一種治療神經(jīng)膠質(zhì)瘤的克羅烷型二萜化合物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物領(lǐng)域，具體涉及從小豆蔻的干燥近成熟果實(shí)中分離得到的一種新 的克羅烷型二萜類化合物及其制備方法和醫(yī)藥用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 植物小豆蔻為多年生草本。根莖粗壯，棕紅色。葉兩列，葉片狹長披針狀，葉鞘具棕 黃色柔毛。穗狀花序由莖基部抽出?；ㄐ蝻@著伸長，花排列稀疏，花冠白色。果實(shí)長卵圓形， 果皮質(zhì)韌，不易開裂。種子團(tuán)分3瓣，每瓣種子5~9枚，種子氣味芳香而峻烈。主產(chǎn)越南、斯里 蘭卡和印度南部的馬拉巴(Malabar)海岸。實(shí)成熟時收采，除去殘留的果柄，曬干。使用部分 為姜科植物小豆蔻的干燥果實(shí)。
[0003] 藥材小豆蔻為姜科植物小豆蔻Elettariacardamomum(L.)Maton的干燥近成熟果 實(shí)，是藏醫(yī)與維吾爾醫(yī)用藥，以"加素"之名始載于《四部醫(yī)典》，現(xiàn)被多國藥典收載。小豆蔻 是世界著名的植物藥與香料，被稱為"香料之后"，原產(chǎn)于印度南部、斯里蘭卡及瓜地馬拉等 地，在印度傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中使用歷史超過兩千年，具有祛風(fēng)、健胃的功效。目前中醫(yī)很少使用，小 豆蔻曾以"豆蔻"之名收載于1953年版中國藥典。
[0004] 小豆蔻已報(bào)道的成分主要為揮發(fā)油，以及多糖與蛋白質(zhì)，推測還含有黃酮類化合 物，但目前尚未見黃酮類成分單體的分離與鑒定。揮發(fā)油是小豆蔻中重要的活性成分，含量 高達(dá)7%，超聲提取得到的揮發(fā)油以α-乙酸松油脂、桉油精、芳樟醇、α-松油醇、乙酸芳樟酯 為主，與超臨界C02提取所得成分類似;如以正己烷提取，揮發(fā)油組分有所不同，為檸檬烯、 桉油精、萜品油烯、月桂烯。此外，還含有麝香草醇、橙花基醋酸酯、蒎烯、橙花叔醇、香檜烯 等。
[0005] 小豆蔻藥理活性多樣，尤以抗腫瘤活性報(bào)道最多，涉及皮膚、肺、結(jié)腸等多個部位 的腫瘤，對胃腸道也有較好的保護(hù)作用，此外，還具有抗菌、抗氧化、抗炎、鎮(zhèn)痛等作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的在于提供一種從小豆蔻的干燥近成熟果實(shí)中分離得到的一種新的 克羅烷型二萜類化合物；
[0007] 本發(fā)明的另一目的在于提供該新化合物的制備方法；
[0008] 本發(fā)明的再一目的在于提供該化合物用于制備治療神經(jīng)膠質(zhì)瘤藥物的醫(yī)藥用途。
[0009] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的：
[0010] 具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物(I)，
[0012] 所述的化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將小豆蔻的干燥近成熟果 實(shí)粉碎，用70~80%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯 和水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步 驟(a)中乙酸乙酯萃取物用大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫10個柱體積，再用75%乙醇洗 脫12個柱體積，收集75%乙醇洗脫液，減壓濃縮得75%乙醇洗脫物浸膏；（c)步驟(b)中75% 乙醇洗脫浸膏用正相硅膠分離，依次用體積比為80:1、40:1、20:1、10:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到5個組分；（d)步驟(c)中組分3用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為 25:1、20:1和10:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基 硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為70 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集9~13個柱 體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物(I)。
[0013] 進(jìn)一步地，所述大孔樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。
[0014] 進(jìn)一步地，所述用乙醇熱回流提取采用的乙醇濃度為75%。
[0015] -種藥物組合物，其中含有治療有效量的所述的化合物（I)和藥學(xué)上可接受的載 體。
[0016] 所述的化合物(I)在制備治療神經(jīng)膠質(zhì)瘤的藥物中的應(yīng)用。
[0017]所述的藥物組合物在制備治療神經(jīng)膠質(zhì)瘤的藥物中的應(yīng)用。
[0018] 本發(fā)明化合物用作藥物時，可以直接使用，或者以藥物組合物的形式使用。
[0019]該藥物組合物含有治療有效量的本發(fā)明化合物（I)，其余為藥物學(xué)上可接受的、對 人和動物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
[0020] 所述的可藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料 以及藥物制品輔劑。將本發(fā)明的藥物組合物以單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明藥物可 通過口服或注射的形式施用于需要治療的患者。用于口服時，可將其制成片劑、緩釋片、控 釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等;用于注射時，可制成滅菌的 水性或油性溶液、無菌粉針、脂質(zhì)體或乳劑等。
【附圖說明】
[0021]圖1為化合物(I)結(jié)構(gòu)式；
[0022]圖2為化合物（I)理論E⑶值與實(shí)驗(yàn)E⑶值比較；
[0023]圖3為化合物（I)處理后U251細(xì)胞洞凋亡率的變化。
【具體實(shí)施方式】
[0024]下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護(hù)范 圍。盡管參照較佳實(shí)施例對本發(fā)明作了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對 本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和范圍。
[0025]實(shí)施例1:化合物(I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0026] 藥材和試劑來源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購自上海 凌峰化學(xué)試劑有限公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學(xué)試劑有限公司。
[0027]制備方法：（a)將小豆蔻的干燥近成熟果實(shí)（8kg)粉碎，用75%乙醇熱回流提取 (25LX3次），合并提取液，濃縮至無醇味(6L)，依次用石油醚(6LX3次）、乙酸乙酯（6LX3 次）和水飽和的正丁醇（6LX3次）萃取，濃縮，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物 (315g)和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中乙酸乙酯萃取物用純凈水溶解至2L，醫(yī)用脫脂棉過 濾，濾液用AB-8型大孔樹脂（1.5kg)分離，依次用10%乙醇（10L)和75% (12L)乙醇洗脫，收 集75%乙醇洗脫液，減壓濃縮得75%乙醇洗脫物浸膏（155g);(c)步驟(b)中75%乙醇洗脫 浸膏用200-300目正相硅膠分離，依次用體積比為80:1 (10個柱體積）、40 :1 (8個柱體積）、 20:1(8個柱體積）、10:1(8個柱體積)和1:1(5個柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到5個 組分；（d)步驟(c)中組分3(36g)用200-300目正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為25:1(8 個柱體積）、20:1(8個柱體積)和10:1(5個柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分； (e)步驟(d)中組分2(12g)用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠0DS-C18分離，用體積百分濃度 為70 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集9~13個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合 物（I)(25mg)。
[0028] 結(jié)構(gòu)確證:無色晶體（甲醇）；冊43頂3顯示[1+他]+為111/2 413.1200，結(jié)合核磁特 征可得分子式為C2〇H22〇8，不飽和度為10。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)δΗ(ρρηι，DMS0_d6，600MHz):H-1 (3.41，m)，H-l(3.11，m)，H-3(7.09，s)，H-6(4.61，dd，J=10.2,6.6)，H-7(1.93，dd，J= 13.8,6.6)，H-7(2.08，dd，J=13.8，10.2)，H-9(2.49，dd，J= 9.0,7.2)，H-ll(2.55，dt，J= 13.0,7.2)，H-ll(2.18，ddd，J=13.0,9.0,6.0)，H-12(5.33，dd，J= 7.2,6.0)，H-14(6.27， br，s)，H-15(7.34，br，s)，H-16(7.32，br，s)，H-17(1.42，s)，H-19(1.26，s)，H-20(5.78，m); 核磁共振碳譜數(shù)據(jù)3。(口口111，0150-(16，150