:硝酸鈉9份，磷酸氫二鉀5份，硫酸鎂2.5份，氯化鈣1.5份，蛋白胨1.5份，大發(fā)汗1.5份，巨勝子1.5份，寬筋藤1.5份，蘭香草1.5份，菊三七1.5份，水55份。
[0013]作為優(yōu)選，所述培養(yǎng)基由以下重量份的成分組成:硝酸鈉8.5份，磷酸氫二鉀5.5份，硫酸鎂2.1份，氯化鈣1.3份，蛋白胨1.7份，大發(fā)汗1.6份，巨勝子1.2份，寬筋藤1.1份，蘭香草1.4份，菊三七1.5份，金不換1.4份，金絲草1.1份，藏紅花1.5份，白茅花1.8份，水57份。
[0014]在以上技術(shù)方案中，所述培養(yǎng)基是將配方量的各成分混合后粉碎、再與水混合得到的，所述粉碎可以利用本技術(shù)領(lǐng)域公知的各類物料粉碎手段實(shí)現(xiàn)。本發(fā)明所述的培養(yǎng)基尤其適用于紅豆杉細(xì)胞的液體懸浮培養(yǎng)，當(dāng)然也可制備成為固體培養(yǎng)基用于種子培養(yǎng)或傳代培養(yǎng)。
[0015]本發(fā)明通過實(shí)驗(yàn)手段廣泛篩選了作為紅豆杉細(xì)胞生長的營養(yǎng)物質(zhì)，依據(jù)紅豆杉細(xì)胞自身代謝特性和實(shí)際使用效果確定了本發(fā)明配方。該配方以傳統(tǒng)自養(yǎng)培養(yǎng)基提供氮源和磷源，并添加了一定的鈣離子，在此基礎(chǔ)上意外的發(fā)現(xiàn)通過添加特定種類及成分的中藥材有助于促進(jìn)紫杉醇的產(chǎn)率。基于以上有益的發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明通過實(shí)驗(yàn)手段優(yōu)選了大發(fā)汗、巨勝子、寬筋藤、蘭香草等原本用于人類疾病治療的中藥材成分，所得培養(yǎng)基意外獲得了突出的培養(yǎng)效果，使得紅豆杉細(xì)胞的紫杉醇產(chǎn)率得到顯著提升，同時(shí)其生產(chǎn)周期更短。本發(fā)明以創(chuàng)新性的技術(shù)手段獲得優(yōu)越的技術(shù)效果，同時(shí)成本較低、易于實(shí)現(xiàn)，因此具有良好的應(yīng)用前景。
【具體實(shí)施方式】
[0016]以下將對(duì)本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】進(jìn)行詳細(xì)描述。為了避免過多不必要的細(xì)節(jié)，在以下實(shí)施例中對(duì)屬于公知的結(jié)構(gòu)或功能將不進(jìn)行詳細(xì)描述。除有定義外，以下實(shí)施例中所用的技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域技術(shù)人員普遍理解的相同含義。
[0017]實(shí)施例1
[0018]—種促進(jìn)紫杉醇分泌的紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)基，由以下重量份的成分組成:硝酸鈉8份，磷酸氫二鉀4份，硫酸鎂2份，氯化鈣1份，蛋白胨1份，大發(fā)汗1份，巨勝子1份，寬筋藤1份，蘭香草1份，菊二七1份，水50份。
[0019]實(shí)施例2
[0020]—種促進(jìn)紫杉醇分泌的紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)基，由以下重量份的成分組成:硝酸鈉10份，磷酸氫二鉀6份，硫酸鎂3份，氯化鈣2份，蛋白胨2份，大發(fā)汗2份，巨勝子2份，寬筋藤2份，蘭香草2份，菊二七2份，水60份。
[0021]實(shí)施例3
[0022]—種促進(jìn)紫杉醇分泌的紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)基，由以下重量份的成分組成:硝酸鈉9份，磷酸氫二鉀5份，硫酸鎂2.3份，氯化鈣1.8份，蛋白胨1.5份，大發(fā)汗1.6份，巨勝子1.7份，寬筋藤1.8份，蘭香草1.2份，菊三七1.8份，水55份。
[0023]實(shí)施例4
[0024]—種促進(jìn)紫杉醇分泌的紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)基，由以下重量份的成分組成:硝酸鈉
8.8份，磷酸氫二鉀5.4份，硫酸鎂2.7份，氯化鈣1.2份，蛋白胨1.2份，大發(fā)汗1.2份，巨勝子1.5份，寬筋藤1.6份，蘭香草1.4份，菊三七1.7份，金不換1份，白茅花1.1份，水52份。
[0025]實(shí)施例5
[0026]—種促進(jìn)紫杉醇分泌的紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)基，由以下重量份的成分組成:硝酸鈉
9.4份，磷酸氫二鉀4.2份，硫酸鎂2.1份，氯化鈣1.3份，蛋白胨1.1份，大發(fā)汗1份，巨勝子2份，寬筋藤1.9份，蘭香草1.2份，菊三七1.9份，金絲草1.3份，藏紅花1.2份，白茅花1.6份，水58份。
[0027]實(shí)施例6
[0028]—種促進(jìn)紫杉醇分泌的紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)基，由以下重量份的成分組成:硝酸鈉
8.8份，磷酸氫二鉀5.4份，硫酸鎂2.7份，氯化鈣1.2份，蛋白胨1.2份，大發(fā)汗1.2份，巨勝子1.5份，寬筋藤1.6份，蘭香草1.4份，菊三七1.7份，金不換1.5份，水55份。
[0029]實(shí)施例7
[0030]—種促進(jìn)紫杉醇分泌的紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)基，由以下重量份的成分組成:硝酸鈉
9.2份，磷酸氫二鉀5.7份，硫酸鎂2.4份，氯化鈣1.5份，蛋白胨1.5份，大發(fā)汗1.7份，巨勝子1.7份，寬筋藤1.2份，蘭香草1.9份，菊三七2份，藏紅花1.8份，水59份。
[0031]實(shí)施例8
[0032]—種促進(jìn)紫杉醇分泌的紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)基，由以下重量份的成分組成:硝酸鈉
8.5份，磷酸氫二鉀5.5份，硫酸鎂2.1份，氯化鈣1.3份，蛋白胨1.7份，大發(fā)汗1.6份，巨勝子1.2份，寬筋藤1.1份，蘭香草1.4份，菊三七1.5份，金不換1.4份，金絲草1.1份，藏紅花1.5份，白茅花1.8份，水57份。
[0033]以上對(duì)本發(fā)明的實(shí)施例進(jìn)行了詳細(xì)說明，但所述內(nèi)容僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，并不用以限制本發(fā)明。凡在本發(fā)明的申請(qǐng)范圍內(nèi)所做的任何修改、等同替換和改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種促進(jìn)紫杉醇分泌的紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于包括以下重量份的成分:硝酸鈉8?10份，磷酸氫二鉀4?6份，硫酸鎂2?3份，氯化鈣1?2份，蛋白胨1?2份，大發(fā)汗1?2份，巨勝子1?2份，寬筋藤1?2份，蘭香草1?2份，菊三七1?2份，水50?60份。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的促進(jìn)紫杉醇分泌的紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于還包括1?2重量份的金不換。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的促進(jìn)紫杉醇分泌的紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于還包括1?2重量份的金絲草。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的促進(jìn)紫杉醇分泌的紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于還包括1?2重量份的藏紅花。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的促進(jìn)紫杉醇分泌的紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于還包括1?2重量份的白茅花。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的促進(jìn)紫杉醇分泌的紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于所述培養(yǎng)基由以下重量份的成分組成:硝酸鈉9份，磷酸氫二鉀5份，硫酸鎂2.5份，氯化鈣1.5份，蛋白胨1.5份，大發(fā)汗1.5份，巨勝子1.5份，寬筋藤1.5份，蘭香草1.5份，菊三七1.5份，水55份。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的促進(jìn)紫杉醇分泌的紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于所述培養(yǎng)基由以下重量份的成分組成:硝酸鈉8.5份，磷酸氫二鉀5.5份，硫酸鎂2.1份，氯化鈣1.3份，蛋白胨1.7份，大發(fā)汗1.6份，巨勝子1.2份，寬筋藤1.1份，蘭香草1.4份，菊三七1.5份，金不換1.4份，金絲草1.1份，藏紅花1.5份，白茅花1.8份，水57份。
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種促進(jìn)紫杉醇分泌的紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基以傳統(tǒng)自養(yǎng)培養(yǎng)基提供氮源和磷源，并添加了一定的鈣離子，在此基礎(chǔ)上意外的發(fā)現(xiàn)通過添加特定種類及成分的中藥材有助于促進(jìn)紫杉醇的產(chǎn)率?；谝陨嫌幸娴陌l(fā)現(xiàn)，本發(fā)明通過實(shí)驗(yàn)手段優(yōu)選了大發(fā)汗、巨勝子、寬筋藤、蘭香草、菊三七、金不換、金絲草、藏紅花、白茅花等原本用于人類疾病治療的中藥材成分，所得培養(yǎng)基意外獲得了突出的培養(yǎng)效果，使得紅豆杉細(xì)胞的紫杉醇產(chǎn)率得到顯著提升，同時(shí)其生產(chǎn)周期更短。本發(fā)明以創(chuàng)新性的技術(shù)手段獲得優(yōu)越的技術(shù)效果，同時(shí)成本較低、易于實(shí)現(xiàn)，因此具有良好的應(yīng)用前景。
【IPC分類】C12P17/02, C12N5/04
【公開號(hào)】CN105400731
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510964059
【發(fā)明人】夏雪城, 夏新城
【申請(qǐng)人】天津市博愛生物藥業(yè)有限公司
【公開日】2016年3月16日
【申請(qǐng)日】2015年12月18日