發(fā)酵類中藥優(yōu)勢菌群選擇性培養(yǎng)基及其制備方法和發(fā)酵類中藥優(yōu)勢菌的篩選方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種優(yōu)勢菌群選擇性培養(yǎng)基及其制備方法和優(yōu)勢菌的篩選方法。
【背景技術(shù)】
[0002]發(fā)酵類中藥是利用傳統(tǒng)的中藥炮制學(xué)發(fā)酵法在自然條件利用環(huán)境中的微生物發(fā)酵中藥或豆類、面粉等而成，為多菌種混合自然發(fā)酵，用以達(dá)到提高藥效、消除毒副作用、改變藥性的目的。
[0003]傳統(tǒng)的中藥發(fā)酵采用天然微生物多菌種混合發(fā)酵，菌種不純，代謝理論、藥效成分理念模糊不清，生產(chǎn)可控性差;加之不同地域、不同生產(chǎn)環(huán)境、不同原料、不同生產(chǎn)季節(jié)的微生物有差異，從而導(dǎo)致發(fā)酵中藥的產(chǎn)品質(zhì)量波動性大、不穩(wěn)定。
[0004]為了獲得固定發(fā)酵菌群，以提高和保障發(fā)酵類中藥的生產(chǎn)質(zhì)量，目前已選用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基、麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基分離培養(yǎng)發(fā)酵中藥中的微生物菌群，這三種培養(yǎng)基分別適用于細(xì)菌、霉菌和酵母菌的培養(yǎng)，只能單獨的培養(yǎng)分離不同種類的菌群；而對于多菌種混合自然發(fā)酵的中藥不能單獨采用一種培養(yǎng)基而獲得全部優(yōu)勢菌群，需多種培養(yǎng)基分離不同菌群，不僅費時費力，優(yōu)勢菌種分離效果也不理想。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明是為了解決傳統(tǒng)的中藥發(fā)酵產(chǎn)品質(zhì)量波動性大、不穩(wěn)定，以及目前分離獲得的發(fā)酵中藥中的微生物種類、菌種的數(shù)量差異性較大;且還需多次分離純化、費時費力，菌種篩選效果也不理想的問題，而提供的一種發(fā)酵類中藥優(yōu)勢菌群選擇性培養(yǎng)基及其制備方法和發(fā)酵類中藥優(yōu)勢菌的篩選方法。
[0006]本發(fā)明發(fā)酵類中藥優(yōu)勢菌群選擇性培養(yǎng)基包括中藥煎煮濃縮液、葡萄糖和瓊脂。
[0007]上述發(fā)酵類中藥優(yōu)勢菌群選擇性培養(yǎng)基按以下步驟制備:將葡萄糖和瓊脂加入中藥煎煮濃縮液中搖勻，再滅菌，即得到發(fā)酵類中藥優(yōu)勢菌群選擇性培養(yǎng)基。
[0008]用上述發(fā)酵類中藥優(yōu)勢菌群選擇性培養(yǎng)基篩選發(fā)酵類中藥優(yōu)勢菌的方法按以下步驟進(jìn)行:
[0009]一、將發(fā)酵類中藥優(yōu)勢菌群選擇性培養(yǎng)基鋪平板，然后自然冷卻凝固；
[0010]二、將發(fā)酵類中藥在無菌條件下用濃度為0.9%的無菌生理鹽水研磨，然后再稀釋涂于步驟一發(fā)酵類中藥優(yōu)勢菌群選擇性培養(yǎng)基上，置于20°C?40°C培養(yǎng)2?7天，即得到該發(fā)酵類中藥優(yōu)勢菌群。
[0011]本發(fā)明發(fā)酵類中藥優(yōu)勢菌群選擇性培養(yǎng)基具有針對性強，可完全滿足發(fā)酵中藥中所有優(yōu)勢菌群的生長繁殖需要，不會造成發(fā)酵優(yōu)勢菌群的缺失;而且本發(fā)明培養(yǎng)基的選擇性好，優(yōu)勢菌群可在發(fā)酵過程中生長旺盛，中藥煎煮濃縮液可有效抑制雜菌的生長，從而避免雜菌的干擾和影響。
[0012]采用本發(fā)明發(fā)酵類中藥優(yōu)勢菌群選擇性培養(yǎng)基對發(fā)酵類中藥的優(yōu)勢菌群進(jìn)行篩選具有快速、準(zhǔn)確的優(yōu)點，特別適合含有多種未知微生物的發(fā)酵中藥的優(yōu)勢菌種篩選。
[0013]按本發(fā)明方法選取的發(fā)酵類中藥的優(yōu)勢菌群的菌種結(jié)構(gòu)合理、比例適當(dāng)，可直接用于產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)，具有發(fā)酵速度快、周期短、質(zhì)量穩(wěn)定等優(yōu)勢。
【具體實施方式】
[0014]本發(fā)明技術(shù)方案不局限于以下所列舉【具體實施方式】，還包括各【具體實施方式】間的任意組合。
[0015]【具體實施方式】一:本實施方式發(fā)酵類中藥優(yōu)勢菌群選擇性培養(yǎng)基包括中藥煎煮濃縮液、葡萄糖和瓊脂。
[0016]六神曲、淡豆豉為傳統(tǒng)中藥中典型的發(fā)酵類中藥。本實施方式發(fā)酵類中藥優(yōu)勢菌群選擇性培養(yǎng)基可適用于不同發(fā)酵類中藥。
[0017]【具體實施方式】二:本實施方式與【具體實施方式】一的不同點是:每升發(fā)酵類中藥優(yōu)勢菌群選擇性培養(yǎng)基中含葡萄糖10?30g、瓊脂15?25g。其它步驟及參數(shù)與實施方式一相同。
[0018]【具體實施方式】三:本實施方式與【具體實施方式】一的不同點是:淡豆豉優(yōu)勢菌群選擇性培養(yǎng)基由桑葉和青蒿的水煎煮濃縮液1000ml、大豆粉30?50g、葡萄糖10?30g和瓊脂15?25g組成;桑葉和青蒿的水煎煮濃縮液由70?10g的桑葉和70?10g的青蒿煎煮而成。其它步驟及參數(shù)與實施方式一相同。
[0019]【具體實施方式】四:本實施方式與【具體實施方式】一的不同點是:六神曲優(yōu)勢菌群選擇性培養(yǎng)基由辣寥、青蒿和蒼耳草的水煎煮濃縮液1000ml、苦杏仁粉15?25g、赤小豆粉15?25g、葡萄糖10?30g和瓊脂15?25g組成；辣寥、青蒿和蒼耳草的水煎煮濃縮液由50?10g的辣寥、50?10g青蒿和50?10g的蒼耳草煎煮而成。其它步驟及參數(shù)與實施方式一相同。
[0020]【具體實施方式】五:本實施方式發(fā)酵類中藥優(yōu)勢菌群選擇性培養(yǎng)基按以下步驟制備:
[0021]將葡萄糖和瓊脂加入中藥煎煮濃縮液中搖勻，再滅菌，即得到發(fā)酵類中藥優(yōu)勢菌群選擇性培養(yǎng)基。
[0022]【具體實施方式】六:本實施方式與【具體實施方式】五的不同點是:六神曲優(yōu)勢菌群選擇性培養(yǎng)基制備方法:
[0023]將苦杏仁粉15?25g、赤小豆粉15?25g、葡萄糖10?30g和瓊脂15?25g加入由辣寥、青蒿和蒼耳草的水煎煮濃縮液100ml中搖勻，再121°C、高壓蒸汽滅菌15?20min，即得到發(fā)酵類中藥優(yōu)勢菌群選擇性培養(yǎng)基;辣寥、青蒿和蒼耳草的水煎煮濃縮液由50?10g的辣寥、50?10g青蒿和50?10g的蒼耳草煎煮而成。其它步驟及參數(shù)與實施方式五相同。
[0024]【具體實施方式】七:本實施方式與【具體實施方式】五的不同點是:淡豆豉優(yōu)勢菌群選擇性培養(yǎng)基制備方法:
[0025]將大豆粉30?50g、葡萄糖10?30g和瓊脂15?25g加入由桑葉和青蒿的水煎煮濃縮液100ml中搖勻，再121°C、高壓蒸汽滅菌15?20min，即得到發(fā)酵類中藥優(yōu)勢菌群選擇性培養(yǎng)基;桑葉和青蒿的水煎煮濃縮液由70?10g的桑葉和70?10g的青蒿煎煮而成。其它步驟及參數(shù)與實施方式五相同。
[0026]【具體實施方式】八:本實施方式按以下步驟選取發(fā)酵類中藥優(yōu)勢菌群:
[0027]—、將發(fā)酵類中藥優(yōu)勢菌群選擇性培養(yǎng)基鋪平板，然后自然冷卻凝固；
[0028]二、將發(fā)酵類中藥在無菌條件下用濃度為0.9%的無菌生理鹽水研磨，然后再稀釋涂于步驟一發(fā)酵類中藥優(yōu)勢菌群選擇性培養(yǎng)基上，置于20°C?40°C培養(yǎng)2?7天，即得到該發(fā)酵類中藥優(yōu)勢菌群。
[0029]本實施方式中步驟一中每個培養(yǎng)皿中倒入發(fā)酵類中藥優(yōu)勢菌群選擇性培養(yǎng)基15?20ml。步驟二發(fā)酵類中藥優(yōu)勢菌群選擇性培養(yǎng)基上涂覆發(fā)酵類中藥研磨稀釋液50?200μ
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[0030]實施例1
[0031]淡豆豉優(yōu)勢菌群選擇性培養(yǎng)基制備方法:將大豆粉30g、葡萄糖20g和瓊脂20g加入由桑葉和青蒿的水煎煮濃縮液100ml中搖勻，再121°C、高壓蒸汽滅菌15?20min，即得到發(fā)酵類中藥優(yōu)勢菌群選擇性培養(yǎng)基;桑葉和青蒿的水煎煮濃縮液由70g的桑葉和10g的青蒿煎煮而成。
[0032]篩選發(fā)酵類中藥優(yōu)勢菌群:
[0033]—、將淡豆豉優(yōu)勢菌群選擇性培養(yǎng)基鋪平板，然后自然冷卻凝固；
[0034]二、將淡豆豉在無菌條件下用濃度為0.9%的無菌生理鹽水研磨，然后再稀釋涂于步驟一淡豆豉優(yōu)勢菌群選擇性培養(yǎng)基上，置于25°C?30°C培養(yǎng)5天，即得到淡豆豉優(yōu)勢菌群；
[0035]步驟一中每個培養(yǎng)皿中倒入淡豆豉優(yōu)勢菌群選擇性培養(yǎng)基15?20ml。
[0036]步驟二淡豆豉優(yōu)勢菌群選擇性培養(yǎng)基上涂覆淡豆豉研磨稀釋液ΙΟΟμΙ。
[0037]實施例2
[0038]六神曲優(yōu)勢菌群選擇性培養(yǎng)基制備方法:將苦杏仁粉15g、赤小豆粉15g、葡萄糖30g和瓊脂25g加入由辣寥、青蒿