一種從杧果中提取、分離和純化歐南斯皮酮d的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種藥用植物領(lǐng)域，一種從杧果中提取、分離和純化歐南斯皮酮D的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]歐南斯皮酮D(ArurasperoneD)是從漆樹(shù)科Anacardiaceae祀果屬M(fèi)angifera L.杧果Mangifera indica的果實(shí)中提取出來(lái)的一種化合物，分子量:556.53，分子式C31H24O10，藥理研究表明，歐南斯皮酮D具有中樞鎮(zhèn)靜劑(動(dòng)物試驗(yàn))。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)歐南斯皮酮D的研究較少，尚未檢索到制備歐南斯皮酮D的方法報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明目的在于提供一種歐南斯皮酮D的制備方法，以填補(bǔ)該化合物制備方法的空白。
[0004]本發(fā)明的目的主要通過(guò)以下技術(shù)過(guò)程來(lái)實(shí)現(xiàn):
具體步驟如下:
(1)乙醇提取:杧果切片，曬干，用粉碎機(jī)粉碎3kg，得到杧果粉末，過(guò)16目篩，將杧果粉末于若干濾紙筒中，在85°C水浴中用250mL60-95%的乙醇回流提取6-12h，收集杧果乙醇提取液。減壓除去部分乙醇，得到浸膏適量，待用。
[0005](2)D101大孔樹(shù)脂富集:將D101型大孔樹(shù)脂采用濕法裝柱(樹(shù)脂量以濕體積計(jì)為200-300mL，徑高比為1:(10-15))，先用乙醇清洗至洗出液澄清后，再用蒸餾水脫出至無(wú)醇味，備用。稱取上述杧果乙醇提取物浸膏50g，經(jīng)200?500mL的60?95%乙醇充分溶解后，向其中加入80?150mL水，靜置過(guò)夜。將靜置后的藥液抽濾(0.22μπι的濾膜)，減壓回收上清液中的乙醇除凈，所得的杧果水溶液，用D101型大孔樹(shù)脂按30%?100%的甲醇梯度進(jìn)行洗脫，分段收集洗脫液。用HPLC進(jìn)行分析，確定選用90-100%甲醇洗脫液作為杧果粗提物，待分離。按上述方法共得到杧果乙醇提取物浸膏130g，得到待分離純化的杧果粗提物。
[0006](3 )高速逆流色譜進(jìn)行分離和純化:用分液漏斗中配制石油醚-氯仿-甲醇-水的兩相溶劑體系，充分搖勻后，室溫靜置過(guò)夜。兩相溶劑分配達(dá)到平衡后，按上相和下相分開(kāi)放入棕色廣口瓶中，超聲脫氣20min，備用。準(zhǔn)確稱取杧果粗提物6.0g溶解于下相中，超聲溶解，得到19g/L的樣品溶液，備用。將兩相溶劑系統(tǒng)中已超聲脫氣的上相為固定相，下相為流動(dòng)相，以10?25mL/min的速度栗入高速逆流色譜分離管中，待上相充滿分離管后，順時(shí)針旋轉(zhuǎn)，緩慢均勾調(diào)節(jié)主機(jī)轉(zhuǎn)速至600?900r/m in，同時(shí)以1.5mL/min的速度將下相注入其中，待兩相平衡，將適量杧果粗提物溶液注入分離管中，采集數(shù)據(jù)，按照色譜峰收集目標(biāo)成分。
[0007]所述步驟(2)中用到的大孔樹(shù)脂是經(jīng)過(guò)預(yù)處理的。
[0008]所述步驟(2)用D101型大孔樹(shù)脂按30%?100%的甲醇梯度進(jìn)行洗脫時(shí)，甲醇的濃度是逐漸遞增的。
[0009]所述步驟(3)用到的溶劑系統(tǒng)石油醚-氯仿-甲醇-水的體積比為(3-6):(2-9):(1-7):(3-8)0
[0010]該發(fā)明所說(shuō)的一種從杧果中提取、分離和純化歐南斯皮酮D的方法的優(yōu)勢(shì)在于: 本發(fā)明(1)先用大孔樹(shù)脂有效成分進(jìn)行富集，降低了后續(xù)工序的處理量；(2)采用高速逆流色譜進(jìn)行分離和純化，不僅實(shí)現(xiàn)了連續(xù)化作業(yè)、動(dòng)態(tài)逆流提取，且提高了有效成分的得率。
[0011]下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的解釋。
[0012]實(shí)例1
杧果切片，曬干，用粉碎機(jī)粉碎3kg，得到杧果粉末，過(guò)16目篩，將杧果粉末于若干濾紙筒中，在85°C水浴中用250mL75%的乙醇回流提取10h，收集杧果乙醇提取液。減壓除去部分乙醇，得到浸膏適量，待用。將D101型大孔樹(shù)脂采用濕法裝柱(樹(shù)脂量以濕體積計(jì)為250mL，徑高比為1:12)，先用乙醇清洗至洗出液澄清后，再用蒸餾水脫出至無(wú)醇味，備用。稱取上述杧果乙醇提取物浸50g，經(jīng)300mL的65%乙醇充分溶解后，向其中加入lOOmL水，靜置過(guò)夜。將靜置后的藥液抽濾(0.22μπι的濾膜)，減壓回收上清液中的乙醇除凈，所得的杧果水溶液，用D1 1型大孔樹(shù)脂按30%?100%的甲醇梯度進(jìn)行洗脫，分段收集洗脫液。用HPLC進(jìn)行分析，確定選用100%甲醇洗脫液作為杧果粗提物，待分離。按上述方法共得到杧果乙醇提取物浸膏130g，得到待分離純化的杧果粗提物。用分液漏斗中配制石油醚-氯仿-甲醇-水的兩相溶劑體系，充分搖勻后，室溫靜置過(guò)夜。兩相溶劑分配達(dá)到平衡后，按上相和下相分開(kāi)放入棕色廣口瓶中，超聲脫氣20min，備用。準(zhǔn)確稱取杧果粗提物6.0g溶解于下相中，超聲溶解，得到19g/L的樣品溶液，備用。將兩相溶劑系統(tǒng)中已超聲脫氣的上相為固定相，下相為流動(dòng)相，以15mL/min的速度栗入高速逆流色譜分離管中，待上相充滿分離管后，順時(shí)針旋轉(zhuǎn)，緩慢均勻調(diào)節(jié)主機(jī)轉(zhuǎn)速至700r/m in，同時(shí)以1.5mL/min的速度將下相注入其中，待兩相平衡，將適量杧果粗提物溶液注入分離管中，采集數(shù)據(jù)，按照色譜峰收集目標(biāo)成分。HPLC檢測(cè)含量為97.86%o
[0013]實(shí)例2
杧果切片，曬干，用粉碎機(jī)粉碎3kg，得到杧果粉末，過(guò)16目篩，將杧果粉末于若干濾紙筒中，在85°C水浴中用250mL85%的乙醇回流提取12h，收集杧果乙醇提取液。減壓除去部分乙醇，得到浸膏適量，待用。將D101型大孔樹(shù)脂采用濕法裝柱(樹(shù)脂量以濕體積計(jì)為300mL，徑高比為1:15)，先用乙醇清洗至洗出液澄清后，再用蒸餾水脫出至無(wú)醇味，備用。稱取上述杧果乙醇提取物浸膏50g，經(jīng)500mL的85%乙醇充分溶解后，向其中加入130mL水，靜置過(guò)夜。將靜置后的藥液抽濾(0.22μπι的濾膜)，減壓回收上清液中的乙醇除凈，所得的杧果水溶液，用D101型大孔樹(shù)脂按30%?100%的甲醇梯度進(jìn)行洗脫，分段收集洗脫液。用HPLC進(jìn)行分析，確定選用90%甲醇洗脫液作為杧果粗提物，待分離。按上述方法共得到杧果乙醇提取物浸膏130g，得到待分離純化的杧果粗提物。用分液漏斗中配制石油醚-氯仿-甲醇-水的兩相溶劑體系，充分搖勻后，室溫靜置過(guò)夜。兩相溶劑分配達(dá)到平衡后，按上相和下相分開(kāi)放入棕色廣口瓶中，超聲脫氣20min，備用。準(zhǔn)確稱取杧果粗提物6.0g溶解于下相中，超聲溶解，得到19g/L的樣品溶液，備用。將兩相溶劑系統(tǒng)中已超聲脫氣的上相為固定相，下相為流動(dòng)相，以18mL/min的速度栗入高速逆流色譜分離管中，待上相充滿分離管后，順時(shí)針旋轉(zhuǎn)，緩慢均勻調(diào)節(jié)主機(jī)轉(zhuǎn)