一種防治柑橘黃龍病的微生物復(fù)合菌及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物防治領(lǐng)域，特別涉及一種防治柑橘黃龍病的微生物復(fù)合菌及其制備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]柑橘是世界產(chǎn)量最多的水果，在我國(guó)已經(jīng)有4000多年的栽培歷史。2009年我國(guó)柑橘栽培面積和產(chǎn)量均超過(guò)巴西、美國(guó)，位居世界首位，但在柑橘產(chǎn)業(yè)迅速發(fā)展的同時(shí)，黃龍病已成為柑橘生產(chǎn)上危害最為嚴(yán)重的毀滅性病害。早在18世紀(jì)中葉，印度就有相關(guān)報(bào)道。Reinking于19世紀(jì)20年代對(duì)我國(guó)華南地區(qū)進(jìn)行首次報(bào)道，半個(gè)多世紀(jì)以來(lái)，柑橘黃龍病嚴(yán)重制約了廣東、廣西、福建3省區(qū)柑橘產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。20世紀(jì)70年代末，四川省西昌地區(qū)和渡口市、江西贛州地區(qū)以及云南省得部分地區(qū)也先后發(fā)現(xiàn)柑橘黃龍病，到20世紀(jì)80年代中期，柑橘黃龍病已在我國(guó)廣東、廣西、福建、海南和臺(tái)灣的柑橘產(chǎn)區(qū)廣泛蔓延，并在浙江、貴州、湖南相繼發(fā)生，我國(guó)柑橘栽培的19個(gè)省、區(qū)已有11個(gè)遭受危害，受害面積占柑橘總栽培面積的80%以上，產(chǎn)量占總產(chǎn)量的85%左右。2004年巴西圣保羅州和2005年美國(guó)佛羅里達(dá)州黃龍病相繼發(fā)生，造成柑橘?gòu)臉I(yè)者的恐慌。迄今，黃龍病已廣泛分布于亞洲、非洲、大洋洲、南美洲和北美洲的40多個(gè)國(guó)家。
[0003]黃龍病主要危害柑橘的新梢、嫩葉、花及果實(shí)。初期在濃綠的樹冠中出現(xiàn)少數(shù)新梢黃化，俗稱“插金花”、“雞頭黃”。葉片出現(xiàn)均勻黃化、斑駁型黃化和缺素型黃化三種癥狀類型。斑駁黃化葉片和“紅鼻果”是最典性的癥狀，可以作為形態(tài)學(xué)鑒定該病害的主要依據(jù)。在田間病樹調(diào)查時(shí)，未結(jié)果的幼年樹以斑駁型黃化葉片為診斷依據(jù)，結(jié)果樹以“紅鼻果”作為診斷依據(jù)。
[0004]現(xiàn)有技術(shù)通常采用綜合防治的方法來(lái)控制該病害:一是嚴(yán)格植物檢疫，從苗木上把關(guān)；二是培育和推廣無(wú)病毒苗木;三是及時(shí)挖除病株，加強(qiáng)果園管理；四是通過(guò)物理和化學(xué)農(nóng)藥方式防治柑橘木虱，切斷傳染源。但這些方法“治標(biāo)不治本”，沒(méi)有從病原深處解決問(wèn)題，目前現(xiàn)有技術(shù)缺乏能有效地直接減少或消除病株中病原的可行方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

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[0005]有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種能有效地直接減少或消除柑橘黃龍病病株中病原的微生物復(fù)合菌及其制備方法和應(yīng)用。
[0006]為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案:
[0007]本發(fā)明提供了一種微生物復(fù)合菌，包括克里本類芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌，所述克里本類芽孢桿菌的生物保藏編號(hào)為CGMCC N0.7996，所述的微生物復(fù)合菌為微生物復(fù)合菌液或微生物復(fù)合菌劑。
[0008]優(yōu)選的，所述的微生物復(fù)合菌液中克里本類芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌的體積比為(20?60): (5?8);
[0009]優(yōu)選的，所述的微生物復(fù)合菌液中克里本類芽孢桿菌的活菌總數(shù)為50?100億/ml，枯草芽孢桿菌的活菌總數(shù)為50?100億/ml。
[0010]優(yōu)選的，所述的微生物復(fù)合菌劑中克里本類芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌的重量比為(5?80):(10?80)。
[0011]優(yōu)選的，所述的微生物復(fù)合菌劑中克里本類芽孢桿菌的活菌總數(shù)為50?200億/g，枯草芽孢桿菌的活菌總數(shù)為60?150億/g。
[0012]本發(fā)明還提供了一種微生物復(fù)合菌液的制備方法，包括以下步驟:
[0013]al)克里本類芽孢桿菌的發(fā)酵，所述的克里本類芽孢桿菌發(fā)酵條件為:液體培養(yǎng)基，溫度為29?30°C、培養(yǎng)時(shí)間為48?120小時(shí)，發(fā)酵72?96小時(shí)后每隔2?4小時(shí)檢測(cè)發(fā)酵液活菌總數(shù)，當(dāng)活菌總數(shù)達(dá)50?100億/ml停止發(fā)酵，得到克里本類芽孢桿菌發(fā)酵液；
[0014]a2)枯草芽孢桿菌的發(fā)酵，所述的枯草芽孢桿菌種子的發(fā)酵條件為:液體培養(yǎng)基，溫度為29?30°C、時(shí)間28?48小時(shí)，發(fā)酵28?32小時(shí)后每隔2?4小時(shí)檢測(cè)發(fā)酵液的活菌總數(shù)，當(dāng)活菌總數(shù)達(dá)50?100億/ml時(shí)停止發(fā)酵得到枯草芽孢桿菌發(fā)酵液；
[0015]a3)發(fā)酵液的混合，在無(wú)菌條件下，將上述兩種發(fā)酵液按體積比為(20?60): (50?80)的比例混合得到微生物復(fù)合菌液；
[0016]步驟al)與步驟a2)之間無(wú)時(shí)間順序限定。
[0017]本發(fā)明還提供了一種微生物復(fù)合菌劑的制備方法，包括以下步驟:
[0018]bl)克里本類芽孢桿菌的發(fā)酵，所述的克里本類芽孢桿菌發(fā)酵條件為:溫度為29?30°C、培養(yǎng)時(shí)間為48?120小時(shí)，發(fā)酵72?96小時(shí)后每隔2?4小時(shí)檢測(cè)發(fā)酵液活菌總數(shù)，當(dāng)活菌總數(shù)達(dá)50?100億/ml停止發(fā)酵，得到克里本類芽孢桿菌發(fā)酵液；
[0019]b2)枯草芽孢桿菌的發(fā)酵，所述的枯草芽孢桿菌種子的發(fā)酵條件為:溫度為29?30°C、培養(yǎng)時(shí)間28?48小時(shí)，發(fā)酵28?32小時(shí)后每隔2?4小時(shí)檢測(cè)發(fā)酵液的活菌總數(shù)，當(dāng)活菌總數(shù)達(dá)50?100億/ml時(shí)停止發(fā)酵得到枯草芽孢桿菌發(fā)酵液；
[0020]b3)發(fā)酵液的混合，在無(wú)菌條件下，將上述兩種發(fā)酵液按體積比為1:0.5?1.5的比例混合得到微生物復(fù)合菌液；
[0021 ] b4)微生物復(fù)合菌液的干燥，將步驟b3)中得到的微生物復(fù)合菌液干燥后得到微生物復(fù)合菌劑；
[0022]所述的步驟bl)和步驟b2)之間無(wú)時(shí)間順序限定。
[0023]優(yōu)選的，步驟b4)中所述的干燥為噴霧干燥，噴霧干燥的出口溫度為90?95°C，入口溫度為145?150°C，
[0024]優(yōu)選的，所述的噴霧干燥的入料速度1000?1500ml/h。
[0025]優(yōu)選的，步驟4)中所述的噴霧干燥需加入保護(hù)劑，所述保護(hù)劑為脫脂奶粉或蔗糖，保護(hù)劑的濃度為15?25%。
[0026]本發(fā)明還提供了所述的微生物復(fù)合菌在防治柑橘黃龍病方面的應(yīng)用，所述的微生物復(fù)合菌的應(yīng)用方法為根灌或噴霧;所述根灌具體為:每株樹使用0.5?lkg復(fù)合菌，澆在根部15-25公分處;所述噴霧具體為:每株樹使用復(fù)合菌0.5?lkg，兌水3?5kg后，噴霧葉片。
[0027]本發(fā)明的技術(shù)原理:克里本類芽孢桿菌在發(fā)酵過(guò)程中產(chǎn)生嘌呤類似物等抗菌物質(zhì)，在土壤中形優(yōu)勢(shì)菌群，抑制有害菌的生長(zhǎng);同時(shí)在生長(zhǎng)過(guò)程中產(chǎn)生大量的胞外多糖及小分子蛋白，能在果樹根尖定植并形成“生物膜”，并且在根部維管柱外的細(xì)胞內(nèi)空間積累，產(chǎn)生的“生物膜”能夠大大加速果樹吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的過(guò)程?？莶菅挎邨U菌通過(guò)營(yíng)養(yǎng)競(jìng)爭(zhēng)進(jìn)行生長(zhǎng)繁殖從而占據(jù)生存空間的方式來(lái)阻止植物病原菌的生長(zhǎng)，能在植物表面迅速形成一層高密保護(hù)膜，使病原菌得不到生存空間，從而保護(hù)作物免受病原菌危害。
[0028]本發(fā)明的有益效果:本發(fā)明所述的微生物復(fù)合菌可以有效地防治柑橘黃龍病，通過(guò)抑制柑橘病株根部和葉部的革蘭氏陰性細(xì)菌的生殖繁衍，達(dá)到“以菌治菌”，殺滅有害菌的目的，使用本發(fā)明所述的微生物復(fù)合菌可使柑橘樹黃葉轉(zhuǎn)綠，黃化癥狀消失，試驗(yàn)組的柑橘黃龍病發(fā)病率明顯低于常規(guī)處理，由常規(guī)處理75.1 %的發(fā)病率降低至35.6%?67.5%，與常規(guī)處理相比發(fā)病率最高降低了 52%，具有顯著的防治黃龍病的效果，試驗(yàn)組的產(chǎn)量較常規(guī)處理最高增加90公斤/畝，增產(chǎn)率高達(dá)30%，具有顯著的增產(chǎn)效果。
【附圖說(shuō)明】
[0029]圖1為本發(fā)明實(shí)施例3得到的樹木發(fā)病率的防治效果柱狀圖；
[0030]圖2為本發(fā)明實(shí)施例3得到的樹木產(chǎn)量統(tǒng)計(jì)柱狀圖。
【具體實(shí)施方式】
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[0031]本發(fā)明提供了一種微生物復(fù)合菌，包括克里本類芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌，所述克里本類芽孢桿菌的生物保藏編號(hào)為CGMCC N0.7996。
[0032]本發(fā)明提供的微生物復(fù)合菌包括枯草芽孢桿菌，本發(fā)明對(duì)所述枯草芽孢桿菌的來(lái)源沒(méi)有特殊限定，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的枯草芽孢桿菌普通市售商品即可。
[0033]在本發(fā)明中，所述的微生物復(fù)合菌優(yōu)選為微生物復(fù)合菌液。當(dāng)本發(fā)明提供的為微生物復(fù)合菌液時(shí)，所述的微生物復(fù)合菌液中克里本類芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌的體積比優(yōu)選為(20?60): (50?80)，更優(yōu)選的為(30?50) ； (55?75)，最優(yōu)選為(35?45): (60?70)。所述的微生物復(fù)合菌液中克里本類芽孢桿菌的活菌總數(shù)優(yōu)選為50?100億/ml，更優(yōu)選的為80?100億/ml，最優(yōu)選為85?95億/ml;所述的微生物復(fù)合菌液中枯草芽孢桿菌的活菌總數(shù)優(yōu)選為50?100億/ml，更優(yōu)選的為70?95億/ml，最優(yōu)選為80?90億/ml。
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