通過甲酯保護(hù)的碳鏈延伸生產(chǎn)7碳化學(xué)物的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及使用一種或多種分離的酶例如甲基轉(zhuǎn)移酶、β-酮脂酰_[acp]合酶、 β -酮硫解酶、脫氫酶、還原酶、水合酶、硫酯酶、甲酯酶、CoA-轉(zhuǎn)移酶、可逆CoA-連接酶和轉(zhuǎn) 氨酶，或使用表達(dá)一種或多種這些酶的重組宿主細(xì)胞，從丙二酰-CoA或丙二酰-[acp]以及 可選的乙酰-CoA生物合成以下一種或多種物質(zhì)的方法：庚二酸、7-氨基庚酸、7-羥基庚酸、 庚二胺（heptamethylenediamine)和1，7-庚二醇（下文稱為"C7結(jié)構(gòu)單元"）。
[0002] 發(fā)明背景
[0003] 尼龍是聚酰胺，其有時通過二胺與二羧酸的縮聚合成。類似地，尼龍可通過 內(nèi)酰胺的縮聚生成。一種無處不在的尼龍是尼龍6,6,其通過六亞甲基二胺（HMD)和 己二酸的反應(yīng)生成。尼龍6通過己內(nèi)酰胺的開環(huán)聚合生成（Anton&Baird, Polyamides Fibers, Encyclopedia of Polymer Science and Technology, 2001)〇
[0004] 尼龍7和尼龍7, 7代表與尼龍6和尼龍6, 6相比具有增值特征的新型聚酰胺。尼 龍7是通過7-氨基庚酸聚合生成的，而尼龍7, 7是通過庚二酸和庚二胺的縮聚生成的。不 存在生成用于尼龍7和尼龍7, 7的單體的經(jīng)濟(jì)上可行的石油化學(xué)路徑。
[0005] 鑒于沒有經(jīng)濟(jì)上可行的石油化學(xué)單體給料；生物技術(shù)提供了一種經(jīng)由生物催化的 備選方法。生物催化是使用生物催化劑（諸如酶）來實(shí)施有機(jī)化合物的生物化學(xué)轉(zhuǎn)化。
[0006] 生物衍生給料和石油化學(xué)給料兩者是用于生物催化過程的可行起始材料。
[0007] 因而，針對此背景，清楚的是需要用于生成庚二酸、7-氨基庚酸、庚二胺、7-羥基 庚酸和1，7-庚二醇（h印tanediol)(下文為"C7結(jié)構(gòu)單元"）的方法，其中所述方法是基于 生物催化劑的。
[0008] 然而，無野生型原核生物或真核生物天然過度生成C7結(jié)構(gòu)單元或?qū)⑵渑懦鲋涟?外環(huán)境。不過，已經(jīng)報告了庚二酸的代謝。
[0009] 二羧酸庚二酸作為碳源經(jīng)由β-氧化被眾多細(xì)菌和真菌有效轉(zhuǎn)化成中心代謝 物。輔酶A(CoA)活化的庚二酸到CoA活化的3-氧代庚二酸的β -氧化經(jīng)由例如與芳香 族底物降解有關(guān)的途徑促進(jìn)進(jìn)一步代謝。已經(jīng)廣泛表征了 3-氧代庚二酰基-CoA被幾種 細(xì)菌分解代謝成乙?；?CoA和戊二?；?CoA(Harwood and Parales, Annual Review of Microbiology, 1996, 50:553 - 590)。
[0010] 最優(yōu)性原理陳述微生物調(diào)節(jié)其生物化學(xué)網(wǎng)絡(luò)以支持最大生物量生長。超出宿主 生物體中表達(dá)異源路徑的需要，將碳流量引向充當(dāng)碳源而非充當(dāng)生物量生長成分的C7結(jié) 構(gòu)單元與最優(yōu)性原理矛盾。例如，與天然生產(chǎn)者的產(chǎn)量性能相比，將1-丁醇途徑從梭菌 (Clostridium)物種轉(zhuǎn)移入其它生產(chǎn)菌株中經(jīng)常下降一個數(shù)量級（Shen等，Appl. Environ. Microbiol. , 2011, 77(9) :2905 - 2915) 〇
[0011] 在C7脂肪族主鏈上形成末端官能團(tuán)（諸如羧基、胺或羥基基團(tuán)）前，7碳脂肪族主 鏈前體的有效合成是合成C7結(jié)構(gòu)單元中的重要考慮因素。
[0012] 發(fā)明概述
[0013] 本申請至少部分地基于以下發(fā)現(xiàn)：可構(gòu)建用于生產(chǎn)七碳鏈?zhǔn)街逯麈溓绑w的生 物化學(xué)途徑，在所述七碳鏈?zhǔn)街逯麈溓绑w中可形成一個或兩個官能團(tuán)，例如羧基、胺或 者羥基，導(dǎo)致以下一種或者多種物質(zhì)的合成：庚二酸、7-氨基庚酸、7-羥基庚酸、庚二胺和 1，7-庚二醇（下文稱為"C7結(jié)構(gòu)單元"）。庚二酸和庚二酸鹽（酯），7-羥基庚酸和7-羥 基庚酸鹽（酯），7_氨基庚酸和7-氨基庚酸鹽（酯）本文中可替換使用，指代以其任意中 性或離子化形式的化合物，包括其任意的鹽形式。本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解具體的形式 將依賴于pH。本文描述的這些途徑、代謝工程和培養(yǎng)策略依賴于脂肪酸延伸和合成酶或同 源物，其接受甲酯保護(hù)的（shielded)二羧酸作為底物。
[0014] 面對最優(yōu)性原理，令人驚訝地發(fā)現(xiàn)，可將適當(dāng)?shù)姆翘烊煌緩?、給料、宿主微生物、對 宿主的生物化學(xué)網(wǎng)絡(luò)的弱化策略和培養(yǎng)策略組合起來，從而高效地生產(chǎn)一種或多種C7結(jié) 構(gòu)單元。
[0015] 在一些實(shí)施方案中，用于轉(zhuǎn)化為一種或多種C7結(jié)構(gòu)單元的C7脂族主鏈?zhǔn)歉?酰-[acp]或庚二酰-CoA (也稱為6-羧基己酰-CoA)，其可以通過兩個碳鏈延伸循環(huán)使用 NADH或NADPH依賴的酶，從丙二酰_[acp]或丙二酰-CoA以及可選的乙酰-CoA形成。見圖 1A、圖IB和圖1C。
[0016] 在一些實(shí)施方案中，末端羧基可使用庚二酰_[acp]甲酯甲基轉(zhuǎn)移酶、硫酯酶、醛 脫氫酶、7-氧代庚酸脫氫酶、6-氧代己酸脫氫酶、可逆CoA連接酶（例如可逆琥珀酰-CoA 連接酶）或CoA-轉(zhuǎn)移酶（例如戊烯二酸CoA-轉(zhuǎn)移酶）。見圖1A、圖1B、圖IC和圖2。
[0017] 在一些實(shí)施方案中，末端胺基可以使用ω-轉(zhuǎn)氨酶或者脫乙?；该复傩纬?。見 圖3和圖4。
[0018] 在一些實(shí)施方案中，末端羥基可以使用4-羥基丁酸脫氫酶、5-羥基戊酸脫氫酶或 6-羥基己酸脫氫酶或醇脫氫酶酶促形成。見圖5和圖6。
[0019] 在一個方面，本申請的特征在于生物合成選自下組的產(chǎn)物的方法：庚二酸、7-氨 基庚酸、7-羥基庚酸、庚二胺和1，7-庚二醇。所述方法包括從（i)乙酰-CoA和丙二酰-CoA 通過兩個甲酯保護(hù)的碳鏈延伸循環(huán)或（ii)丙二酰_[acp]通過兩個甲酯保護(hù)的碳鏈延伸酶 促合成七碳鏈脂族主鏈，以及在所述主鏈中酶促形成一個或兩個選自羧基、胺和羥基的末 端官能團(tuán)，從而形成所述產(chǎn)物。所述七碳鏈脂族主鏈可以是庚二酰_[acp]或庚二酰-CoA。 丙二酰-[acp]〇-甲基轉(zhuǎn)移酶可以將丙二酰-CoA轉(zhuǎn)化為丙二酰-CoA甲酯或可以將丙二 酰_[acp]轉(zhuǎn)化為丙二酰_[acp]甲酯。所述兩個碳鏈延伸循環(huán)的每一個可以包括使用（i) β-酮脂酰-[acp]合酶或β-酮硫解酶，（ii) 3-氧代?；鵢[acp]還原酶、乙酰乙酰-CoA 還原酶、3-羥酰-CoA脫氫酶，或3-羥基丁酰-CoA脫氫酶，（iii)烯酰-CoA水合酶或3-羥 酰-[acp]脫水酶，和（iv)稀酰_[acp]還原酶或反式-2-稀酰-CoA還原酶，來從丙二 酰-[acp]甲酯生產(chǎn)庚二酰-[acp]甲酯，或從丙二酰-CoA甲酯生產(chǎn)庚二酰-CoA甲酯。庚 二酰-[acp]甲酯甲酯酶可以從庚二酰-CoA甲酯或庚二酰_[acp]甲酯移除甲基。所述丙 二酰-[acp]〇-甲基轉(zhuǎn)移酶可以與列于SEQ ID NO: 16的氨基酸序列具有至少70%的序列 同一性。所述庚二酰-[acp]甲酯甲酯酶可以與列于SEQ ID NO: 17的氨基酸序列具有至少 70 %的序列同一性。
[0020] 所述兩個末端官能團(tuán)可以是相同的（例如胺或羥基），或者可以是不同的（例如一 個末端胺和一個末端羧基；或一個末端羥基和一個末端羧基）。
[0021] ω-轉(zhuǎn)氨酶或者脫乙?；缚梢悦复傩纬砂坊?。所述ω-轉(zhuǎn)氨酶可以與列于SEQ ID NO. 8-13中的任一氨基酸序列具有至少70%的序列同一性。
[0022] 6-羥基己酸脫氫酶、5-羥基戊酸脫氫酶、4-羥基丁酸脫氫酶、或醇脫氫酶可以酶 促形成羥基基團(tuán)。
[0023] 硫酯酶、醛脫氫酶、7-氧代庚酸脫氫酶、6-氧代己酸脫氫酶、CoA-轉(zhuǎn)移酶（例如戊 烯二酸CoA轉(zhuǎn)移酶）、或可逆CoA-連接酶（例如可逆琥珀酸-CoA連接酶）可以酶促形成末 端羧基基團(tuán)。所述硫酯酶可以與列于SEQ ID N0:1中的氨基酸序列具有至少70%的序列同 一性。
[0024] 羧酸還原酶和磷酸泛酰巰基乙胺基轉(zhuǎn)移酶能夠形成末端醛基，作為形成所述產(chǎn)物 的中間物。所述羧酸還原酶可以與列于SEQ ID NO. 2-7中的任一氨基酸序列具有至少70% 的序列同一"性。
[0025] 任意所述方法可以通過發(fā)酵在重組宿主中進(jìn)行。所述宿主可以經(jīng)受需氧、厭氧、微 氧或混合的氧/反硝化培養(yǎng)條件下的培養(yǎng)策略。所述宿主可以在營養(yǎng)限制的條件下培養(yǎng)。 所述宿主可以使用陶瓷中空纖維膜保留以維持發(fā)酵期間的高細(xì)胞密度。
[0026] 在任意所述方法中，所述宿主對高濃度C7結(jié)構(gòu)單元的耐受可以通過在選擇環(huán)境 中連續(xù)培養(yǎng)來改善。
[0027] 進(jìn)料至發(fā)酵的主要碳源可以衍生自生物或非生物給料。在一些實(shí)施方案中，所述 生物給料是以下物質(zhì)，包括以下物質(zhì)，或衍生自以下物質(zhì)：單糖、二糖、木質(zhì)纖維素、半纖維 素、纖維素、木質(zhì)素、乙酰丙酸和甲酸、甘油三酯、甘油、脂肪酸、農(nóng)業(yè)廢物、濃縮的酒糟可溶 物或城市廢物。
[0028] 在一些實(shí)施方案中，所述非生物給料是以下物質(zhì)，或衍生自以下物質(zhì)：天然氣、合 成氣、C0 2/H2、甲醇、乙醇、苯甲酸、來自環(huán)己烷氧化過程的非揮發(fā)性殘留物（NVR)或者堿洗 廢物流，或?qū)Ρ蕉姿?異酞酸混合物廢物流。
[0029] 本申請的特征還在于重組宿主，其包括至少一種外源性基因，所述外源性基因 編碼⑴丙二酰-[acp]〇-甲基轉(zhuǎn)移酶，（ii) β -酮脂酰_[acp]合酶或β -酮硫解酶， (iii) 3-氧代?；鵢[acp]還原酶、乙酰乙酰-CoA還原酶、3-輕酰-CoA脫氫酶，或3-羥基 丁酰-CoA脫氫酶，（iv)稀酰-CoA水合酶或3-輕酰_[acp]脫水酶，（V)稀酰_[acp]還原 酶或反式-2-烯酰-CoA還原酶，以及（vi)庚二酰_[acp]甲酯甲酯酶，所述宿主生產(chǎn)庚二 酰-[acp]或庚二酰-CoA。
[0030] 生產(chǎn)庚二酰_[acp]或庚二酰-CoA的重組宿主進(jìn)一步可以包括至少一種編碼以 下一種或多種物質(zhì)的外源性核酸：硫酯酶、醛脫氫酶、7-氧代庚酸脫氫酶、6-氧代己酸脫氫 酶、戊烯二酸CoA-轉(zhuǎn)移酶、可逆琥珀酰-CoA-連接酶、乙?；┟摎涿?、或羧酸還原酶，所述 宿主生產(chǎn)庚二酸或庚二酸半醛。
[0031] 生產(chǎn)庚二酸半醛的重組宿主進(jìn)一步可以包括至少一種編碼ω-轉(zhuǎn)氨酶的外源性 核酸，并生產(chǎn)7-氨基庚酸。
[0032] 生產(chǎn)庚二酸半醛的重組宿主進(jìn)一步可以包括至少一種編碼以下物質(zhì)的外源性核 酸：4_羥基丁酸脫氫酶、5-羥基戊酸脫氫酶或6-羥基己酸脫氫酶，所述宿主生產(chǎn)7-羥基庚 酸。
[0033] 生產(chǎn)庚二酸半醛、7-氨基庚酸，或7-羥基庚酸的重組宿主進(jìn)一步可以包括羧酸還 原酶、ω-轉(zhuǎn)氨酶、脫乙?；?、N-乙酰轉(zhuǎn)移酶、或醇脫氫酶，所述宿主生產(chǎn)庚二胺。
[0034] 生產(chǎn)7-羥基庚酸的重組宿主進(jìn)一步可以包括至少一種編碼羧酸還原酶或醇脫氫 酶的外源性核酸，所述宿主生產(chǎn)1，7-庚二醇。
[0035] 所述重組宿主可以是原核生物，例如來自埃希氏菌屬（Escherichia)如大 腸桿菌（Escherichia coli);來自梭菌屬（Clostridia)如楊氏梭菌（Clostridium ljungdahlii)、自產(chǎn)乙醇梭菌（Clostridium autoethanogenum)或者克魯佛梭 菌（Clostridium kluyveri);來自棒狀桿菌屬（Corynebacteria)如谷氨酸棒狀桿 菌（Corynebacterium glutamicum);來自貪銅菌屬（Cupriavidus)如鉤蟲貪銅菌 (Cupriavidus necator)或者耐金屬貪銅菌（Cupriavidus metalIidurans);來自假單 胞菌屬（Pseudomonas)如焚光假單胞菌（Pseudomonas fIuorescens)、惡臭假單胞菌 (Pseudomonas putida)或者食油假單胞菌（Pseudomonas oleavorans);來自代爾夫特菌 屬（Delftia)如食酸代爾夫特菌（Delftia acidovorans);來自芽孢桿菌屬（Bacillus) 如枯草芽胞桿菌（Bacillus subtillis);來自乳桿菌屬（Lactobacillus)如德氏乳桿 菌（Lactobacillus delbrueckii);或者來自乳球菌屬（Lactococcus)如乳酸乳球菌 (Lactococcus Iactis)或來自紅球菌屬（Rhodococcus)如馬紅球菌（Rhodococcus equi)。
[0036] 所述重組宿主可以是真核生物，例如，來自曲霉屬（Aspergi I lus)如黑曲 霉（Aspergillus niger);來自酵母屬（Saccharomyces)如釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae);來自畢赤氏酵屬（Pichia)如巴斯德畢赤酵母（Pichia pastoris);來自 耶羅維亞酵母屬（Yarrowia)如解脂耶羅維亞酵母（Yarrowia Iipolytica);來自伊薩 酵母屬（Issatchenkia)如東方伊薩酵母（Issathenkia orientalis);來自德巴利酵母 屬（Debaryomyces)如漢遜德巴利酵母（Debaryomyces hansenii);來自 Arxula 屬如 Arxula adenoinivorans;或者來自克魯維酵母菌屬（Kluyveromyces)如乳酸克魯維酵母 菌（Kluyveromyces Iactis)的真核生物。
[0037] 本文所述的任意重組宿主進(jìn)一步可以包括一種或多種以下弱化的酶：聚羥基鏈烷 酸酯合酶、乙酰-CoA硫酯酶、乙酰-CoA特異性β -酮硫解酶；形成乙酸的磷酸轉(zhuǎn)乙酰酶、 乙酸激酶、乳酸脫氫酶、甲基萘醌（menaquinol)-延胡索酸氧化還原酶、產(chǎn)生異丁醇的2-酮 酸脫羧酶、形成乙醇的醇脫氫酶、磷酸丙糖異構(gòu)酶、丙酮酸脫羧酶、葡萄糖-6-磷酸異構(gòu)酶、 消散NADH或NADPH不平衡的轉(zhuǎn)氫酶、消散NADH或NADPH不平衡的谷氨酸脫氫酶、NADH/ NADPH利用型谷氨酸脫氫酶、庚二酰-CoA脫氫酶；接受C7結(jié)構(gòu)單元和中心前體作為底物的 ?；?CoA脫氫酶；戊二酰-CoA脫氫酶；或庚二酰-CoA合成酶。
[0038] 本文所述的任意重組宿主進(jìn)一步可以過表達(dá)編碼以下酶的一種或多種基因：乙 酰-CoA合成酶、6-磷酸葡萄糖酸脫氫酶；轉(zhuǎn)酮醇酶；吡啶核苷酸轉(zhuǎn)氫酶；甲酸脫氫酶；甘油 醛-3P-脫氫酶；蘋果酸酶；葡萄糖-6-磷酸脫氫酶；果糖1，6二磷酸酶；L-丙氨酸脫氫酶； 用于產(chǎn)生輔助因子不平衡的NADH或NADPH特異性L-谷氨酸脫氫酶；甲醇脫氫酶、甲醛脫氫 酶、二胺轉(zhuǎn)運(yùn)體、二羧酸轉(zhuǎn)運(yùn)體；S-腺苷甲硫氨酸合成酶，和/或多藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體。
[0039] 本文所述途徑的反應(yīng)可以在一種或多種細(xì)胞（例如宿主細(xì)胞）株中進(jìn)行，所述細(xì) 胞株（a)天然表達(dá)一種或多種相關(guān)酶，（b)經(jīng)遺傳工程化而表達(dá)一種或多種相關(guān)酶，或（c) 天然表達(dá)一種或多種相關(guān)酶并經(jīng)遺傳工程化而表達(dá)一種或多種相關(guān)酶?；蛘?，可以從以上 任意類型的宿主細(xì)胞中提取相關(guān)酶，并以純化或半純化形式使用。提取的酶可選地固定在 固體基質(zhì)上，例如適合的反應(yīng)容器的底和/或壁。此外，這些提取物包括可以作為相關(guān)酶來 源使用的裂解物（如細(xì)胞裂解物）。在本申請?zhí)峁┑姆椒ㄖ?，所有步驟可以在細(xì)胞（例如宿 主細(xì)胞）中進(jìn)行，所有步驟可以使用提取的酶進(jìn)行，或一些步驟可以在細(xì)胞中進(jìn)行，而其它 步驟可以使用提取的酶進(jìn)行。
[0040] 本文所述的多種酶催化可逆反應(yīng)，并且感興趣的反應(yīng)可以是所述反應(yīng)的逆反應(yīng)。 圖1-6所示的示意性途徑闡明了對于每種中間物感興趣的反應(yīng)。
[0041] 在一些實(shí)施方案中，弱化或增強(qiáng)所述宿主微生物的內(nèi)源性生物化學(xué)網(wǎng)絡(luò)，來（1) 保證2-氧代戊二酸和2-氧代己二酸的細(xì)胞內(nèi)可用度，（2)創(chuàng)造 NAD+不平衡，其僅可通過 C7結(jié)構(gòu)單元的形成來平衡，（3)阻止通向并包括C7結(jié)構(gòu)單元的中心代謝物、中心前體的降 解和（4)保證從細(xì)胞的高效流出。
[0042] 除非另外定義，本申請使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語的定義與本發(fā)明所屬領(lǐng)域的普 通技術(shù)人員所通常理解的含義相同。雖然與本申請所述的方法和材料相似或者等同的方法 和材料也可用于實(shí)踐本發(fā)明，但在下文描述適合的方法和材料。本文提及的所有公開、專利 申請、專利和其它參考文獻(xiàn)通過提述完整并入本文。在沖突的情況下，以本說明書包括定義 為準(zhǔn)。另外，材料、方法和實(shí)施例僅為示例性的而不意圖限制。
[0043] 本發(fā)明的一個或多個實(shí)施方案的細(xì)節(jié)列于下面的附圖和描述中。根據(jù)說明書和附 圖，并根據(jù)權(quán)利要求，本發(fā)明的其它特征、目的和優(yōu)點(diǎn)將顯而易見。根據(jù)專利法的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)踐， 詞語"包含"在權(quán)利要求中可被"基本上由…組成"或者"由…組成"替代。
[0044] 附圖簡述
[0045] 圖IA是使用NADPH依賴的酶以及丙二酰_[acp]作為中心代謝物通向庚二 酰_[acp]的示例性生物化學(xué)途徑的示意圖。
[0046] 圖IB是使用NADPH依賴的酶以及乙酰-CoA和丙二酰-CoA作為中心代謝物通向 庚二酰-CoA的示例性生物化學(xué)途徑的示意圖。
[0047] 圖IC是使用NADH依賴的酶以及乙酰-CoA和丙二酰-CoA作為中心代謝物通向庚 二酰-CoA的示例性生物化學(xué)途徑的示意圖。
[0048] 圖2是使用庚二酰-[acp]、庚二酰-CoA或庚二酸半醛作為中心前體通向庚二酸的 示例性生物化學(xué)途徑的示意圖。
[0049] 圖3是使用庚二酰-CoA、庚二酸或庚二酸半醛作為中心前體通向7-氨基庚酸的示 例性生物化學(xué)途徑的示意圖。
[0050] 圖4是使用7-氨基庚酸、7-羥基庚酸或庚二酸半醛作為中心前體通向庚二胺的示 例性生物化學(xué)途徑的示意圖。
[0051] 圖5是使用庚二酸、庚二酰-CoA或庚二酸半醛作為中心前體通向7-羥基庚酸的 示例性生物化學(xué)途徑的示意圖。
[0052] 圖6是使用7-羥基庚酸作為中心前體通向1，7-庚二醇的示例性生物化學(xué)途徑的 示意圖。
[0053] 圖7含有由tesB編碼的大腸桿菌硫酯酶（參見GenBank登錄號AAA24665. 1， SEQ ID NO: 1)、海分枝桿菌（Mycobacterium marinum)駿酸還原酶（參見GenBank登錄號 ACC40567. 1，SEQ ID N0:2)、恥垢分枝桿菌（Mycobacterium smegmatis)駿酸還原酶（參 見 GenBank 登錄號 ABK71854. 1，SEQ ID NO: 3)、Segniliparus rugosus 駿酸還原酶（參見 GenBank登錄號EFV11917. 1，SEQ ID N0:4)、恥垢分枝桿菌羧酸還原酶（參見GenBank登錄 號 ABK75684.1，SEQ ID N0:5)、馬賽分枝桿菌（Mycobacterium massiliense)駿酸還原酶 (參見GenBank登錄號EIV11143.1，SEQ ID N0:6)、Segniliparus rotundus駿酸還原酶（參 見GenBank登錄號ADG98140.1，SEQ ID N0:7)、紫色色桿菌（Chromobacterium violaceum) ω_轉(zhuǎn)氨酶（參見GenBank登錄號AAQ59697.1，SEQ ID N0:8)、銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa) ω-轉(zhuǎn)氨酶（參見 GenBank 登錄號 AAG08191. 1，SEQ ID N0:9)、丁香假單胞菌 (Pseudomonas syringae)c〇-轉(zhuǎn)氨酶（參見GenBank登錄號AAY39893.1，SEQ ID N0:10)、球 形紅桿菌（Rhodobacter sphaeroides) ω-轉(zhuǎn)氨酶（參見 GenBank 登錄號 ABA81135. 1，SEQ ID NO: 11)、大腸桿菌ω-轉(zhuǎn)氨酶（參見GenBank登錄號AAA57874.1，SEQ ID NO: 12)、河流 弧菌（Vibrio Fluvialis) ω-轉(zhuǎn)氨酶（參見 GenBank 登錄號 AEA39183. 1，SEQ ID NO: 13)、 枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis)磷酸泛酰疏基乙胺基轉(zhuǎn)移酶（參見GenBank登錄號 CAA44858.1，SEQ ID NO: 14)、諾卡氏菌物種（Nocardia sp.)NRRL 5646 憐酸泛醜疏基乙胺 基轉(zhuǎn)移酶（參見GenBank登錄號ABI83656.1，SEQ ID NO: 15)、蠟樣芽孢桿菌（Bacillus cereus)丙二酰-CoA甲基轉(zhuǎn)移酶（參見GenBank登錄號AAS43086. 1，SEQ ID NO: 16)或大 腸桿菌庚二酰_[acp]甲酯酯酶（參見GenBank登錄號