Ssr基因在調(diào)控植物根生長(zhǎng)發(fā)育中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種SSR基因在調(diào)控植物根生長(zhǎng)發(fā)育中的應(yīng)用,屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 根是植物非常重要的器官,植物通過(guò)根來(lái)吸收土壤中營(yíng)養(yǎng)和水分,感受土壤中的 環(huán)境信號(hào),保證植物完成正常的生長(zhǎng)周期。根的生長(zhǎng)發(fā)育對(duì)于調(diào)控植物的營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng),生殖生 長(zhǎng),以及植物對(duì)逆境的抵抗能力都有著重要的作用。早在上世紀(jì)人們利用植物生理學(xué)方法 對(duì)根的生長(zhǎng)和發(fā)育已經(jīng)有了很多的研究,近幾十年,由于分子生物學(xué)的快速發(fā)展,對(duì)于植物 根的研究也進(jìn)入了更深層次的水平。但是,由于根的生長(zhǎng)和發(fā)育涉及過(guò)程復(fù)雜,目前還存在 很多未知的機(jī)制和機(jī)理,因此還需要人們對(duì)其進(jìn)行更深入和細(xì)致的研究。
[0003] 根的生長(zhǎng)發(fā)育是由根的分生組織的細(xì)胞分裂和細(xì)胞伸長(zhǎng)來(lái)完成的。擬南芥的根分 生組織中,不活躍的靜止中心(QuiescentCenter,QC)和其周?chē)挠薪z分裂活躍的干細(xì)胞 形成干細(xì)胞微環(huán)境,提供根部除表皮和根冠外組織的細(xì)胞來(lái)源,是保證根正常生長(zhǎng)和伸長(zhǎng) 的重要部分。目前研究發(fā)現(xiàn)SH0RTR00T(SHR),SCARECROW(SCR),PLETHORA(PLT)基因?qū)τ谥?物根分生區(qū)靜止中心的細(xì)胞分裂活性的維持有著重要作用。
[0004] 除了參與根生長(zhǎng)發(fā)育的基因以外,植物激素對(duì)于根的生長(zhǎng)和發(fā)育也有著重要作 用,其中最典型的就是生長(zhǎng)素對(duì)于根生長(zhǎng)的調(diào)控(Galweiler,1998#75 ;Muller,1998#76; Friml,2002#80 ;Friml,2002#82)。大部分生長(zhǎng)素是在植物的地上部分合成,通過(guò)生長(zhǎng)素運(yùn) 輸載體,運(yùn)輸?shù)礁浚诟行纬缮L(zhǎng)素濃度梯度,從而調(diào)控根的生長(zhǎng)和發(fā)育。生長(zhǎng)素的外 輸載體PIN蛋白作為生長(zhǎng)素的重要向外運(yùn)輸載體,將地上部分合成的生長(zhǎng)素運(yùn)輸?shù)礁猓?在根尖處形成生長(zhǎng)素的濃度梯度,促進(jìn)細(xì)胞的極性生長(zhǎng),實(shí)現(xiàn)根的伸長(zhǎng)以及向地性生長(zhǎng)等。 研究表明,PIN蛋白均為膜蛋白,且大部分是極性定位的,它們的極性和運(yùn)輸生長(zhǎng)素的方向 一致。PIN蛋白有著復(fù)雜的調(diào)控機(jī)制,包括降解調(diào)控,胞內(nèi)循環(huán)調(diào)控等,目前對(duì)于PIN的調(diào)控 研究還存在許多盲點(diǎn),需要我們?nèi)ヌ綄ぁ?br>[0005]SSR基因是擬南芥中的功能未知基因,又名NDP1,該基因的功能研究較少。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種SSR基因在調(diào)控植物根生長(zhǎng)中的應(yīng)用。
[0007] 本發(fā)明提供一種抑制植物的根生長(zhǎng)的方法,是敲除植物中的SSR基因。
[0008] -種促進(jìn)植物的根生長(zhǎng)的方法也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍,是使SSR基因在植物中 過(guò)表達(dá);
[0009] 所述根生長(zhǎng)具體體現(xiàn)為根長(zhǎng)變長(zhǎng)和/或分生區(qū)細(xì)胞的分裂或分化能力提高。
[0010] -種抑制植物中生長(zhǎng)素運(yùn)輸?shù)姆椒ㄒ矊儆诒景l(fā)明的保護(hù)范圍,是敲除植物中的 SSR基因;
[0011] 所述生長(zhǎng)素具體為所述植物根部的生長(zhǎng)素。
[0012] -種降低植物抗旱能力的方法也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍,是敲除植物中的SSR基 因。
[0013] 一種提高植物抗旱能力的方法也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍,是使SSR基因在植物中 過(guò)表達(dá)。
[0014] 上述任一所述的方法中,所述使SSR基因在植物中過(guò)表達(dá)的方法是將含有所述 SSR基因的重組表達(dá)載體導(dǎo)入所述植物中;
[0015] 所述重組表達(dá)載體具體是將SSR基因組序列插入pCAMBIA1300的多克隆位點(diǎn)間得 到的,再具體是將SEQID No.3所示的DNA分子插入pCAMBIA1300的PstI和ΚρηΙ位點(diǎn)間 得到的。
[0016] 上述任一所述的方法中,所述植物為擬南芥;
[0017] 所述SSR基因?yàn)閿M南芥的SSR基因;
[0018] 所述SSR基因序列如SEQID No. 3中自5'末端起第10位至第4378位核苷酸所 /_J、1 〇
[0019]SSR基因在促進(jìn)植物的根生長(zhǎng)或提高植物的抗旱能力中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保 護(hù)范圍。
[0020] SSR基因作為靶點(diǎn)在抑制植物的根生長(zhǎng)、抑制植物中生長(zhǎng)素運(yùn)輸或降低植物的抗 旱能力中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍;
[0021] 所述生長(zhǎng)素具體為所述植物根部的生長(zhǎng)素。
[0022] 上述任一所述的應(yīng)用中,所述植物為擬南芥;
[0023] 所述SSR基因?yàn)閿M南芥的SSR基因;
[0024] 所述根生長(zhǎng)體現(xiàn)為根長(zhǎng)變長(zhǎng)和/或分生區(qū)細(xì)胞的分裂或分化能力提高;
[0025] 所述SSR基因序列如SEQID No. 3中自5'末端起第10位至第4378位核苷酸所 /_J、1 〇
[0026] 本發(fā)明證明擬南芥SSR基因在植物的根生長(zhǎng)及生長(zhǎng)素運(yùn)輸中發(fā)揮了重要作用。
【附圖說(shuō)明】
[0027] 圖1為ssrl-Ι突變體的PCR鑒定。
[0028] 圖2為SSR基因?qū)M南芥的根的表型的影響。
[0029] 圖3為SSR基因敲除對(duì)根生長(zhǎng)點(diǎn)處細(xì)胞分裂分化狀態(tài)的影響。
[0030] 圖4為SSR基因敲除對(duì)根發(fā)育相關(guān)基因的影響。
[0031] 圖5為SSR基因敲除對(duì)生長(zhǎng)素運(yùn)輸?shù)挠绊憽?br>[0032] 圖6為SSR基因敲除對(duì)生長(zhǎng)素的外輸載體PIN蛋白表達(dá)的影響。
[0033] 圖7為SSR基因敲除對(duì)生長(zhǎng)素的外輸載體PIN2蛋白的定位的影響。
【具體實(shí)施方式】
[0034] 下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無(wú)特殊說(shuō)明,均為常規(guī)方法。
[0035] 下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等,如無(wú)特殊說(shuō)明,均可從商業(yè)途徑得到。
[0036]pCAMBIA1300 在文獻(xiàn) "Wang,L.,Hua,D.,He,J.,Duan,Y.,Chen,Z.,Hong,X.,and Gong,Z. (2011).AuxinResponseFactor2(ARF2)anditsregulatedhomeodomaingene HB33mediateabscisicacidresponseinArabidopsis.PLoSgenetics7,el002172.,' 中 公開(kāi)過(guò),公眾可從中國(guó)科學(xué)院植物研究所獲得。
[0037]pMDC32在文獻(xiàn)" Zhang,M.,Henquet,M.,Chen,Z.,Zhang,H.,Zhang,Y.,Ren,X.,van der Krol, S. , Gonneau, M., Bosch, D. , and Gong, Z. (2009). LEW3, encoding a putative alp ha-1, 2-mannosyltransferase(ALG11)in N-linked glycoprotein, plays vital roles in cell-wall biosynthesis and the abiotic stress response in Arabidopsis thaliana. Plant J60, 983-999. "中公開(kāi)過(guò),公眾可從中國(guó)科學(xué)院植物研究所獲得。
[0038]pCAMBIA1391在文獻(xiàn)"Zhang,M.,Henquet,M.,Chen,Z.,Zhang,H.,Zhang,Y.,Re η, X. , van der Krol,S.,Gonneau,M.,Bosch,D.,and Gong, Z. (2009). LEW3, encoding a putative alpha-1,2-mannosyltransferase (ALG11)in N-linked glycoprotein,plays vital roles in cell-wall biosynthesis and the abiotic stress response in Arabidopsis thaliana. Plant J60, 983-999. "中公開(kāi)過(guò),公眾可從中國(guó)科學(xué)院植物研究所 獲得。
[0039]擬南芥Col-0生態(tài)型(Arabidopsis thaliana,Columbia ecotype)在文獻(xiàn)"Wa ng, L. , Hua, D. , He, J. , Duan, Y. , Chen, Z. , Hong, X. , and Gong, Z. (2011). Auxin Response Factor2 (ARF2)and its regulated homeodomain gene HB33mediate abscisic acid response in Arabidopsis. PLoS genetics7,e100 2172."中公開(kāi)過(guò),公眾可從中國(guó)科學(xué)院植 物研究所獲得。
[0040] pENTRTM /TEV/D-T0P0? Cloning Kit購(gòu)自Life Technologies公司,產(chǎn)品目錄號(hào) 為k2525-20。
[0041] Gateway⑧LR Clonase⑧II Enzyme mix購(gòu)自Life Technologies公司,產(chǎn)品目 錄號(hào)為11791-020。
[0042]擬南芥Ws-0(Arabidopsis thaliana,Wassilewskija ecotype)在文獻(xiàn) "Parker,J. Ε·,Holub,Ε· Β·,F(xiàn)rost,L. Ν·,F(xiàn)alk,Α·,Gunn,Ν· D.,and Daniels,Μ· J. (1996)· Characterization of edsl,a mutation in Arabidopsis suppressing resistance to Peronospora parasitica specified by several different RPP genes.Plant Cell8, 2033-2046. "中公開(kāi)過(guò),公眾可從中國(guó)科學(xué)院植物研究所獲得。
[0043] SSR基因敲除突變體ssrl-2購(gòu)自Versailles Arabidopsis Stock Center,產(chǎn)品 目錄號(hào)為FLAG_356A08。
[0044]帶有QC25:(;US標(biāo)簽的轉(zhuǎn)基因擬南芥在文獻(xiàn)"Sabatini,S.,Heidstra,R.,Wildwat er, M. , and Scheres, B. (2003). SCARECROW is involved in positioning the stem cell niche in the Arabidopsis root meristem. Genes Dev 17,354_358. "中公開(kāi)過(guò),公眾可從 中國(guó)科學(xué)院植物研究所獲得。
[0045]帶有wox5 :GFP標(biāo)簽的轉(zhuǎn)基因擬南芥在文獻(xiàn)"Zhou,W.,Wei,L.,Xu,J.,Zhai,Q .,Jiang, H. , Chen, R. , Chen, Q. , Sun, J. , Chu, J. , Zhu, L. , Liu, C. M. , and Li, C. (2010). Arabidopsis Tyrosylprotein sulfotransferase acts in the auxin/PLETHORA pathway in regulating postembryonic maintenance