一種產(chǎn)抗生素的鏈霉菌txaf2及其應用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬農(nóng)業(yè)技術(shù)及生物醫(yī)學領(lǐng)域，具體設(shè)及一種產(chǎn)新型抗生素的鏈霉菌TXAF2 及應用。
【背景技術(shù)】
[0002] 我國境內(nèi)由于有多樣的地理環(huán)境氣候，為豐富的微生物資源提供了基礎(chǔ)。故在各 種不同締度、海拔W及氣候的地域均可能蘊藏著新的微生物菌種。一般地，通過菌株的形態(tài) 特征、培養(yǎng)特征W及生理生化特征等可W對微生物菌種進行分類鑒別，同時采用檢測微生 物菌種的16srDNA的序列可W初步確定該菌種的分類地位。
[0003] 對在全國各地采集來的微生物菌種進行培養(yǎng)，在得到的代謝產(chǎn)物中尋找各種活性 成分，進而研究開發(fā)成各種藥物(包括醫(yī)藥、農(nóng)藥、獸藥等），運種技術(shù)正在被廣泛應用，如用 作醫(yī)用抗生素的青霉素、鏈霉素等，在農(nóng)用、獸用方面具有防止水稻紋枯病的井岡霉素、防 治多種蛾蟲和夜蛾的阿維菌素等。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種產(chǎn)抗生素的鏈霉菌TXAF2。
[000引本發(fā)明的又一個目的在于提供所述產(chǎn)抗生素的鏈霉菌TXAF2的應用。
[0006] 本發(fā)明中，"產(chǎn)抗生素的鏈霉菌TXAF2"是指產(chǎn)廣譜抗生素的鏈霉菌TXAF2。其中， "廣譜抗生素"是指可W抑制或者殺死包括多種微生物如枯草芽抱桿菌、大腸桿菌、鏈球菌、 霉菌或原生動物，支原體，衣原體等生命體的一種或多種物質(zhì)。
[0007] 本發(fā)明提出的一種產(chǎn)新型抗生素的鏈霉菌TXAF2屬鏈霉菌屬（S化eptomyces)，并 已于2014年12月23日在中國普通微生物保藏中屯、保藏，保藏號為CGMCC No. 10235。
[000引本發(fā)明產(chǎn)抗生素的鏈霉菌TXAF2，為發(fā)明人2014年7月3日從我國浙江桐鄉(xiāng)稻田水 渠邊采集的±壤中分離而得。該菌株形態(tài)特征、培養(yǎng)特征、生理生化特征及16srDNA的序列 和菌種分類結(jié)果如下：
[0009] 1、形態(tài)特征：W插片法在高氏一號瓊脂上培養(yǎng)7天后用光學顯微鏡和電子顯微鏡 分別觀察菌絲和抱子的形態(tài)，結(jié)果表明，該菌基內(nèi)菌絲體無橫隔、不斷裂，氣生菌絲體分支 細長，生長茂密，抱子絲長，頂端有2-6圈螺旋，抱子楠圓形?；鶅?nèi)菌絲短且密集。
[0010] 2、生理生化特征及碳源利用見表1:
[0011] 表1、TXAF2菌株的生理生化特征及碳源利用
[0012]
[0013]
[0014] 3、本發(fā)明所述的鏈霉菌TXAF2菌株的16srDNA序列如SEQ ID N0:1所示。
[001引根據(jù)形態(tài)、生理生化特征w及l(fā)esrDNA序列分析，該菌株屬于鏈霉菌屬 (Sheptomyces)。從序列比對上來看，該產(chǎn)新型抗生素的鏈霉菌TXAF2 (Streptomyces sp.) 〔61\1〔〔齡.10235，與5化691:01117。63 31111'；[13日'6]1313 8化日;[]124對比，從163抽魁序列上來 看，存在兩處的不同，故為親緣關(guān)系較近的兩個不同的種。
[0016] 本發(fā)明所述的產(chǎn)新型抗生素的鏈霉菌TXAF2,其培養(yǎng)方法為:在pH = 7.8,30°C下， 20化mp搖床培養(yǎng)48小時；培養(yǎng)基的組成為(wt%):葡萄糖1 %，薦糖1 %，淀粉1 %，酵母膏 〇.5%，魚粉蛋白腺1.5%，（畑4)25〇4〇.6%，&冊〇4 1%，]\%5〇4*7出0 0.75%，胞(：11%。
[0017] 對培養(yǎng)基中的營養(yǎng)源無特殊要求，需要微生物生長必需的碳源、氮源W及其他營 養(yǎng)源。
[0018] 對溫度、pH、時間等培養(yǎng)條件沒有嚴格的限制，但化C1濃度大于或等于2%時，該菌 無法生長。為了產(chǎn)率最大化，選擇菌株生長旺盛且產(chǎn)抗生素活性較高的條件為宜，如培養(yǎng)基 的抑范圍可為5-9，W接近中性為好;培養(yǎng)基溫度在20-35°C，培養(yǎng)時間在3-6天，化C1濃度控 制在2% W內(nèi)。進一步地，運些條件還可能與菌株當時生長狀況有關(guān)，故為了得到最好的培 養(yǎng)效果，均應根據(jù)實際情況進行調(diào)整。
[0019] 本發(fā)明提出了所述產(chǎn)抗生素的鏈霉菌TXAF2的應用。進一步提出了該鏈霉菌TXAF2 的制備藥物或農(nóng)藥中的應用。所述藥物包括人用藥物。即，所述鏈霉菌TXAF2的抗生素提取 物可作為藥物或農(nóng)藥使用。
[0020] 所述鏈霉菌TXAF2的抗生素提取物作為藥物使用時，所述藥物的給藥劑量最低為 10ng/kg，W動物的重量計，給藥方式為注射;所述鏈霉菌TXAF2的抗生素提取物作為農(nóng)藥使 用時，所述農(nóng)藥的給藥濃度最低為lOng/L，每畝作物每次均勻噴灑5-10化，2天噴灑一次，噴 灑15次。
[0021] 優(yōu)選地，所述鏈霉菌TXAF2的抗生素提取物作為藥物使用時，所述藥物的給藥劑量 為50ng/kg，W動物的重量計，給藥方式為注射;所述鏈霉菌TXAF2的抗生素提取物作為農(nóng)藥 使用時，所述農(nóng)藥的給藥濃度為50ng/L，每畝作物每次均勻噴灑5-10化，2天噴灑一次，噴灑 15次。
[0022] 本發(fā)明所述的產(chǎn)新型抗生素的鏈霉菌TXAF2經(jīng)過發(fā)酵，得到的產(chǎn)物可用于抗假單 胞桿菌屬(Pseudomonas)、黃單胞菌屬(Xanthomonas)、歐文氏菌屬化rwinia)等多種影響農(nóng) 業(yè)植物正常生長的病菌，同時對大腸桿菌、枯草桿菌、黑曲霉、酵母菌、具有卡那霉素抗性的 大腸桿菌、具有氨節(jié)霉素抗性的大腸桿菌、枯草芽抱桿菌、多抗性枯草芽抱桿菌（包括 WB980-G4/IA474枯草芽抱桿菌、PHT43-PG/WB800枯草芽抱桿菌）、金黃色葡萄球菌、假單胞 桿菌屬、黃單胞菌屬、歐文氏菌屬的菌等細菌有好的抗菌作用。該菌的發(fā)酵產(chǎn)物或發(fā)酵產(chǎn)物 的純化分離物出了可W抑制、殺死上述微生物W外，可W用于殺傷或抑制支原體、衣原體、 原生動物W及人、畜寄生蟲。
[0023] 本發(fā)明中，所述鏈霉菌TXAF2用作農(nóng)藥，例如，殺菌劑、抑菌劑。所述鏈霉菌TXAF2用 作人用藥物，例如，皮膚外用藥等。
[0024] 本發(fā)明中，所述鏈霉菌TXAF2的發(fā)酵產(chǎn)物可使用溶媒萃取法進行提純。
[0025] 本發(fā)明中，所述產(chǎn)廣譜抗生素的鏈霉菌TXAF2通過發(fā)酵產(chǎn)抗生素。
[0026] 本發(fā)明中，對于大部分微生物來說，給藥用量為4ng/L(體外實驗)或4ng/kg(動物 實驗)及W上可抑制微生物生長或殺滅大部分微生物;更優(yōu)地，當用量達lOng/L(體外實驗） 或lOng/kg(動物實驗)及W上可W達到顯著抑菌的效果;其中，"體外實驗"是指所述鏈霉菌 TXAF2所產(chǎn)抗生素作為農(nóng)藥使用的實驗。
[0027] 本發(fā)明中，給藥方式可W注射、噴灑、涂抹、涂敷、顆粒等常用各種方式。
[0028] 本發(fā)明中，所述鏈霉菌TXAF2通過發(fā)酵培養(yǎng)的條件為:在抑6-8,150-220rmp搖床培 養(yǎng)36-48小時;培養(yǎng)基包括W下組成wt%:葡萄糖1%，薦糖1%，淀粉1%，酵母膏0.5%，魚粉 蛋白腺 1.5%，（NH4)2S04 0.6%，K2HP04 l%，MgS〇4.7出0 0.75%，NaCl 1%。
[0029] 本發(fā)明還提出了一種用于培養(yǎng)所述鏈霉菌TXAF2的培養(yǎng)基，其包括W下組成wt%: 葡萄糖1 %，薦糖1 %，淀粉1 %，酵母膏0.5%，魚粉蛋白腺1.5%，（NH4)2S04 0.6%，K2HP04 l%，MgS〇4*7 出0 0.75%，NaCl 1%。
[0030] 本發(fā)明還提出了一種抑菌殺菌劑，其含有所述鏈霉菌TXAF2產(chǎn)生的抗生素。其中， 所述抗生素通過發(fā)酵產(chǎn)生的。所述鏈霉菌TXAF2發(fā)酵后經(jīng)過濾或離屯、去除菌體，添加賦形 劑，冷凍干燥或者噴霧干燥，獲得初步分離的有效成分，包括抑菌殺菌活性成分。該有效成 分包括抗生素可W直接使用或進一步純化。
[0031] 進一步地，有效成分抑菌、殺菌活性物質(zhì)可采用溶媒萃取法進行精細提純。W乙酸 下醋作為萃取劑，W萃取柱為萃取設(shè)備，采用逆流萃取的方式，進行溶媒萃取，用多級錯流 法反萃取后進行結(jié)晶，獲得抗生素產(chǎn)品。該產(chǎn)品可W直接應用或者進一步純化。
[0032] 進一步地，上述初步純化或萃取純化獲得的產(chǎn)品，包括抑菌殺菌劑等，可W用層析 住、離子交換樹脂、分子篩層析等方法進一步純化分離，獲得具有不同有效組分的具有抑菌 活性的物質(zhì)。
[0033] 本發(fā)明還提出了上述抑菌殺菌劑在作為藥物或作為農(nóng)藥中的應用。在一具體實施 方案中，鏈霉菌TXAF2(Streptomyces SP. )CGMCC No. 10235所產(chǎn)的抗生素可用作藥物，治療 多種病原菌(例如，金黃色葡萄球菌）導致的外傷感染。在一具體實施方案中，鏈霉菌TXAF2 (5化69扣1117。68 39.)〔61〇：齡.10235所產(chǎn)的抗生素可用作農(nóng)藥，緩解多種農(nóng)作物病菌（例 如，假單胞桿菌、歐文氏菌、黃單胞菌感染）引起的病害。
[0034] 本發(fā)明中，所述抑菌殺菌劑(含有所述鏈霉菌TXAF2產(chǎn)生的發(fā)酵產(chǎn)物)分別對酵母 菌、黑曲霉、大腸桿菌、氨節(jié)霉素抗性的大腸桿菌、枯草桿菌、多種抗性枯草芽抱桿菌、枯草 芽抱桿菌、金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、破傷風桿菌、軍團桿菌、白喉桿菌、沙口氏菌、假單 胞桿菌屬(Pseudomonas)、歐文氏菌屬化rwinia)、黃單胞菌屬(Xanthomonas)具有抑菌殺菌 作用。
【附圖說明】
[0035] 圖1為產(chǎn)新型抗生素的鏈霉菌了乂4。2(5化69扣1117。68 89.)〔61〇：齡.10235的菌株 典型菌絲體生長形態(tài)光學顯微鏡照片。
[0036] 圖2為產(chǎn)新型抗生素的鏈霉菌TXAF2所產(chǎn)抗生素對細菌的抑菌圈實驗圖。
[0037] 圖3為本發(fā)明菌株TXAF216srDNA[gb|KP113542.11 ]數(shù)據(jù)在NCBI數(shù)據(jù)庫中比較后形 成的16s rDNA系統(tǒng)發(fā)育樹示意圖。
[003引圖4本發(fā)明菌株TXAF216srDNA序列與最接近本發(fā)明的菌株Streptomyces