,5-二硝基水楊酸比色法，簡稱 DNS 法）
[0106] 1.試劑和溶液
[0107] 1. 1所用水除特別要求外，均為符合GB/6682-1992規(guī)定的三級水，化學藥品除 特別要求外，均為分析純。
[0108] 1.2DNS 試劑
[0109] 稱取3, 5-二硝基水楊酸10g加入500ml水中，分多次加入氫氧化鈉16g，攪拌 溶解（溫度< 45°C )，再分多次加入酒石酸鉀鈉300g，攪拌至全溶，冷卻后用水定容至 1000ml。室溫下棕色瓶儲存暗處放置，一周后使用（如有沉淀過濾后使用）。
[0110] 1. 3 0· lmol/L，ρΗ5· 0醋酸一醋酸鈉緩沖液
[0111] 吸取冰醋酸1. 8ml，加適量水，加醋酸鈉5. 78g，溶解，定容至1000ml，調(diào)節(jié)ΡΗ至 5. 00 ±0.01后使用。室溫下存放2個月有效。
[0112] 1. 4 0· 1 %即lmg/ml木糖標準溶液
[0113] 無水木糖于80°C烘至恒重，稱取0. 1000g于燒杯中，加適量水溶解，轉入容量瓶 中并定容至l〇〇ml。
[0114] 1.5 1.0 %木聚糖溶液
[0115] 稱取木聚糖1. 00g于燒杯中，用2ml 0. 5mol/L氫氧化鈉潤濕成糊狀，加40ml緩沖 液，于60~70°C水浴中加熱溶解，冷涼后用0. 5mol/L醋酸（約2ml)調(diào)pH5. 0,轉入容量瓶 中，加緩沖液（4. 3)定容至100ml。如果冰箱中放置時間長了出現(xiàn)沉淀，使用前應在熱水浴 中熱溶。
[0116] 1.6木糖標準曲線的繪制
[0117] 吸取lmg/ml木糖溶液0,0· 2,0· 4,0· 6,0· 8,1. 0ml于試管中，補水至2ml，加DNS試 劑3ml，混合后于沸水中煮10min，冷卻后定容至15ml，于分光光度計540nm波長下測吸光 度（A)。以吸光度為縱坐標，木糖量為橫坐標，繪制標準曲線，三次重復試驗的均值用最小 二乘法擬合一元線性方程y = ax + b，求出吸光度與木糖量的關系。
[0118] 2.待測酶樣品的處理
[0119] 直接吸取酶液做適當稀釋，使測定光吸收值在0. 25 - 0. 4范圍內(nèi)。
[0120] 3.酶活力測定
[0121] 取15ml具塞刻度試管按下面的反應順序進行操作，在反應過程中，從加入底 物（吸取前搖勻）（1. 5)開始，向每支試管中加入試劑的時間間隔要絕對一致，50°C水解 10min.
[0122] 反應步驟及試劑、溶液用量見表1 :
[0123] 表1反應步驟及試劑、溶液用量
[0124]
[0125] 4.酶活^單位計算 ''
[0126] 酶活力=(SXDX1000V(0. 2X10) XL 7μ g/ml(g).min 式中：
[0127] S一測得光吸收在標準曲線上對應的木糖量，mg數(shù)；
[0128] D-酶液或酶粉稀釋倍數(shù)；
[0129] 1000-mg和μ g之間的換算系數(shù)；
[0130] 0· 2-測定所取酶液量，ml數(shù)；
[0131] 10一反應時間，min數(shù)；
[0132] 1.7-方法換算系數(shù)。
[0133] 5.酶活力單位定義及換算
[0134] 5. 1本方法酶活定義：在本測定條件下，每分鐘水解木聚糖產(chǎn)生1 μ g還原糖（以 木糖計）所需酶量定義為一個酶活力單位（u)。
[0135] 國際酶活單位的定義：在測定條件下，每分鐘水解木聚糖產(chǎn)生1 μ mol還原糖（以 木糖計）所需酶量定義為一個酶活力單位（IU)。
[0136] 5. 2 u與國際單位IU的換算關系：
[0137] lu = 1 + 150IU ( μ mol 糖 /ml (g) · min)
[0138] 150:木糖的分子量
[0139] 實施例3堿性木聚糖酶的熱穩(wěn)定性分析
[0140] 對酶的熱穩(wěn)定性進行了分析，將實施例1堿性木聚糖酶制備的粗酶液分別置于 40°C、45°C、50°C、55°C、60°C、65°C、70°C下，每隔 10 分鐘取樣測定酶活。粗酶液 40°C、45°C、 50°C、55°C下，60分鐘酶活沒有下降。60°C與65°C下，30分鐘降到原有酶活的95%，60分鐘 降到85%。70°C下，30分鐘降到原有酶活的85%，60分鐘降到80%。75°C下，30分鐘降到 原有酶活的80 %，60分鐘降到70 %，與現(xiàn)有技術相比達到同樣的酶活，耐受溫度較高。
[0141] 實施例4堿性木聚糖酶pH穩(wěn)定性分析
[0142] 對酶的pH穩(wěn)定性進行了分析，將實施例1堿性木聚糖酶制備的粗酶液分別置于 pH值4. 0、5. 0、6. 0、7. 0、8. 0、9. 0、10. 0、11. 0下，每隔10分鐘取樣測定酶活。粗酶液pH值 6. 0、7. 0、8. 0、9. 0下，60分鐘酶活沒有下降。pH值5. 0與10. 0下，30分鐘降到原有酶活的 95%，60分鐘降到85%。pH值4. 0與11. 0下，30分鐘降到原有酶活的80%，60分鐘降到 70%。同樣條件下達到同樣酶活耐pH值比現(xiàn)有技術菌株明顯寬泛。
[0143] 實施例5
[0144] 一種紙漿漂白復合酶，由以下重量份數(shù)的原料制備：
[0145] 堿性木聚糖酶30份，嗜熱芽孢桿菌培養(yǎng)物20份，漆酶15份，葡聚糖酶6份，1-羥 基苯并三氮唑5份，EDTA 5份，保護劑6份，激活劑6份，甘露糖酶5份，脂肪酶4份，單寧 酶4份，果膠酶4份，三羥甲基磷酸的雙磷衍生物（ΒΒΗΡΕ) 3份，非離子表面活性劑3份，抗 氧化劑2份；
[0146] 所述堿性木聚糖酶和嗜熱芽孢桿菌培養(yǎng)物由實施例1制備；
[0147] 所述非離子表面活性劑的質(zhì)量組份為：烷基多苷（APG)30份，烷基葡萄糖酰胺 (AGA)25份，N-十二烷基乙二胺三乙酸鈉（ED3A)12份，異構醇醚羧酸鹽AEC-110712份，月 桂酰胺醚羧酸鹽（LAEC) 9份，平平加c-1254份，JFC 4份；
[0148] 所述激活劑是由如下質(zhì)量組份的無機鹽均勻混合而成：硫酸鈉12份，氯化鋅7份， 氯化鎂6份，氯化鈣4份；
[0149] 所述保護劑由以下重量份數(shù)的原料組成：海藻糖30份，靈芝多糖15份，NaCl 12 份，（NH4) 2S047份，半胱氨酸4份；
[0150] 所述抗氧化劑為葡萄籽原花青素、迷迭香提取物和杏葉提取物按質(zhì)量比3:4:1. 5 均勻混合；
[0151] 上述紙漿漂白復合酶的制備方法，包括如下步驟：首先將所述保護劑、激活劑分別 超微粉碎，均勻混合，隨后立即依次加入非離子表面活性劑、嗜熱芽孢桿菌培養(yǎng)物均勻混合 25min，然后依次加入堿性木聚糖酶、漆酶、葡聚糖酶、甘露糖酶、脂肪酶、單寧酶、果膠酶均 勻混合，最后依次加入1-羥基苯并三氮唑、Η)ΤΑ、三羥甲基磷酸的雙磷衍生物（BBHPE)、抗 氧化劑，混合均勻后密封包裝即得紙漿漂白復合酶。
[0152] 實施例6
[0153] -種紙漿漂白復合酶，由以下重量份數(shù)的原料制備：
[0154] 堿性木聚糖酶20份，嗜熱芽孢桿菌培養(yǎng)物10份，漆酶10份，葡聚糖酶5份，1-羥 基苯并三氮唑3份，EDTA 3份，保護劑4份，激活劑4份，甘露糖酶4份，脂肪酶3份，單寧 酶3份，果膠酶3份，三羥甲基磷酸（THP) 2份，非離子表面活性劑2份，抗氧化劑1份；
[0155] 所述堿性木聚糖酶和嗜熱芽孢桿菌培養(yǎng)物由實施例1制備；
[0156] 所述非離子表面活性劑的質(zhì)量組份為：烷基多苷（APG)20份，烷基葡萄糖酰胺 (AGA)20份，N-十二烷基乙二胺三乙酸鈉（ED3A)10份，異構醇醚羧酸鹽AEC-110710份，月 桂酰胺醚羧酸鹽（LAEC)8份，平平加c-1253份，JFC 3份；
[0157] 所述激活劑是由如下質(zhì)量組份的無機鹽均勻混合而成：硫酸鈉10份，氯化鋅6份， 氯化鎂5份，氯化鈣3份；
[0158] 所述保護劑由以下重量份數(shù)的原料組成：海藻糖20份，靈芝多糖12份，NaCl 10 份，（NH4) 2S045份，半胱氨酸3份；
[0159] 所述抗氧化劑為葡萄籽原花青素、迷迭香提取物和杏葉提取物按質(zhì)量比2:1:1均 勻混合；
[0160] 上述紙漿漂白復合酶的制備方法同實施例2。
[0161] 實施例7
[0162] 一種紙漿漂白復合酶，由以下重量份數(shù)的原料制備：
[0163] 堿性木聚糖酶40份，嗜熱芽孢桿菌培養(yǎng)物30份，漆酶20份，葡聚糖酶8份，1-羥 基苯并三氮唑8份，EDTA 8份，保護劑7份，激活劑7份，甘露糖酶6份，脂肪酶5份，單寧 酶5份，果膠酶5份，白度穩(wěn)定劑5份，非離子表面活性劑4份，抗氧化劑3份；
[0164] 所述堿性木聚糖酶和嗜熱芽孢桿菌培養(yǎng)物由實施例1制備；
[0165] 所述白度穩(wěn)定劑為三羥甲基磷酸（THP)與三羥甲基磷酸的雙磷衍生物（BBHPE)按 質(zhì)量比1:2均勻混合；
[0166] 所述非離子表面活性劑的質(zhì)量組份為：烷基多苷（APG)40份，烷基葡萄糖酰胺 (AGA)30份，N-十二烷基乙二胺三乙