，在頸內(nèi)靜脈的區(qū)域外科手術(shù)準(zhǔn)備后通過(guò)頸內(nèi)靜脈插管，采集血液。
[0164] 對(duì)W下動(dòng)物進(jìn)行血液采集(用于血清制備）：
[016引-體重高于10kg的成年犬
[0166] -對(duì)于雄性，除體重之外不做限制；
[0167] -對(duì)于雌性，排除那些動(dòng)情間期的最后一個(gè)月內(nèi)的、那些懷孕的或那些哺乳期的第 一個(gè)月內(nèi)的。
[0168] 每只動(dòng)物在血液采集之前稱(chēng)重。將血液采集的量計(jì)算為7mL/kg體重。對(duì)于不重復(fù) 的血液采樣，霍恩豪斯化ohenhaus) (2006)和弗雷(Frey) (2009)發(fā)現(xiàn)非損害性采集率為 17mL/kg，施耐德(Schne i der) (1995)采集 22mL 血液/kg 體重。
[0169] 通過(guò)在室溫凝固提取血清并離屯、。將血清在無(wú)菌環(huán)境（層流罩超凈臺(tái)（laminar hood))下等分于4mL管中。給藥之前進(jìn)行細(xì)菌學(xué)分析(厭氧菌和需氧菌培養(yǎng)）。
[0170] 幼犬的管理（圖3)
[0171] 包括240只或320只幼犬?？紤]出生體重，組內(nèi)分配是隨機(jī)的，（按照與成年體重成 比例的四分位(quadiles)劃分）。根據(jù)著色的毛項(xiàng)圈，識(shí)別幼犬。運(yùn)項(xiàng)技術(shù)已經(jīng)證明在同一 個(gè)養(yǎng)犬場(chǎng)對(duì)幼犬及其母親是安全的(無(wú)窒息、無(wú)攝入，無(wú)肢體限制）。每周在采樣操作時(shí)更新 項(xiàng)圈，W跟蹤幼犬生長(zhǎng)。 陽(yáng)72] 從第1天至第4天:稱(chēng)重 [017引從第7天至第63天每周一次:
[0174]-稱(chēng)重、臨床檢查、直腸體溫測(cè)定(光滑合適端頭）
[017引-口服給藥15mL血清/kg幼犬(在第1周期間用飼管并且此后用灌食空針(feeding syringe))
[0176]-采集糞便
[01W]方法:在自發(fā)排便后并通過(guò)直腸內(nèi)的棉拭子采集糞便(一只拭子用于病毒載量;一 個(gè)只拭子用于微生物區(qū)系）
[0178] 對(duì)于：-基于格雷萊(Grellet)的適應(yīng)于幼犬的皇家犬量表(Royal Canin scale) (從第28天起)進(jìn)行糞便評(píng)分
[0179] -糞便微生物區(qū)系
[0180]-定量病毒載量(細(xì)小病毒/冠狀病毒）
[0181] -定量寄生蟲(chóng)學(xué)載量(等抱球蟲(chóng)、弓首線蟲(chóng)(Toxocara)、賈第鞭毛蟲(chóng)）
[0182] -消化健康標(biāo)志物分析(巧衛(wèi)蛋白（calprotrectin))
[0183] -消化免疫力標(biāo)志物(總免疫球蛋白A;抗細(xì)小病毒和抗冠狀病毒抗體）
[0184] -血液采集
[0185] 方法:在維持側(cè)邸或背邸的幼犬中從頸靜脈采集血液。通過(guò)局部?jī)A倒一些無(wú)菌水 顯露靜脈。借助23G針和2mL注射器進(jìn)行采集。隨后確保指壓穿刺部位1分鐘。僅在檢查不存 在任何持續(xù)性出血后才放開(kāi)幼犬。每lOOg體重幼犬采集最大〇.7mL血液?？赡茉跓o(wú)任何擾動(dòng) 情況下采集10 %的循環(huán)容量，其中循環(huán)容量占8 %體重：因此最大容是每lOOg幼犬0.8mL。運(yùn) 種方案已經(jīng)成功地用在第0天、第2天、第7天及每周一次直至第60天采樣的56只幼犬中，無(wú) 任何由血液采集所致的死亡(查斯坦-梅拉德(Chastant-Mai 1 lard)等人，2010)，并且成功 地用在從第0天至第56天每周采集一次的20只幼犬中（卡塞勒斯(化sseleux) ,2007)。
[0186] 對(duì)于-總免疫球蛋白測(cè)定
[0187] -特異性抗體測(cè)定(細(xì)小病毒、瘤疹病毒、冠狀病毒）
[018引-瓜氨酸
[0189]在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始之前已經(jīng)制備源自超免疫犬的血清并儲(chǔ)存在-20°C。從出生起至第56 天每周記錄每只新生幼犬的品種大小、體重和健康狀態(tài)。根據(jù)血清給藥的類(lèi)型和時(shí)間，將幼 犬分配至4個(gè)不同組:早期組化0，n = 36)、早期和晚期組化L，n = 34)、晚期組(0L，n = 41)和 對(duì)照組（00，η = 38)。來(lái)自E0組和EL組的幼犬在生命最初的8小時(shí)內(nèi)2次口服接受血清 (1.5ml/100g體重）。來(lái)自化組和化組的幼犬從第2天至第52天每周2次口服接受血清（3ml/ 幼犬）。用卡方檢驗(yàn)(發(fā)病率)和協(xié)方差分析(ANC0VA)(體重增加)檢驗(yàn)分析數(shù)據(jù)。
[0190] 結(jié)果
[0191] 在生命的最初的21天期間，來(lái)自早期補(bǔ)充組化0組和化組）的幼犬表現(xiàn)出比來(lái)自其 他組(0L組和00組）的幼犬顯著地更少的疾病臨床癥狀（16% (11/70)對(duì)30% (24/79)，p = 0.045)。在第2天至第28天內(nèi)，在早期補(bǔ)充的大型品種幼犬中化0組、Ki且均值為786.6g，而 化組、00組均值為717.9g; P = 0.078)和在晚期補(bǔ)充的小型品種幼犬中化L組、0L組均值為 730.4g，而E0組、00組均值為731.8g)存在較大體重增加的傾向性。圖1和圖2中顯示結(jié)果。在 第29天至第49天內(nèi)，與其他幼犬相比，體重增加在晚期補(bǔ)充的大型品種幼犬中明顯較大巧L 組、0L組為2445.7g，而E0組、00組為2294. Og; P = 0.006)。
[0192] 結(jié)論；
[0193] 在運(yùn)項(xiàng)研究中，在腸閉合前補(bǔ)充成體血清的幼犬通常更少地表現(xiàn)新生兒期間的任 何病狀。在早期補(bǔ)充和晚期補(bǔ)充的動(dòng)物中觀察到更好的體重增加直至斷奶。運(yùn)顯示免疫球 蛋白治療是幼犬中對(duì)抗發(fā)病率和用于健康的預(yù)防措施。
[0194] 圖1和圖2中顯示結(jié)果。
[0195] 圖1顯示對(duì)發(fā)病率的首要結(jié)果。從開(kāi)始起的顯著性結(jié)果-步驟1-發(fā)病率=一段時(shí)間 內(nèi)活幼犬的明顯疾病癥狀。早期補(bǔ)充顯著降低發(fā)病率。
[0196] 圖2顯示對(duì)生長(zhǎng)的首要結(jié)果。從開(kāi)始起的顯著性結(jié)果-大型犬生長(zhǎng)速率改善。飼養(yǎng) 養(yǎng)犬場(chǎng)中的對(duì)照組并非安全組(病毒感染和寄生蟲(chóng)感染）。在2月齡之前:生長(zhǎng)得最快，幼犬 最安全。
[0197]圖3顯不義樣方案。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種組合物，所述組合物含有針對(duì)犬細(xì)小病毒2型的抗體，所述抗體與針對(duì)以下之一 的抗體組合： 犬冠狀病毒、 大腸桿菌、 犬皰疹病毒， 任選地還與針對(duì)以下的抗體組合： 支氣管敗血波氏桿菌或 賈第鞭毛蟲(chóng)， 或包含針對(duì)以下一種或多種的抗體： 犬副流感病毒、 犬痕熱病毒、 腺病毒1型、 鏈球菌、 葡萄球菌或 等孢球蟲(chóng)， 所述組合物用于改善犬健康，在24小時(shí)齡之前或24小時(shí)齡之后給藥。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述用途的組合物，所述組合物還包含水解的碳水化合物和/或油。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述用途的組合物，所述組合物處于噴霧、液體、摩絲或 凝膠的形式。4. 根據(jù)權(quán)利要求1至3任一項(xiàng)所述用途的組合物，其中所述組合物包含針對(duì)一種或多種 病毒和針對(duì)大腸桿菌的抗體。5. 根據(jù)權(quán)利要求1至4任一項(xiàng)所述用途的組合物，其中所述組合物包含針對(duì)犬冠狀病毒 和/或腺病毒1型的抗體。6. 根據(jù)權(quán)利要求1至6任一項(xiàng)所述用途的組合物，其中將所述組合物在最初的24小時(shí)內(nèi) 至少相隔4小時(shí)給藥2次。7. 根據(jù)權(quán)利要求1至4任一項(xiàng)所述用途的組合物，其中犬健康是消化免疫力和/或生長(zhǎng) 和/或應(yīng)激。8. -種組合物，所述組合物含有針對(duì)犬細(xì)小病毒2型的抗體，所述抗體與針對(duì)以下之一 的抗體組合： 犬冠狀病毒、 大腸桿菌、 犬皰疹病毒， 任選地還與針對(duì)以下的抗體組合： 支氣管敗血波氏桿菌或 賈第鞭毛蟲(chóng)， 或包含針對(duì)以下一種或多種的抗體： 犬副流感病毒、 犬痕熱病毒、 腺病毒1型、 鏈球菌、 葡萄球菌或 等孢球蟲(chóng)。9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的組合物，所述組合物還包含水解的碳水化合物和/或油。10. -種改善犬健康的方法，所述方法包括向犬給藥一種組合物，所述組合物含有針對(duì) 犬細(xì)小病毒2型的抗體，所述抗體與針對(duì)以下之一的抗體組合： 犬冠狀病毒、 大腸桿菌、 犬皰疹病毒， 任選地還與針對(duì)以下的抗體組合： 支氣管敗血波氏桿菌或 賈第鞭毛蟲(chóng)， 或包含針對(duì)以下一種或多種的抗體： 犬副流感病毒、 犬痕熱病毒、 腺病毒1型、 鏈球菌、 葡萄球菌或 等孢球蟲(chóng)。11. 根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述組合物還包含可水解的碳水化合物和/或 油。12. 根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求11所述的方法，其中所述給藥在24小時(shí)齡之前或24小時(shí) 齡之后。13. 根據(jù)權(quán)利要求10至12任一項(xiàng)所述的方法，其中所述犬健康是消化免疫力。14. 根據(jù)權(quán)利要求10至12任一項(xiàng)所述的方法，其中犬健康是生長(zhǎng)。15. 根據(jù)權(quán)利要求10至12任一項(xiàng)所述的方法，其中犬健康是應(yīng)激。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及一種包括針對(duì)一種或多種特定的病毒、細(xì)菌和/或病原體的抗體用于改善犬健康的組合物，其中所述組合物在犬24小時(shí)齡之前或在犬24小時(shí)齡直至90日齡之間給藥。
【IPC分類(lèi)】C07K16/08, C07K16/10, A61K39/00, C07K16/12, C07K16/06
【公開(kāi)號(hào)】CN105531286
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201480049502
【發(fā)明人】A·弗吉耶, S·沙唐, H·米拉, A·格雷萊
【申請(qǐng)人】馬斯公司
【公開(kāi)日】2016年4月27日
【申請(qǐng)日】2014年7月9日
【公告號(hào)】CA2918548A1, EP3019524A1, WO2015004181A1