細胞穿透肽和包含其的綴合物的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明設及來源于人類端粒酶逆轉錄酶化TERT)的細胞穿透膚、所述細胞穿透膚 的綴合物、活性成分W及包含所述綴合物的組合物。
【背景技術】
[0002] 盡管低分子量物質、核酸、蛋白質、納米顆粒等在分子水平作為治療物質具有極大 的潛能，但因為其不能穿透組織和細胞膜而使它們的使用受到限制。遞送運樣的物質到細 胞的系統(tǒng)的發(fā)展已經成為過去二十年研究的活躍領域。將物質轉運至細胞內成為分子治療 方法方面的話題。低分子量物質、核酸或者納米顆粒通過某些試劑、電穿孔或者熱休克轉運 進細胞內。但是，很難找到合適的方法不破壞蛋白的活性和完整性而將蛋白遞送進入細胞 內。在十九世紀八十年代，在進行關于HIV的細胞穿透能力的研究中，發(fā)現(xiàn)由特定的11個氨 基酸組成的HIV-TAT蛋白在向細胞內的轉運過程中發(fā)揮重要作用。因此，從十九世紀九十年 代開始，尋找將蛋白轉運至細胞內的正確方法的研究成為研究的熱點領域。
[0003] 端粒已知是在染色體末端發(fā)現(xiàn)的遺傳物質的重復序列，其防止染色體損傷或合并 到其它的染色體。端粒的長度在每次細胞分裂時縮短，并且在一定次數(shù)的細胞分裂后，端粒 長度極度縮短W致細胞停止分裂并且死亡。另一方面，已知端粒的延長會延長細胞壽命。例 如，癌細胞制造一種稱為端粒酶的酶，其阻止端粒的縮短，因此導致癌細胞的繁殖。
[0004] STAT3抑制劑通過包括調亡、抑制血管生成和阻斷免疫逃逸的復雜的抗腫瘤機制 來調節(jié)腫瘤。據(jù)報道，作為STAT3抑制劑藥物的NSC74859在施用時具有劑量依賴性副作用。 所W，需要通過施用低劑量的該藥物來抑制腫瘤的方法。
[0005] 紫杉醇用于治療卵巢癌、乳腺癌、肺癌或胃癌，據(jù)報道紫杉醇具有劑量依賴性副作 用，即通過骨髓抑制而減少白細胞、紅細胞和血小板。所W，需要通過施用低劑量紫杉醇來 更有效地治療癌癥的方法。

【發(fā)明內容】

[0006] 技術問題
[0007] 對于食物、藥物和健康補充劑，將在體內具有高吸收需求的活性成分轉運進入細 胞是非常重要的，如蛋白質、核酸、膚、脂質、糖脂、礦物質、葡萄糖、納米顆粒、生物制品、造 影劑、藥物和化學化合物。
[000引例如就抗癌藥物而言，其W超過有效劑量施用W激活抗癌效果，并且據(jù)報道已知 的抗癌藥物對于高劑量施用具有副作用，包括通過抑制骨髓而減少白細胞、紅細胞、血小板 和正常細胞調亡。所W，需要通過施用低劑量藥物來抑制癌癥的方法。
[0009] 本發(fā)明的目的是提供一種在細胞內具有高傳導性的細胞穿透膚及包括其的綴合 物。
[0010] 本發(fā)明的另一個目的是提供一種作為細胞穿透膚和抗癌藥物的組合的綴合物，W 及包含該綴合物作為轉運祀標特異性抗癌藥物的有效手段的藥物組合物。
[0011] 本發(fā)明的另一個目的是提供一種作為細胞穿透膚和STAT3抑制劑的組合的綴合 物，W及包含該綴合物作為轉運STAT3抑制劑的有效手段的藥物組合物。
[0012] 本發(fā)明的另一個目的是提供一種作為細胞穿透膚和紫杉醇的組合的綴合物，W及 包含該綴合物作為轉運紫杉醇的有效手段的藥物組合物。
[0013] 問題的解決方案
[0014] 根據(jù)本發(fā)明的實施方式，作為來源于端粒酶的細胞穿透載體膚（cell penetrating carrier peptide),可W提供下述細胞穿透載體膚：其中所述膚包含沈Q ID NO: 1的氨基酸序列，所述膚具有與上述序列大于80%同源性的氨基酸序列，或者所述膚包 含上述膚的片段。
[0015] 根據(jù)本發(fā)明實施方式中的細胞穿透載體膚，所述片段可由3個W上氨基酸組成。
[0016] 根據(jù)本發(fā)明的另一個實施方式，作為細胞穿透載體膚和活性成分的綴合物，提供 包含SEQ ID N0:1的氨基酸序列的細胞穿透載體膚，具有與上述序列大于80%同源性的氨 基酸序列，或者包含上述序列的片段的膚。
[0017] 根據(jù)本發(fā)明的另一個實施方式，提供了選自由W下物質組成的組的活性成分:蛋 白質、核酸、膚、脂質、糖脂、礦物質、葡萄糖、納米微粒、生物制品、造影劑、藥物和化學化合 物。
[0018] 根據(jù)本發(fā)明的另一個實施方式的綴合物，所述活性成分可W是細胞因子、抗體、抗 體片段、治療性酶、可溶性受體或配體。
[0019] 根據(jù)本發(fā)明的另一個實施方式的綴合物，所述活性成分可W用于治療或預防疾 病。
[0020] 根據(jù)本發(fā)明的另一個實施方式，可提供用于治療和預防疾病的方法，該方法包括 將根據(jù)本發(fā)明的綴合物施用于需要其的個體。
[0021] 根據(jù)本發(fā)明的另一個實施方式，可提供根據(jù)本發(fā)明的綴合物用于治療和預防疾病 的應用。
[0022] 根據(jù)本發(fā)明的另一個實施方式，可提供用于治療和預防疾病的根據(jù)本發(fā)明的綴合 物。
[0023] 根據(jù)本發(fā)明的另一個實施方式的綴合物，所述疾病可選自由W下疾病組成的組： 皮膚病、膜腺癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌、胃癌、肝細胞癌、表皮樣癌、非小細胞肺癌 (NSCLC)、皮膚表皮樣癌、月經過多、子宮內膜異位癥、子宮腺肌病、子宮肌瘤、女性或男性不 育、兒童性早熟、良性前列腺增生、由表皮細胞增殖引起的皮膚病，由T淋己細胞引起的炎癥 及W上病癥的組合。
[0024] 根據(jù)本發(fā)明的另一個實施方式的綴合物，所述活性成分可W是抗癌藥物。
[0025] 根據(jù)本發(fā)明的另一個實施方式的綴合物，所述抗癌藥物可W是STAT3抑制劑。
[0026] 根據(jù)本發(fā)明的另一個實施方式的綴合物，所述抗癌藥物可W是紫杉醇 (paclitaxel)。
[0027] 根據(jù)本發(fā)明的另一個實施方式的綴合物，所述載體膚和活性成分可W通過共價 鍵、非共價鍵或接頭介導連接。
[0028] 根據(jù)本發(fā)明的另一個實施方式，提供了包含所述綴合物的藥物組合物。
[0029] 根據(jù)本發(fā)明的另一個實施方式的藥物組合物，所述藥物組合物可用于治療或預防 疾病。
[0030] 根據(jù)本發(fā)明的另一個實施方式，提供了一種方法，其中所述方法包括給需要治療 或預防疾病的個體施用包含根據(jù)本發(fā)明的綴合物的藥物組合物的步驟。特別是，所述方法 可用于抗癌治療或預防癌癥。
[0031] 根據(jù)本發(fā)明的另一個實施方式，可提供包含根據(jù)本發(fā)明的綴合物的藥物組合物用 于治療或預防疾病的應用。特別是，所述應用可W用于抗癌治療或預防癌癥。
[0032] 根據(jù)本發(fā)明的另一個實施方式，可提供用于治療或預防疾病的包含根據(jù)本發(fā)明的 綴合物的藥物組合物。特別是，所述藥物組合物可用于抗癌治療或預防癌癥。
[0033] 根據(jù)本發(fā)明的另一個實施方式，所述藥物組合物可用于治療或預防選自由W下疾 病組成的組的疾病:皮膚病、膜腺癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌、胃癌、肝細胞癌、表皮 樣癌、非小細胞肺癌(NSCLC)、皮膚表皮樣癌、月經過多、子宮內膜異位癥、子宮腺肌病、子宮 肌瘤、女性或男性不育、兒童性早熟、良性前列腺增生、由表皮細胞增殖引起的皮膚病、由T 淋己細胞引起的炎癥W及W上病癥的組合。
[0034] 根據(jù)本發(fā)明的另一個實施方式，所述藥物組合物可用于抗癌治療或預防癌癥。
[0035] 根據(jù)本發(fā)明的另一個實施方式，提供將藥物轉運至細胞內的試劑盒，其中所述試 劑盒包含含有綴合物的組合物和說明書，所述綴合物是活性成分和包含SEQ ID NO: 1的氨 基酸序列的細胞穿透載體膚、與上述序列具有大于80%同源性的膚或者包含上述膚的片段 的膚的綴合物，且所述說明書公開了組合物的劑量、施用路徑、施用次數(shù)和適應癥中的一種 或多種。
[0036] 根據(jù)本發(fā)明的另一個實施方式，可提供將活性成分轉運至細胞內的系統(tǒng)，作為將 活性成分轉運至細胞內的系統(tǒng)，其中所述系統(tǒng)包括根據(jù)本發(fā)明的實施方式的綴合物，其中 所述綴合物包含SEQ ID NO: 1的氨基酸序列、與上述序列具有大于80%同源性的氨基酸序 列或包含上述序列的片段的膚，其中所述膚具有細胞穿透性W使活性成分被轉運至細胞 內。
[0037] 根據(jù)本發(fā)明的另一個實施方式，作為通過細胞穿透載體膚將活性成分轉運至細胞 內的方法，可W提供用于將活性成分轉運至細胞內的方法，其中所述方法包括向有需要者 施用根據(jù)本發(fā)明的另一個實施方式的綴合物的步驟，其中所述膚包括SEQ ID NO: 1的氨基 酸序列、與上述序列具有大于80%同源性的氨基酸序列或包含上述序列的片段的膚，其中 所述膚也具有細胞穿透性W使活性成分被轉運至細胞內。
[0038] 根據(jù)本發(fā)明的另一個實施方式，所述方法可將活性成分局部轉運到細胞中的線粒 體。
[0039] 根據(jù)本發(fā)明的另一個實施方式，提供編碼根據(jù)本發(fā)明的一個實施方式的膚的多核 巧酸。
[0040] 根據(jù)本發(fā)明的另一個實施方式，提供包含根據(jù)本發(fā)明的另一個實施方式的多核巧 酸的載體。
[0041] 根據(jù)本發(fā)明的另一個實施方式，提供包含根據(jù)本發(fā)明的另一個實施方式的載體的 轉化細胞。
[0042] 根據(jù)本發(fā)明的另一個實施方式，使用根據(jù)權利要求1或權利要求2所述的細胞穿透 載體膚，W使活性成分轉運進入細胞。
[0043] 根據(jù)本發(fā)明的另一個實施方式，可提供用于治療或預防疾病的方法，其中所述方 法包含向有需要者施用根據(jù)本發(fā)明的一個實施方式的綴合物，其中所述細胞穿透載體膚包 括SEQ ID NO: 1的氨基酸序列、與上述序列具有大于80%同源性的氨基酸序列或上述序列 的片段的膚，其中所述膚具有細胞穿透性W使得活性成分被轉運進入細胞，其中所述疾病 選自由W下疾病組成的組:皮膚病、炎性疾病、膜腺癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌、胃 癌、肝細胞癌、表皮樣癌、非小細胞肺癌(NSCLC)、皮膚表皮樣癌、月經過多、子宮內膜異位 癥、子宮腺肌病、子宮肌瘤、女性或男性不育、兒童性早熟、良性前列腺增生、由表皮細胞增 殖引起的皮膚病、由T淋己細胞引起的炎癥及W上病癥的組合。
[0044] 發(fā)明應用
[0045] 通過使用根據(jù)本發(fā)明的細胞穿透膚，可提供遞送癌癥特異性抗癌藥物的有效方 式。具體地，通過制造根據(jù)本發(fā)明的細胞穿透載體膚的綴合物和抗癌藥物，可使已知抗癌藥 物的有效劑量降低，并且還可使由癌癥特異性效果引起的副作用降低。
[0046] 附圖描述
[0047] 圖1表示根據(jù)本發(fā)明的膚和已知抗癌藥物的綴合的抗癌機制的圖表。
[0048] 圖2表示施用根據(jù)本發(fā)明的膚的綴合物和造影劑(FITC)后細胞內的運輸?shù)膱D。
[0049] 圖3表示僅施用各個濃度的根據(jù)本發(fā)明的膚之后