一種裂環(huán)杜松烷型倍半萜類化合物及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一個從現(xiàn)有中成藥制劑中提取的裂環(huán)杜松烷 型倍半萜類化合物及其制備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 熱毒寧注射液（國藥準(zhǔn)字Z20050217)為江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司自主研發(fā)的 原中藥二類新藥，其處方為青蒿、金銀花、梔子，輔料為聚山梨酯80。熱毒寧注射液在外感風(fēng) 熱所致感冒、流感、咳嗽、上呼吸道感染等疾病的臨床治療中應(yīng)用廣泛，其作用迅速、效果顯 著。
[0003] 研究人員在熱毒寧注射液中發(fā)現(xiàn)了新的化學(xué)成分，并且發(fā)現(xiàn)此化合物在各個批次 的熱毒寧注射液中均穩(wěn)定存在。經(jīng)查閱文獻(xiàn)可知，這是首次在熱毒寧注射液中發(fā)現(xiàn)并鑒定 出的新的化學(xué)成分，并經(jīng)過Seifinderscholar檢索發(fā)現(xiàn)該化合物為新化合物。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明從熱毒寧注射液中制備提取出一種具有生物活性的杜松烷型倍半萜類化 合物，并提供了其在制備治療手足口病藥物中的應(yīng)用。
[0005] 具體地說，本發(fā)明提供了一種杜松烷型倍半萜類化合物，其結(jié)構(gòu)如式I所示：
[0007] 本發(fā)明還提供了上述化合物的制備方法，包括如下步驟：
[0008] (1)取熱毒寧注射液成品，經(jīng)HP-20大孔吸附樹脂色譜柱分離，依次以水、30%乙 醇、90~100 %乙醇梯度洗脫，分別收集各洗脫液，減壓濃縮至無醇味，得到水洗脫部位、 30%乙醇洗脫部位、90~100%乙醇洗脫部位；
[0009] (2)取步驟（1)的90~100%乙醇洗脫部位，經(jīng)硅膠柱色譜分離，氯仿-甲醇梯度 洗脫，收集氯仿-甲醇體積比為9 : 1的洗脫液洗，減壓濃縮的餾分B，餾分B經(jīng)S印hadex LH-20柱色譜分離，氯仿-甲醇等度洗脫，去除色素后收集餾分，標(biāo)記為B-2,餾分B-2經(jīng)0DS 柱色譜分離，甲醇-水梯度洗脫收集甲醇-水體積比為3 : 2的餾分B-2-2,餾分B-2-2經(jīng) 半制備液相HPLC分離，得到本發(fā)明的化合物。
[0010] 上述制備方法中，步驟（2)所述半制備液相色譜，以比例為55 : 45 : 0.5的甲 醇-水-甲酸為流動相，檢測波長為208與220nm，流速4mL/min，在半制備液相上的保留時 間為 37. 4min。
[0011] 發(fā)明人通過理化性質(zhì)和現(xiàn)代波譜學(xué)手段（UV、IR、MS、CD、iH-NMR^C-NMRJD-NMR 和單晶X射線衍射）對分離得到的化合物進(jìn)行了結(jié)構(gòu)鑒定，證實其為結(jié)構(gòu)如式I所示的裂 環(huán)杜松烷型倍半萜類化合物。
[0012] 本發(fā)明的另一個目的在于提供一種式I所示化合物在制備治療手足口病藥物中 的應(yīng)用。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)本發(fā)明化合物對手足口病EV71病毒有一定的抑制作用。
[0013] 本發(fā)明的再一個目的在于提供一種藥物組合物，包含上述式I所示化合物。
[0014] 本發(fā)明還提供了一種治療手足口病的藥物組合物，含有治療有效量的上述式I化 合物以及一種或多種藥學(xué)上可接受的載體。
【附圖說明】
[0015]圖 1 為化合物的HR-ESI-Q-T0F-MS
[0016] 圖2為化合物的1H-NMR譜
[0017] 圖3為化合物的13C_NMR譜和DEPT-135譜
[0018] 圖4為化合物的1H」HCOSY譜
[0019] 圖5為化合物的HSQC譜
[0020] 圖6為化合物的HMBC譜
[0021] 圖7為化合物的N0ESY譜
[0022] 圖8為化合物的單晶X射線衍射圖
[0023] 圖9為化合物結(jié)構(gòu)式
【具體實施方式】
[0024] 為了使本領(lǐng)域的技術(shù)人員更好地理解本發(fā)明的技術(shù)方案，下面結(jié)合具體實施例對 本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。
[0025] 實施例1本發(fā)明化合物的制備
[0026] (1)取熱毒寧注射液成品，經(jīng)HP-20大孔吸附樹脂色譜柱分離，依次以水、30%乙 醇、95%乙醇梯度洗脫，分別收集各洗脫液，減壓濃縮至無醇味，得到水洗脫部位、30%乙醇 洗脫部位、95%乙醇洗脫部位；
[0027] (2)取步驟（1)的90~100%乙醇洗脫部位，經(jīng)硅膠柱色譜分離，氯仿-甲醇梯度 洗脫，收集氯仿-甲醇體積比為9 : 1的洗脫液減壓濃縮得餾分B，餾分B經(jīng)S印hadexLH-20 柱色譜分離，氯仿-甲醇等度洗脫，去除色素后收集餾分，標(biāo)記為B-2,餾分B-2經(jīng)0DS柱色 譜分離，用甲醇-水梯度洗脫，收集甲醇-水體積比為3 : 2的餾分B-2-2,總計105mg，餾 分B-2-2經(jīng)半制備液相HPLC分離，以比例為55 : 45 : 0. 5的甲醇-水-甲酸為流動相， 檢測波長為208與220nm，流速4mL/min，在半制備液相上的保留時間為37. 4min。分離所得 溶液干燥，得到本發(fā)明的化合物35. 7mg。
[0028] 實施例2本發(fā)明化合物的結(jié)構(gòu)鑒定
[0029] 本化合物為白色針狀結(jié)晶。ESI-MS(positive)給出m/z587[2M+Na]+; ESI-MS(negative)給出 281 [M-H]，提示化合物分子量為 282。HR-ESI-Q/T0F-MS給出m/z 305. 1365[M+Na] + (計算值為305. 1365)(見圖1)，確定化合物分子式為C15H2205，計算不飽和 度為5。
[0030]本化合物的1H-NMR(400MHz，inra30D)(見圖2)譜共顯示了 20個氫信號，低場區(qū) 顯示了 2個烯氫質(zhì)子信號[δ6. 19 (1H，brs)，5. 68 (1H，brs)]，高場區(qū)可見1個單峰甲基信 號[δ2. 12(3H，s)]，表明其與季碳直接相連，1個d峰甲基信號δ〇. 93(3H，d，J= 6. 4Hz)， 表明其與叔碳直接相連。
[0031] 本化合物的13C-NMR(100MHz，inCD30D)結(jié)合DEPT-135譜（見圖3)共顯示15根 碳信號，其中包括4個季碳信號（3個羰基δ211. 9,178. 4及169. 73,1個SP2雜化的季碳 信號（S144. 7)，2個甲基碳信號（δ29. 9, 20.0)，5個亞甲基碳信號（δ125. 8, 38. 7, 36. 3， 33. 6,24. 7)，其中亞甲基碳信號δ125. 8為一個末端雙鍵的碳信號。綜合以上信息，推測化 合物為一個具有15個碳原子骨架的倍半萜類化合物，結(jié)構(gòu)中含有1個環(huán)，1個雙鍵，3個羰 基。
[0032]本化合物的1Η」ΗCOSY譜中（見圖 4)，觀察到Η-1/Η-6/Η-7/Η-8/Η-9/Η-10 (Η-14) 和H-1/H-2/H-3之間存在明顯的相關(guān)信號，結(jié)合HSQC譜（見圖5)，推出結(jié)構(gòu)中存在一個飽 和六元環(huán)的結(jié)構(gòu)A。
[0033]在HMBC譜中（見圖 6)，相關(guān)峰H-13/C-7，C-11，C-12 ;H-7/C-ll，C-12，C-13 ;H-15/ C-3,C-4以及H-6/C-5構(gòu)建了結(jié)構(gòu)片段B。結(jié)合分子式和分子量，可知15位和9位上連接 羥基。由此將化合物15的平面結(jié)構(gòu)確定為2-carboxy-4_met