一種藏紅花懸浮細胞系建立方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于植物細胞培養(yǎng)技術領域，特別涉及一種藏紅花懸浮細胞系建立方法。
【背景技術】
[0002] 藏紅花是一種名貴的中草藥，被譽為"植物黃金"，但藏紅花主要是柱頭入藥，田間 栽培過程容易感染植物病毒，且產(chǎn)量低，通過植物細胞培養(yǎng)體系生產(chǎn)藏紅花素等是解決藏 紅花資源短缺的有效途徑之一。
[0003] 然而隨著需求量的不斷增加，現(xiàn)有的藏紅花懸浮細胞體系的藏紅花素產(chǎn)量已經(jīng)越 來越不能滿足需求。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 基于現(xiàn)有技術存在上述問題，本發(fā)明提供一種藏紅花懸浮細胞系建立方法，該方 法通過選擇愈傷組織的種齡、調(diào)整愈傷組織的接種密度和在培養(yǎng)基中添加藏紅花素誘導物 質(zhì)等提高藏紅花細胞活性，使其具有藏紅花素產(chǎn)量高的優(yōu)點。
[0005] -種藏紅花懸浮細胞系建立方法，其包括以下步驟： 步驟S10,以MS液體培養(yǎng)基為基礎培養(yǎng)基添加水楊酸作為誘導因子，配制成藏紅花懸浮 細胞培養(yǎng)基； 步驟S20，選取生長健康、正常的藏紅花愈傷組織接種到步驟S10配制的培養(yǎng)基中； 步驟S30,將步驟S20接種完畢的藏紅花愈傷組織放置于150r/min的搖床上進行培養(yǎng)。
[0006] 步驟S20中的藏紅花愈傷組織為種齡是15-20日的愈傷組織。
[0007] 步驟S20的接種量為每100ml培養(yǎng)基接種5-10g藏紅花愈傷組織。
[0008] 步驟S30的培養(yǎng)環(huán)境是21-23°c，光照強度為1900-21001UX。
[0009] -種上述藏紅花懸浮細胞系建立方法使用的培養(yǎng)基，其以MS培養(yǎng)基為基礎培養(yǎng) 基，并添加2，4-D( 2，4一二氯苯氧乙酸）、6-BA( 6-芐氨基嘌呤）、水楊酸、蔗糖。
[0010] 2,4-D(2,4 -二氯苯氧乙酸）的濃度為2-5mg/L、6-BA(6-芐氨基嘌呤）的濃度為1-3 mg/L、水楊酸的濃度為5-10mg/L、鹿糖的濃度為10-30 g/L。
[0011] 2,4-0(2,4一二氯苯氧乙酸）的濃度為3-411^/1、6-84(6-芐氨基嘌呤）的濃度為 1.5-2.5 mg/L、水楊酸的濃度為6-8mg/L、鹿糖的濃度為15-25 g/L。
[0012] 本發(fā)明的有益效果是:選擇15-20日種齡的愈傷組織，此時的愈傷組織細胞生長基 本結束，細胞正處于成熟時期，可以大量合成細胞次生代謝物;接種密度為每l〇〇ml培養(yǎng)基 接種5-10g愈傷組織既不會浪費培養(yǎng)基，也可以為細胞提供充足的營養(yǎng)物質(zhì);在培養(yǎng)基中添 加了水楊酸，水楊酸是植物細胞次生代謝物的誘導子，可以誘導細胞大量合成藏紅花素。
【具體實施方式】
[0013] 下面結合具體實施例對本發(fā)明作進一步的描述。
[0014] 實施例一:配制藏紅花懸浮細胞系建立方法使用的培養(yǎng)基。
[0015]根據(jù)表1所示的MS培養(yǎng)基成分和用量以及表2所示的藏紅花懸浮細胞系建立方法 使用的培養(yǎng)基成分和用量，配制本發(fā)明所述的藏紅花懸浮細胞系建立方法使用的培養(yǎng)基。 [0016]用天平稱取MS培養(yǎng)基中的各成分以及2,4-D(2,4 -二氯苯氧乙酸）、6-BA(6-節(jié)氨 基嘌呤）、水楊酸、蔗糖，置于三角瓶中，加入適量蒸餾水，攪拌溶解，并用HCL和Κ0Η調(diào)節(jié)pH值 至6.0,定容至1000mL。將三角瓶封口，置于高壓滅菌鍋中，于121°C滅菌20min，然后置于超 凈工作臺中自然冷卻，備用。
[0017] 將冷卻到50-60°C時的培養(yǎng)基分裝至組織培養(yǎng)瓶中，晾涼，將組織培養(yǎng)瓶封口，備 用。
[0018] 表1 MS培養(yǎng)基的成分和用量。
[0019] 表2藏紅花懸浮細胞系建立方法使用的培養(yǎng)基成分和用量
實施例二:建立藏紅花懸浮細胞系。
[0020]按實施例一所述的方法配制藏紅花懸浮細胞系建立方法使用的培養(yǎng)基，備用。
[0021 ]在超凈工作臺中，從種齡為15-20日的藏紅花愈傷組織誘導培養(yǎng)基中選取生長健 康、正常、蓬松的愈傷組織接種到上述配制好的藏紅花懸浮細胞系建立方法使用的培養(yǎng)基 中，每100ml培養(yǎng)基接種5-6g愈傷組織，接種完畢后將組織培養(yǎng)瓶封口。
[0022] 將封口后的藏紅花組織培養(yǎng)瓶放置于150r/min的搖床上進行培養(yǎng)，并調(diào)節(jié)培養(yǎng)環(huán) 境為，溫度:22°C，光照強度:2000 lux，培養(yǎng)30日。
[0023] 隨著培養(yǎng)的時間越長，培養(yǎng)基中懸浮的藏紅花細胞越多，培養(yǎng)基逐漸變得渾濁，到 第15日時藏紅花懸浮細胞系建立完成，到第20-30日可取出藏紅花懸浮細胞進行藏紅花素 的提取，收集藏紅花素。
[0024] 取培養(yǎng)到25日的藏紅花懸浮細胞提取藏紅花素，經(jīng)檢測藏紅花素的含量達到 1.25g/L，比常規(guī)的藏紅花懸浮細胞系中的細胞藏紅花素素含量高0.26g/L。
【主權項】
1. 一種藏紅花懸浮細胞系建立方法，其特征在于，其包括以下步驟： 步驟S10,以MS液體培養(yǎng)基為基礎培養(yǎng)基添加水楊酸作為誘導因子，配制成藏紅花懸浮 細胞培養(yǎng)基； 步驟S20，選取生長健康、正常的藏紅花愈傷組織接種到步驟S10配制的培養(yǎng)基中； 步驟S30,將步驟S20接種完畢的藏紅花愈傷組織放置于150r/min的搖床上進行培養(yǎng)。2. 根據(jù)權利要求1所述的一種藏紅花懸浮細胞系建立方法，其特征在于，步驟S20中的 藏紅花愈傷組織為種齡是15-20日的愈傷組織。3. 根據(jù)權利要求1所述的一種藏紅花懸浮細胞系建立方法，其特征在于，步驟S20的接 種量為每100ml培養(yǎng)基接種5-10g藏紅花愈傷組織。4. 根據(jù)權利要求1所述的一種藏紅花懸浮細胞系建立方法，其特征在于，步驟S30的培 養(yǎng)環(huán)境是21_23°C，光照強度為1900-21001ux。5. -種上述藏紅花懸浮細胞系建立方法使用的培養(yǎng)基，其特征在于，其以MS培養(yǎng)基為 基礎培養(yǎng)基，并添加2，4-D( 2，4一二氯苯氧乙酸）、6-BA( 6-芐氨基嘌呤）、水楊酸、蔗糖。6. 根據(jù)權利要求5所述的一種上述藏紅花懸浮細胞系建立方法使用的培養(yǎng)基，其特征 在于，2,4-D(2,4 一二氯苯氧乙酸）的濃度為2-5mg/L、6-BA(6-芐氨基嘌呤）的濃度為1-3 mg/L、水楊酸的濃度為5-10mg/L、鹿糖的濃度為10-30g/L。7. 根據(jù)權利要求6所述的一種上述藏紅花懸浮細胞系建立方法使用的培養(yǎng)基，其特征 在于，2,4-D(2,4 一二氯苯氧乙酸）的濃度為3-4mg/L、6-BA(6-芐氨基嘌呤）的濃度為1.5- 2.5mg/L、水楊酸的濃度為6-8mg/L、鹿糖的濃度為15-25g/L。
【專利摘要】本發(fā)明提供一種藏紅花懸浮細胞系建立方法，屬于植物細胞培養(yǎng)技術領域，該方法通過選擇愈傷組織的種齡、調(diào)整愈傷組織的接種密度和在培養(yǎng)基中添加藏紅花素誘導物質(zhì)等提高藏紅花細胞活性，使其具有藏紅花素產(chǎn)量高的優(yōu)點。
【IPC分類】C12N5/04
【公開號】CN105483074
【申請?zhí)枴緾N201610010905
【發(fā)明人】何志鏗
【申請人】佛山市金藍領教育科技有限公司
【公開日】2016年4月13日
【申請日】2016年1月9日