后，調(diào)節(jié)PH到8-8.2,較高的PH下，在擴(kuò)繁發(fā)酵前期能較好的抑制乳酸菌的生長，其中地衣 芽孢桿菌制劑中含有的納他霉素與硫酸粘桿菌素能夠較好的抑制水中與通入的空氣中所 含的酵母菌，病原真菌與大腸桿菌，沙門氏菌等有害菌的生長，而其中的芽孢萌發(fā)劑:肌苷， 果糖，絲氨酸等快速促進(jìn)芽孢萌發(fā)，縮短芽孢萌發(fā)時(shí)間，而芽孢桿菌制劑中的玉米粉，玉米 漿，紅糖，都是適合促進(jìn)芽孢桿菌發(fā)酵繁殖的營養(yǎng)劑，一旦芽孢萌發(fā)則會(huì)快速促進(jìn)芽孢桿菌 的繁殖與倍增。從而快速增加地衣芽孢桿菌的菌體含量，從而快速使芽孢桿菌繁殖而占據(jù) 優(yōu)勢(shì)菌種，而更好的抑制其他的雜菌與有害菌。在有納他霉素，硫酸粘桿菌素這兩種抑菌劑 的存在下，再配上地衣芽孢萌發(fā)劑，這三類物質(zhì)的有機(jī)的結(jié)合起來，則可以在水產(chǎn)養(yǎng)殖場現(xiàn) 場進(jìn)行發(fā)酵，無需對(duì)水，發(fā)酵設(shè)備，空氣進(jìn)行滅菌，即可培養(yǎng)出雜菌少，地衣芽孢桿菌含量高 的發(fā)酵液。
【具體實(shí)施方式】 [0017] 實(shí)施例1 下面通過試驗(yàn)說明本發(fā)明現(xiàn)場發(fā)酵的芽孢藥肥與傳統(tǒng)的芽孢"活化"的優(yōu)越性 試驗(yàn)組:將硫酸粘桿菌素20份，納他霉素1份，肌苷30份，玉米粉100份，玉米漿粉100份， 氯化鈉50份，絲氨酸30份，果糖20份，紅糖50份，放置密封攪拌罐中攪拌20-30分鐘，混合均 勻，再將地衣芽孢桿菌菌粉100份加入攪拌罐中攪拌均勻后，取lkg做試驗(yàn)，將所取的lkg的 地衣芽孢桿菌制劑與水的比例按1:20的比例攪拌均勻，調(diào)PH至8,前12小時(shí)每分鐘通氣量液 氣比為1:0.5, 12小時(shí)后通氣量為1:0.8,培養(yǎng)24小時(shí)后即為試驗(yàn)組現(xiàn)場發(fā)酵的芽孢桿菌藥 肥的發(fā)酵液； 對(duì)照組:將玉米粉100份，玉米漿粉100份，氯化鈉50份，紅糖50份，放置密封攪拌罐中攪 拌20-30分鐘，混合均勻，再將地衣芽孢桿菌菌粉100份加入攪拌罐中攪拌均勻后，取樣 0.8kg與水16kg進(jìn)行試驗(yàn)，調(diào)PH至8，前12小時(shí)每分鐘通氣量液氣比為1:0.5，12小時(shí)后通氣 量為1:0.8,培養(yǎng)24小時(shí)后即為對(duì)照組現(xiàn)場發(fā)酵的芽孢桿菌藥肥的發(fā)酵液。與試驗(yàn)組的芽孢 桿菌含量相同，營養(yǎng)成份基本相同； 在相同的培養(yǎng)條件下，檢測其24小時(shí)培養(yǎng)過程中發(fā)酵液的PH，芽孢，活菌總數(shù)，雜菌數(shù) 的變化情況如附圖1，附圖2，附圖3所示； 從附圖1中可以看出試驗(yàn)組的pH變化較慢，pH-直維持在7以上，而對(duì)照組的pH在8小時(shí) 后就快速降低至5以下，到24小時(shí)后，pH降低至4以下，這時(shí)已經(jīng)較適合酵母菌，乳酸菌的生 長，較低的pH能抑制芽孢的萌發(fā)及生長。從附圖2中可以明顯看出，試驗(yàn)組的芽孢在4小時(shí) 后，其芽孢萌發(fā)率已經(jīng)達(dá)到了 85%以上，而對(duì)照組的芽孢發(fā)酵24小時(shí)以后其芽孢萌發(fā)率才到 50%左右； 從附圖3中明顯可以看到試驗(yàn)組的發(fā)酵24小時(shí)后，其總菌數(shù)約達(dá)到18.8億CFU/ml，雜菌 數(shù)檢測后基本上低于0.1億CFU/ml，而對(duì)照組的總菌含量約為12.4億CFU/ml，但雜菌含量則 達(dá)到了 3.8億CFU/ml。因此說明試驗(yàn)組加入防腐劑:硫酸粘桿菌素，納他霉素，與芽孢萌發(fā)劑 絲氨酸，肌苷，果糖等就可以明顯的抑制雜菌生長，促進(jìn)行地衣芽孢桿菌的快速繁殖，其作 用效果是非常顯著的。
[0018] 其中，附圖1是試驗(yàn)組與對(duì)照現(xiàn)場擴(kuò)培中pH的變化曲線。圖1地衣芽孢桿菌制劑現(xiàn) 場發(fā)酵中pH變化曲線。
[0019] 其中，附圖2是試驗(yàn)組與對(duì)照組殘余芽孢的變化曲線。圖2地衣芽孢桿菌制劑現(xiàn)場 發(fā)酵中殘余芽孢變化曲線。
[0020] 其中，附圖3是試驗(yàn)組與對(duì)照組活菌總數(shù)與雜菌數(shù)的變化曲線。圖3地衣芽孢桿菌 制劑現(xiàn)場發(fā)酵中總菌數(shù)與雜菌數(shù)變化曲線。
[0021 ] 實(shí)施例2 利用實(shí)施例1試驗(yàn)組生產(chǎn)的地衣芽孢桿菌制劑生產(chǎn)的發(fā)酵液在對(duì)蝦池內(nèi)試驗(yàn)的效果 1、 試驗(yàn)地點(diǎn)：湛江市雷州市紀(jì)家鎮(zhèn);養(yǎng)殖品種:南美白對(duì)蝦;面積:十畝；養(yǎng)殖類型:土 塘混養(yǎng)；放養(yǎng)天數(shù):65天； 2、 問題描述:蝦吃料慢，偷死嚴(yán)重，打樣蝦空腸空胃占到75%以上，PH8.0，溶氧4.6mg/L， 氨氮1 .Omg/L,亞硝酸鹽0.4mg/L; 3、 問題分析:水老化，水太肥，氨氮，亞硝酸鹽超標(biāo)，解剖蝦腸道損害嚴(yán)重，肝胰臟消化 有問題，影響對(duì)蝦的生存，易引起應(yīng)激； 4、 解決方法:全池潑灑現(xiàn)場發(fā)酵的地衣芽孢桿菌制劑的發(fā)酵液2L/畝；同時(shí)飼料中拌現(xiàn) 場發(fā)酵的地衣芽孢桿菌制劑的發(fā)酵液2L/100kg飼料； 5、 結(jié)果:通過潑灑與拌料現(xiàn)場發(fā)酵的地衣芽孢桿菌制劑的發(fā)酵液，24小時(shí)后，偷死明 顯減少，7K質(zhì)指標(biāo)為:PH8 · 0，溶氧4 · lmg/L，氨氮0 · 6mg/L，亞硝酸鹽0 · lmg/L; 48小時(shí)后，奸 體色變好，空腸空胃明顯改善，水質(zhì)指標(biāo)為:PH8.0，溶氧4.5mg/L，氨氮0.3mg/L，亞硝酸鹽 O.lmg/L;第三天后，水質(zhì)正常，蝦體色恢復(fù)，無偷死，水色呈黃綠色，空腸空胃降至12%; 6、 分析：當(dāng)前高密度水產(chǎn)養(yǎng)殖的水體中含有大量的魚蝦類糞便和殘餌，以及漁藥殘留 物，大大超過了本身池塘的凈化能力，導(dǎo)致蝦池中的有機(jī)質(zhì)，氨氮，亞硝酸鹽積累，全池潑灑 現(xiàn)場發(fā)酵的地衣芽孢桿菌制劑的發(fā)酵液，發(fā)酵液中含有大量的地衣芽孢桿菌營養(yǎng)體菌體， 其一進(jìn)入池塘后快速繁殖，快速降解了氨氮，亞硝酸鹽與有機(jī)質(zhì)的含量，改善水質(zhì)。同時(shí)通 過拌服發(fā)酵液，發(fā)酵液中含有通過現(xiàn)場發(fā)酵而產(chǎn)生的大量的桿菌素，抑制了對(duì)蝦腸道，肝胰 臟中的有害菌如弧菌，而且能夠快速的降解飼料中的高分子蛋白，減輕了蝦腸道負(fù)擔(dān)，對(duì)其 進(jìn)行修復(fù)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 用于水產(chǎn)養(yǎng)殖場現(xiàn)場發(fā)酵的地衣芽孢桿菌制劑，其特征在于，制備該地衣芽孢桿菌 制劑的原料為:地衣芽孢桿菌菌粉50-200份，硫酸粘桿菌素5-50份，納他霉素1-6份，肌苷 20-100份，玉米粉50-200份，玉米漿粉50-200份，氯化鈉50-200份，絲氨酸20-100份，果糖 20-50份，紅糖 50-200份。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于水產(chǎn)養(yǎng)殖場現(xiàn)場發(fā)酵的地衣芽孢桿菌制劑，其特征在于， 該地衣芽孢桿菌制劑的制備方法包括以下步驟： ③、地衣芽孢桿菌菌粉的制備 取出地衣芽孢桿菌菌種保藏管，用LB固體培養(yǎng)基劃平板進(jìn)行復(fù)蘇，30°C培養(yǎng)48小時(shí)； 在平板下挑取單個(gè)菌落接種50毫升LB培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)箱中30°C震蕩培養(yǎng)24小時(shí)； 種子采用5%的接種量，接種至5L大三角瓶中，裝液量為2L的LB培養(yǎng)基，37°C震蕩培養(yǎng) 20-28小時(shí)，檢測其菌液濃度，活菌含量超過20億CFU/ mL，即可作為地衣芽孢桿菌液體菌 種，接種至1〇〇(^發(fā)酵培養(yǎng)基，接種量為5%，開攪拌12(^/1^11，每分鐘通氣量為液/氣1 :0.8， 37°C培養(yǎng)16-24小時(shí)，待芽孢含量不低于60億CFU/ mL，即可結(jié)束發(fā)酵，板框過濾除水，剩下 菌體加輕質(zhì)碳酸鈣，調(diào)節(jié)菌濃度為100億CFU/g，粉碎過100目篩，即得到地衣芽孢桿菌菌粉； 其中所述LB培養(yǎng)基:蛋白胨5g，牛肉膏3g，氯化鈉5g，水1000mL，pH7.2，固體培養(yǎng)基中加入瓊 脂2%; 其中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基：葡萄糖l〇g/L，玉米粉20 g/L，玉米漿粉10 g/L，豆柏粉20 g/ L，硫酸鎂0.5 g/L，硫酸錳0.5 g/L，磷酸二氫鈉0.5 g/L，磷酸氫二鈉2.3 g/L，pH7.2; 各培養(yǎng)基滅菌的條件為:. 10-0.15MPa，121°C滅菌30分鐘； ③、混合，包裝 將硫酸粘桿菌素5-50份，納他霉素1-6份，肌苷20-100份，可溶性淀粉50-200份，干玉米 漿50-200份，氯化鈉50-200份，絲氨酸20-100份，果糖20-50份，紅糖50-200份，放置密封攪 拌罐中攪拌20-30分鐘，混合均勻，再將步驟Φ制備的地衣芽孢桿菌菌粉50-200份加入攪拌 罐中攪拌均勻后，分裝500克/包，真空包裝，即得到用于水產(chǎn)養(yǎng)殖場現(xiàn)場發(fā)酵的地衣芽孢桿 菌制劑。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于水產(chǎn)養(yǎng)殖場現(xiàn)場發(fā)酵的地衣芽孢桿菌制劑，其特征在于， 該地衣芽孢桿菌制劑用于水產(chǎn)養(yǎng)殖場現(xiàn)場發(fā)酵的應(yīng)用包括以下步驟:一、將權(quán)利要求2所制 備的地衣芽孢桿菌制劑與水的比例按1:10至1:30的比例攪拌均勻，調(diào)PH至8-8.2，前12小時(shí) 每分鐘通空氣量，液氣比為1:0.5，12小時(shí)后通氣量為1:0.8，培養(yǎng)24小時(shí)后即為現(xiàn)場發(fā)酵 的地衣芽孢桿菌的發(fā)酵液； 二，用于養(yǎng)殖池塘調(diào)水，將步驟一所制備的地衣芽孢桿菌發(fā)酵酵液以1:50至1:100的比 例稀釋，全塘潑灑，其發(fā)酵液的用量為1-2L/畝； 三，用于調(diào)節(jié)養(yǎng)殖水產(chǎn)動(dòng)物腸道，將步驟一制備的地衣芽孢桿菌發(fā)酵液以飼料的1%-2% 的量與飼料拌勻飼喂； 其中，步驟一所述的水是井水，干凈河水，放置一天以后的自來水等的一種； 其中，步驟一所述的空氣是未經(jīng)過濾或滅菌的。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種用于水產(chǎn)養(yǎng)殖場現(xiàn)場發(fā)酵的地衣芽孢桿菌制劑及其應(yīng)用，制備該地衣芽孢桿菌制劑的原料為：地主芽孢桿菌菌粉，硫酸粘桿菌素，納他霉素，肌苷，玉米粉，玉米漿粉，氯化鈉，絲氨酸，果糖，紅糖。利用地衣芽孢桿菌制劑中的納他霉素與硫酸粘桿菌素抑制發(fā)酵過程中的病原真菌，酵母菌等真菌，與大腸桿菌，沙門氏菌等革蘭氏陰性菌的生長，利用肌苷，果糖，絲氨酸等芽孢萌發(fā)劑快速促進(jìn)地衣芽孢的萌發(fā)，提高芽孢萌發(fā)率；從而實(shí)現(xiàn)可以在簡陋的水產(chǎn)養(yǎng)殖場進(jìn)行發(fā)酵擴(kuò)繁操作，設(shè)施需求簡單，用菌量少，成本低，現(xiàn)場發(fā)酵的發(fā)酵液菌含量高，活性好，具有調(diào)節(jié)水質(zhì)，改善腸道，防病促生，增產(chǎn)提質(zhì)的效果。
【IPC分類】C12R1/10, C12N1/20
【公開號(hào)】CN105441358
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510951097
【發(fā)明人】胡艷暉, 其他發(fā)明人請(qǐng)求不公開姓名
【申請(qǐng)人】佛山市艷暉生物科技有限公司
【公開日】2016年3月30日
【申請(qǐng)日】2015年12月19日