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一種控制芽孢桿菌產(chǎn)生臭味的培養(yǎng)方法

文檔序號:9682154閱讀:3687來源:國知局
一種控制芽孢桿菌產(chǎn)生臭味的培養(yǎng)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種控制芽孢桿菌產(chǎn)生臭味的培養(yǎng)方法,通過向發(fā)酵培養(yǎng)基添加碳源 并控制碳源的濃度,使芽孢桿菌發(fā)酵過程中不產(chǎn)生臭味,屬于微生物發(fā)酵技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 芽孢桿菌是革蘭氏陽性菌,一種好氧微生物,大部分芽孢桿菌都被作為重要的工 業(yè)菌種應用于工業(yè)生產(chǎn)。如枯草芽孢桿菌、解淀粉芽胞桿菌等已經(jīng)被廣泛的應用于畜牧、醫(yī) 藥、植物病害防治等領(lǐng)域,并且顯示出巨大的社會效益和生態(tài)效益。
[0003] 芽孢桿菌也作為常見的酶的表達宿主,被廣泛用于食品、化工、醫(yī)藥等領(lǐng)域。例如 以枯草芽孢桿菌為宿主表達的L-天冬酰胺酶能夠催化天冬酰胺分解,常用于在食品加工過 程降低丙烯酰胺的含量;再如以地衣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌和解淀粉芽孢 桿菌等芽孢桿菌為宿主表達的普魯蘭酶和淀粉酶已經(jīng)應用于工業(yè)生產(chǎn),大大提高了淀粉質(zhì) 原料的利用率。近年來,解淀粉芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌和短小芽孢桿菌等 芽孢桿菌也被應用于發(fā)酵食品,如將解淀粉芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌等應用 到白酒釀造過程中能夠有效抑制白酒釀造過程中的土臭味。然而,芽孢桿菌在培養(yǎng)過程中 會產(chǎn)生難聞的、發(fā)臭的味道,如果將其添加至食品發(fā)酵過程中會影響食品的品質(zhì)。因此,針 對這一問題,本發(fā)明提供了一種控制芽孢桿菌產(chǎn)生臭味的培養(yǎng)方法,解決了芽孢桿菌在液 體發(fā)酵過程中產(chǎn)生臭味的問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明提供了一種控制芽孢桿菌產(chǎn)生臭味的方法,本方法通過向發(fā)酵培養(yǎng)基中添 加葡萄糖或甘油并控制其添加量,使芽孢桿菌在發(fā)酵過程中不產(chǎn)生臭味。
[0005] 所述方法是在菌體發(fā)酵過程使用發(fā)酵培養(yǎng)基;所述發(fā)酵培養(yǎng)基,按質(zhì)量百分數(shù)進 行配比,含有酵母粉0.5%、蛋白胨l%、NaCl 1%,并向其中添加葡萄糖或甘油,調(diào)節(jié)初始pH 為7.0~7.2,其余為水。
[0006] 在本發(fā)明的一種實施方式中,所述葡萄糖的濃度為2%~3%。
[0007] 在本發(fā)明的一種實施方式中,所述甘油的濃度為2%~3%。
[0008] 在本發(fā)明的一種實施方式中,所述芽孢桿菌為以下任意一種或者多種:解淀粉芽 孢桿菌、枯草芽孢桿菌、蘇云金芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌。
[0009] 在本發(fā)明的一種實施方式中,所述菌體發(fā)酵是按下述操作進行:將種子液培養(yǎng)獲 得的種子液按5%的接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基,然后在37°C,220r/min的條件下發(fā)酵12~ Mlo
[0010] 在本發(fā)明的一種實施方式中,所述方法是先對菌種進行活化,然后進行種子液培 養(yǎng),再使用發(fā)酵培養(yǎng)基發(fā)酵獲得菌體。
[0011] 在本發(fā)明的一種實施方式中,所述種子液培養(yǎng)操作步驟為:挑取固體培養(yǎng)基上的 單菌落接種于種子培養(yǎng)基,在37°C、220r/min的條件下?lián)u床培養(yǎng)12h得到種子液;所述種子 培養(yǎng)基按質(zhì)量百分比的配方如下:酵母粉ο. 5%、蛋白胨1 %、NaCl 1 %,初始pH7.0。
[0012] 所述方法步驟如下:
[0013] 1)將保存在-80°C甘油管中的菌體劃線接種于固體培養(yǎng)基,置于37°C恒溫培養(yǎng)箱 中培養(yǎng)12h獲得單菌落。上述所述的固體培養(yǎng)基按質(zhì)量百分比的配方如下:酵母粉0.5%、蛋 白胨 l%、NaCl 1%、瓊脂 1.8% ~2%,ρΗ7·0。
[0014] 2)挑取固體培養(yǎng)基上的單菌落接種于種子培養(yǎng)基,在37°C,220r/min的條件下?lián)u 床培養(yǎng)12h得到種子液。上述所述的種子培養(yǎng)基按質(zhì)量百分比的配方如下:酵母粉0.5%、蛋 白胨 l%、NaCl 1%,ρΗ7·0。
[0015] 3)將步驟2)中獲得的種子液按5 %的接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基,然后在37°C, 220r/min的條件下發(fā)酵12~24h。
[0016] 本發(fā)明還提供一種控制芽孢桿菌產(chǎn)生臭味的培養(yǎng)基,所述培養(yǎng)基按質(zhì)量百分比進 行配比,含有酵母粉0.5%、蛋白胨1 %、NaCl 1 %,此外還含有葡萄糖2 %~3 %或甘油2 %~ 3%,其余為水。
[0017] 與現(xiàn)有技術(shù)相比,本發(fā)明具有以下優(yōu)勢和有益效果:
[0018] 本發(fā)明通過向發(fā)酵培養(yǎng)基中添加葡萄糖或甘油,來達到控制芽孢桿菌產(chǎn)生臭味的 目的,使其臭味降低或消失,避免了將芽孢桿菌添加至食品發(fā)酵過程中因其自身臭味導致 的對食品品質(zhì)的影響。
【具體實施方式】
[0019] 以下結(jié)合具體的實例對本發(fā)明做進一步的詳細說明。
[0020] 實施例1
[0021] 1.蘇云金芽孢桿菌LG1的菌株活化
[0022]將保藏在_80°C甘油管中的蘇云金芽孢桿菌LG1劃線接種于固體培養(yǎng)基,置于37°C 恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12h獲得單菌落。固體培養(yǎng)基的組成:酵母粉5g/L、蛋白胨10g/L、NaCl 1 〇g/L、瓊脂 20g/L,初始 pH7 · 0。
[0023] 2.蘇云金芽孢桿菌LG1的種子液培養(yǎng)
[0024]挑取固體培養(yǎng)基上的單菌落接種于種子培養(yǎng)基,搖瓶種子培養(yǎng)基的裝液量25/ 250mL。在37°C,220r/min的條件下?lián)u床培養(yǎng)12h得到種子液。種子培養(yǎng)基的組成:酵母粉5g/ L、蛋白胨 1 Og/L、NaCl 1 Og/L,初始 pH7 · 0。
[0025] 3.蘇云金芽孢桿菌LG1的菌體發(fā)酵
[0026] 將步驟2中獲得的種子液按5%的接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基(A~F),然后在37°C, 220r/min的條件下發(fā)酵培養(yǎng)12~24h,評價發(fā)酵培養(yǎng)基中菌體產(chǎn)生臭味情況。
[0027]發(fā)酵培養(yǎng)基的組成如下:
[0028]發(fā)酵培養(yǎng)基 A:酵母粉 5g/L、蛋白胨 10g/L、NaCl 10g/L,pH7.0;
[0029] 發(fā)酵培養(yǎng)基 B:酵母粉 5g/L、蛋白胨 10g/L、NaCl 10g/L,甘油 5g/L,pH7.0;
[0030] 發(fā)酵培養(yǎng)基C:酵母粉5g/L、蛋白胨10g/L、NaCl 10g/L,葡萄糖5g/L,pH7.0;
[0031] 發(fā)酵培養(yǎng)基 D:酵母粉 5g/L、蛋白胨 10g/L、NaCl 10g/L,甘油 20g/L,pH7.0。
[0032] 發(fā)酵培養(yǎng)基E:酵母粉5g/L、蛋白胨10g/L、NaCl 10g/L,葡萄糖20g/L,pH7 · 0。
[0033] 發(fā)酵培養(yǎng)基F:酵母粉5g/L、蛋白胨1 Og/L、NaCl 1 Og/L,麥芽糖20g/L,pH7 · 0。
[0034] 分別將蘇云金芽孢桿菌用上述6種發(fā)酵培養(yǎng)基發(fā)酵12h至24h后,建立20人感官評 定小組,以3個等級評估發(fā)酵液的臭味程度:有明顯臭味(6~10分),有輕微臭味(1~5分), 無臭味(〇分)。結(jié)果如表1所示。
[0035] 表1蘇云金芽孢桿菌LG1發(fā)酵結(jié)束后發(fā)酵液氣味評價統(tǒng)計表
[0036]
[0037]經(jīng)過統(tǒng)計,菌體發(fā)酵過程使用發(fā)酵培養(yǎng)基A、B、F的蘇云金芽孢桿菌LG1的發(fā)酵液有 明顯臭味,并且經(jīng)12000r/min離心棄上清后的菌泥仍有明顯臭味。菌體發(fā)酵過程使用發(fā)酵 培養(yǎng)基C獲得的蘇云金芽孢桿菌LG1的發(fā)酵液有輕微臭味,并且經(jīng)12000r/min高速離心棄上 清后的菌泥也有輕微臭味。而菌體發(fā)酵過程使用發(fā)酵培養(yǎng)基D、E獲得的蘇云金芽孢桿菌LG1 的發(fā)酵液無臭味形成,并且經(jīng)12000r/min高速離心棄上清后的菌泥也無臭味。
[0038] 實施例2
[0039] 1.解淀粉芽孢桿菌JY06的菌株活化
[0040]將保藏在_80°C甘油管中的解淀粉芽孢桿菌JY06劃線接種于固體培養(yǎng)基,置于37 °C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12h獲得單菌落。固體培養(yǎng)基的組成:酵母粉5g/L、蛋白胨10g/L、NaCl 1 〇g/L、瓊脂 20g/L,初始 pH7 · 0。
[00411 2.解淀粉芽孢桿菌JY06的種子液培養(yǎng)
[0042]挑取固體培養(yǎng)基上的單菌落接種于種子培養(yǎng)基,搖瓶種子培養(yǎng)基的裝液量25/ 250mL。在37°C,220r/min的條件下?lián)u床培養(yǎng)12h得到種子液。種子培養(yǎng)基的組成:酵母粉5g/ L、蛋白胨 1 Og/L、NaCl 1 Og/L,初始 pH7 · 0。
[0043] 3.解淀粉芽孢桿菌JY06的菌體發(fā)酵
[0044] 將步驟2中獲得的種子液按5%的接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基(A~F),然后在37°C, 220r/min的條件下發(fā)酵培養(yǎng)12~24h,評價發(fā)酵培養(yǎng)基中菌體產(chǎn)生臭味情況。
[0045] 發(fā)酵培養(yǎng)基的組成如下:
[0046]發(fā)酵培養(yǎng)基 A:酵母粉 5g/L、蛋白胨 10g/L、NaCl 10g/L,pH7.2;
[0047] 發(fā)酵培養(yǎng)基 B:酵母粉 5g/L、蛋白胨 10g/L、NaCl 10g/L,甘油 10g/L,pH7.2;
[0048] 發(fā)酵培養(yǎng)基C:酵母粉5g/L、蛋白胨1 Og/L、NaCl 1 Og/L,葡萄糖1 Og/L,pH7 · 2;
[0049] 發(fā)酵培養(yǎng)基 D:酵母粉 5g/L、蛋白胨 10g/L、NaCl 10g/L,甘油 30g/L,pH7.2。
[0050] 發(fā)酵培養(yǎng)基E:酵母粉5g/L、蛋白胨1 Og/L、NaCl 1 Og/L,葡萄糖30g/L,pH7 · 2。
[00511發(fā)酵培養(yǎng)基F:酵母粉5g/L、蛋白胨1 Og/L、NaCl 1 Og/L,麥芽糖20g/L,pH7 · 2。
[0052]分別將解淀粉芽孢桿菌JY06用上述6種發(fā)酵培養(yǎng)基發(fā)酵12h至24h后,建立20人感 官評定小組,以3個
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