檢測(cè)miR-30c-5p表達(dá)量的系統(tǒng)在預(yù)測(cè)阿司匹林對(duì)心血管疾病患者療效中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域中檢測(cè)miR-30c-5p表達(dá)量的系統(tǒng)在預(yù)測(cè)阿司匹林對(duì)心 血管疾病患者療效中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 阿司匹林(ASA)是冠心病患者二級(jí)預(yù)防常用的抗血小板藥物，大量隨機(jī)雙盲臨床 研究證實(shí)阿司匹林可以顯著減少惡性心律失常、非致死性心肌梗死、心源性猝死等不良事 件的發(fā)生，是美國(guó)心臟病學(xué)會(huì)(ACC)和美國(guó)心臟學(xué)會(huì)(AHA)指南推薦的標(biāo)準(zhǔn)治療藥物之一。 阿司匹林抑制血小板聚集作用在人群中存在較大個(gè)體差異和不可預(yù)測(cè)性已被許多臨床研 究所證實(shí)，部分患者盡管長(zhǎng)期服用常規(guī)劑量的阿司匹林，臨床上仍不能有效的預(yù)防動(dòng)脈粥 樣硬化血栓事件發(fā)生，此現(xiàn)象稱為阿司匹林低反應(yīng)性或阿司匹林治療下血小板高反應(yīng)性 (HighonAspirinPlateletResponse，HAPR)，即阿司匹林的療效不好。
[0003]阿司匹林治療反應(yīng)性的影響因素包括環(huán)境因素、依從性、藥物劑量、藥物間相互作 用及基因因素等?，F(xiàn)有的用于評(píng)估阿司匹林療效的方法主要包括:光比濁法檢測(cè)花生四烯 酸誘導(dǎo)的血小板聚集率，血清及尿中TXA2代謝產(chǎn)物水平檢測(cè)，VerifyNow檢測(cè)血小板聚集 率，PFA-100,血栓彈力圖等，但不同的檢測(cè)方法之間一致性較差，且對(duì)于阿司匹林對(duì)心血管 疾病患者臨床療效及臨床心血管事件風(fēng)險(xiǎn)的預(yù)測(cè)價(jià)值不足。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是如何預(yù)測(cè)阿司匹林對(duì)心血管疾病患者臨床療效。
[0005]為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明首先提供了下述B1)或B2)的用途：
[0006]B1)檢測(cè)miR-30c-5p表達(dá)量的系統(tǒng)在制備預(yù)測(cè)或輔助預(yù)測(cè)阿司匹林對(duì)心血管疾病 患者療效產(chǎn)品中的應(yīng)用；
[0007] B2)檢測(cè)miR-30c-5p表達(dá)量的系統(tǒng)在預(yù)測(cè)或輔助預(yù)測(cè)阿司匹林對(duì)心血管疾病患者 療效中的應(yīng)用。
[0008] 上述用途中，所述檢測(cè)miR-30c-5p表達(dá)量的系統(tǒng)可為利用定量PCR檢測(cè)miR-30c-5p表達(dá)量的系統(tǒng)。
[0009] 上述用途中，所述檢測(cè)miR-30c-5p表達(dá)量的系統(tǒng)可包括檢測(cè)miR-30c-5p表達(dá)量的 試劑和/或試劑盒和/或儀器，如通過(guò)定量PCR反應(yīng)檢測(cè)miR-30c-5p表達(dá)量所需的試劑、試劑 盒和儀器。具體來(lái)說(shuō)，檢測(cè)miR-30c-5p表達(dá)量的系統(tǒng)可為檢測(cè)miR-30c-5p表達(dá)量的引物和 進(jìn)行定量PCR反應(yīng)所需要的其它試劑和/或儀器，也可僅為檢測(cè)miR-30c-5p表達(dá)量的引物。 所述檢測(cè)miR-30c-5p表達(dá)量的引物可為核苷酸序列為序列1的引物。
[0010]所述檢測(cè)miR-30c-5p表達(dá)量的系統(tǒng)中，進(jìn)行定量PCR反應(yīng)所需要的其它試劑可為 北京全式金生物技術(shù)有限公司的貨號(hào)為AQ202-01的試劑盒中試劑（如TransScript Green miRNA Two-Step qRT-PCR SuperMix(TransScript Green miRNA Two-Step qRT-PCR SuperMix中含有可以與序列1所示單鏈DNA配對(duì)使用進(jìn)行PCR擴(kuò)增的單鏈DNA))和/或microRNA數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。所述microRNA數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)可用于計(jì)算將來(lái)自待預(yù)測(cè)阿司匹林治 療的心血管疾病患者的miR-30c-5p的表達(dá)量，根據(jù)所述miR-30c-5p的表達(dá)量預(yù)測(cè)阿司匹林 治療對(duì)所述待預(yù)測(cè)心血管疾病患者的療效。
[0011] 上述用途中，所述miR-30c-5p表達(dá)量為外周血中miR-30c-5p的表達(dá)量。
[0012] 上述用途中，所述miR-30c-5p表達(dá)量為miR-30c-5p相對(duì)于U6的相對(duì)表達(dá)量。
[0013]為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明還提供了以miR-30c-5p作為標(biāo)志物的預(yù)測(cè)或輔助預(yù) 測(cè)阿司匹林對(duì)心血管疾病患者療效的系統(tǒng)在制備預(yù)測(cè)或輔助預(yù)測(cè)阿司匹林對(duì)心血管疾病 患者療效產(chǎn)品中的應(yīng)用。
[0014]上述應(yīng)用中，所述預(yù)測(cè)或輔助預(yù)測(cè)阿司匹林對(duì)心血管疾病患者療效的系統(tǒng)可為所 述檢測(cè)miR-30c-5p表達(dá)量的系統(tǒng)。
[0015]為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明還提供了預(yù)測(cè)或輔助預(yù)測(cè)阿司匹林對(duì)心血管疾病患 者療效的產(chǎn)品。
[0016]本發(fā)明所提供的預(yù)測(cè)或輔助預(yù)測(cè)阿司匹林對(duì)心血管疾病患者療效的產(chǎn)品，為所述 檢測(cè)miR-30c-5p表達(dá)量的系統(tǒng)。
[0017]為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明還提供了預(yù)測(cè)阿司匹林對(duì)心血管疾病患者療效的方 法。
[0018]本發(fā)明所提供的預(yù)測(cè)阿司匹林對(duì)心血管疾病患者療效的方法，包括:檢測(cè)來(lái)自待 預(yù)測(cè)心血管疾病患者的miR-30c-5p表達(dá)量;如果所述心血管疾病患者的靜脈血中miR-30c-5p的表達(dá)量越高，所述心血管疾病患者為或候選為阿司匹林治療下血小板高反應(yīng)性(HAPR) 患者的風(fēng)險(xiǎn)越大，如果檢測(cè)對(duì)象的靜脈血中miR-30c-5p的表達(dá)量越低，所述心血管疾病患 者為或候選為阿司匹林治療下血小板高反應(yīng)性(HAPR)患者的風(fēng)險(xiǎn)越小。
[0019]上述方法可利用所述系統(tǒng)進(jìn)行。
[0020] 本發(fā)明中，所述心血管疾病患者可為具有以下至少一種心血管疾病危險(xiǎn)因素的患 者：患有穩(wěn)定性心絞痛、急性冠脈綜合征、經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療手術(shù)、冠狀動(dòng)脈搭橋手術(shù) 和缺血性腦血管。
[0021] 本發(fā)明中，當(dāng)以心血管高?；颊呷脒x標(biāo)準(zhǔn)的患者作為檢測(cè)對(duì)象時(shí)，如果檢測(cè)對(duì)象 的靜脈血中miR-30c-5p的相對(duì)于U6的相對(duì)表達(dá)量在范圍（-15.23~21.67)內(nèi)且為No-HAPR 心血管高危患者的3-5倍以上，該檢測(cè)對(duì)象為阿司匹林治療下血小板高反應(yīng)性(HAPR)患者， 如果檢測(cè)對(duì)象的靜脈血中miR-30c-5p的相對(duì)于U6的相對(duì)表達(dá)量不足No-HAPR心血管高?；?者的3-5倍，該檢測(cè)對(duì)象為非阿司匹林治療下血小板高反應(yīng)性(No-HAPR)患者。
[0022] 實(shí)驗(yàn)證明，以非血小板高反應(yīng)性（No-HAPR)患者為對(duì)照，對(duì)HPR組中患者的4個(gè) microRNA(miR-30c-5p、miR-16-2-3p、miR-98-5p和miR-3158-5p)進(jìn)行R0C曲線分析。miR-30c-5p的曲線下面積為0.720，靈敏度為54.84%，特異度為82.25%，miR-3158-5p曲線下面 積為0.726，靈敏度為83.87 %，特異度為51.52%，miR-30c-5p和miR-3158-5p的曲線下面積 在0.7-0.9之間，可用于對(duì)阿司匹林臨床療效的判定，這兩個(gè)microRNA對(duì)阿司匹林臨床療效 的診斷具有診斷價(jià)值。表明，檢測(cè)對(duì)象的靜脈血中miR-30c-5p的表達(dá)量可用于判斷心血管 疾病患者的阿司匹林臨床療效。
【附圖說(shuō)明】
[0023] 圖1為miR-30c-5p對(duì)阿司匹林臨床療效評(píng)價(jià)的ROC曲線、特異性和敏感度。圖中給 的斜向直線為參考線，具體表示：曲線下面積等于50%時(shí)，可以診斷一半的阿司匹林療效差 的患者。其中，Sens i t i v i ty表示敏感度，Specifici ty表示特異性。
[0024] 圖2為miR-3158-5p對(duì)阿司匹林臨床療效評(píng)價(jià)的ROC曲線、特異性和敏感度。圖中給 的斜向直線為參考線，具體表示：曲線下面積等于50%時(shí)，可以診斷一半的阿司匹林療效差 的患者。其中，Sens i t i v i ty表示敏感度，Specifici ty表示特異性。
【具體實(shí)施方式】
[0025] 下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的詳細(xì)描述，給出的實(shí)施例僅為了闡 明本發(fā)明，而不是為了限制本發(fā)明的范圍。
[0026]下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。
[0027]下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無(wú)特殊說(shuō)明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0028]下述實(shí)施例中的TransScript Green miRNA Two-Step qRT-PCR SuperMix為北京 全式金生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品。
[0029]實(shí)施例1、用于預(yù)測(cè)阿司匹林對(duì)心腦血管疾病患者的確定
[0030] 心血管高?；颊?50例，入選標(biāo)準(zhǔn)如下：年齡2 50歲；具有以下至少一種心血管疾 病危險(xiǎn)因素的患者：患有穩(wěn)定性心絞痛、急性冠脈綜合征(ACS)、經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療 (PCI)手術(shù)、冠狀動(dòng)脈搭橋(CABG)手術(shù)和缺血性腦血管。這350例心血管高?；颊邽樵诟鶕?jù) 排除標(biāo)準(zhǔn)排除一部分患者后得到的患者群體，排除標(biāo)準(zhǔn)為具有下述一種情況:血小板計(jì)數(shù) 小于100 X 109/L;血液系統(tǒng)疾病;應(yīng)用GP Ilb/IIla拮抗劑、華法林或非留體類抗炎藥;嚴(yán)重 肝腎功能不全;有阿司匹林使