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【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種包含氨基酸序列的單鏈胞內(nèi)抗體，其包含：可變重鏈互補(bǔ)決定區(qū)3(CDR3)序列、 可變輕鏈⑶R3序列以及插入在所述可變重鏈⑶R3序列與所述可變輕鏈⑶R3序列之間的接 頭序列，其中所述可變重鏈CDR3序列包含XiX2X3X4X5X6X 7X8X9Xiq，其中Χι是H、I、A或無氨基酸， 其中Χ2是W、T或A，其中X 3是P、G或V，其中X4是R、G或C，其中X5是L、Y、E或N，其中X6是W、R、C或G， 其中X?是R或無氨基酸，其中Xs是F、P或無氨基酸，其中X 9是P、K、D或無氨基酸，其中Χ1()是L、A 或T，并且其中所述胞內(nèi)抗體能夠結(jié)合聚脯氨酸序列并且減少細(xì)胞中的聚谷氨酸串蛋白的 聚集。2. 如權(quán)利要求1所述的胞內(nèi)抗體，其中所述可變重鏈CDR3序列包含WPGYRKA(SEQ ID N0:6)〇3. 如權(quán)利要求1所述的胞內(nèi)抗體，其中所述可變重鏈⑶R3序列包含HWPRLWRFPL(SEQ ID N0:7)〇4. 如權(quán)利要求1所述的胞內(nèi)抗體，其中所述可變重鏈CDR3序列包含ITGCECT(SEQ ID N0:8)〇5. 如權(quán)利要求1所述的胞內(nèi)抗體，其中所述可變重鏈⑶R3序列包含AAVCNGPRDT(SEQ ID N0:9)〇6. 如權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的胞內(nèi)抗體，其中所述可變輕鏈CDR3序列包含 X1X2X3X4X5X6X7X8X9X1QX11，其中Χι是S或無氨基酸，其中X2是Y或無氨基酸，其中X 3是C或無氨基 酸，其中Χ4是V、A、I或無氨基酸，其中Χ5是L、S、R或Υ，其中Χ 6是N、K、G或S，其中Χ7是M、G或L，其 中Xs是H、K或L，其中X9是W、A或P，其中X 1Q是A、L或V，并且其中Xn是N、Y、L或無氨基酸。7. 如權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的胞內(nèi)抗體，其中所述可變輕鏈CDR3序列包含 SYCASKGHWL(SEQ ID N0:10)。8. 如權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的胞內(nèi)抗體，其中所述可變輕鏈CDR3序列包含 VLNMHWAN(SEQ ID N0:11)。9. 如權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的胞內(nèi)抗體，其中所述可變輕鏈CDR3序列包含 SCIRGLKAAY(SEQ ID N0:12)。10. 如權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的胞內(nèi)抗體，其中所述可變輕鏈CDR3序列包含 GYSLLPVL(SEQ ID NO:13)。11. 如權(quán)利要求1所述的胞內(nèi)抗體，其中所述可變重鏈⑶R3序列包含WPGYRKA(SEQ ID NO:6)，并且其中所述可變輕鏈CDR3序列包含SYCASKGHWL(SEQ ID N0:10)。12. 如權(quán)利要求1所述的胞內(nèi)抗體，其中所述可變重鏈⑶R3序列包含HWPRLWRFPL(SEQ ID NO:7)，并且其中所述可變輕鏈CDR3序列包含VLNMHWAN(SEQ ID ΝΟ:11)。13. 如權(quán)利要求1所述的胞內(nèi)抗體，其中所述可變重鏈⑶R3序列包含ITGCECT(SEQ ID NO:8)，并且其中所述可變輕鏈CDR3序列包含SCIRGLKAAY(SEQ ID NO:12)。14. 如權(quán)利要求1所述的胞內(nèi)抗體，其中所述可變重鏈CDR3序列包含AAVCNGPRDT (SEQ ID NO:9)，并且其中所述可變輕鏈CDR3序列包含GYSLLPVL(SEQ ID NO:13)。15. 如權(quán)利要求1-14中任一項(xiàng)所述的胞內(nèi)抗體，其中所述胞內(nèi)抗體包含氨基酸序列，所 述氨基酸序列包含圖2中的SEQ ID NO:5的位置1-99、110-225和237-256的氨基酸。16. 如權(quán)利要求1所述的胞內(nèi)抗體，其中所述可變重鏈⑶R3區(qū)包含XiWPCXsXmXsXgT，并 且其中Χι是Η、I、A或無氨基酸，X 5是L、Y、E或N，X6是W、R、C或G，X7是R或無氨基酸，Xs是無氨基 酸，X9是P、K或D，并且X1Q是L、A或T(SEQ ID N0:14)。17. 如權(quán)利要求1所述的胞內(nèi)抗體，其中所述可變輕鏈⑶R3區(qū)包含SX2X3X4X5X6LHff AX1Q，其 中Χ2是無氨基酸，X3是C或無氨基酸，X4是V、A、I或無氨基酸，X 5是L、S、R或Y，并且X6是N、K、G或 S(SEQ ID N0:15)。18. 如權(quán)利要求1所述的胞內(nèi)抗體，其中所述接頭序列包含富含甘氨酸的序列。19. 如權(quán)利要求18所述的胞內(nèi)抗體，其中所述序列包含SSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID N0:16)。20. 如權(quán)利要求1所述的胞內(nèi)抗體，其中所述氨基酸序列包含SEQ ID NO: 1。21. 如權(quán)利要求1所述的胞內(nèi)抗體，其中所述氨基酸序列包含SEQ ID N0:2。22. 如權(quán)利要求1所述的胞內(nèi)抗體，其中所述氨基酸序列包含SEQ ID N0:3。23. 如權(quán)利要求1所述的胞內(nèi)抗體，其中所述氨基酸序列包含SEQ ID N0:4。24. 如權(quán)利要求1所述的胞內(nèi)抗體，其中所述氨基酸序列由SEQ ID NO: 1組成。25. 如權(quán)利要求1所述的胞內(nèi)抗體，其中所述氨基酸序列由SEQ ID N0:2組成。26. 如權(quán)利要求1所述的胞內(nèi)抗體，其中所述氨基酸序列由SEQ ID N0:3組成。27. 如權(quán)利要求1所述的胞內(nèi)抗體，其中所述氨基酸序列由SEQ ID N0:4組成。28. -種包含氨基酸序列的單鏈胞內(nèi)抗體，其包含:可變重鏈互補(bǔ)決定區(qū)（CDR)序列、可 變輕鏈CDR序列以及插入在所述可變重鏈CDR序列與所述可變輕鏈CDR序列之間的接頭序 列，其中所述可變輕鏈CDR序列包含X^X^X^XYXsXgXioXii，其中Χι是S或無氨基酸，其中X 2 是Υ或無氨基酸，其中Χ3是C或無氨基酸，其中Χ4是V、A、I或無氨基酸，其中Χ5是L、S、R或Υ，其 中X 6是N、K、G或S，其中X7是M、G或L，其中X8是H、K或L，其中X9是W、A或P，其中X 1()是A、L或V，并 且其中Xn是N、Y、L或無氨基酸，并且其中所述胞內(nèi)抗體能夠結(jié)合聚脯氨酸序列并且減少細(xì) 胞中的聚谷氨酸串蛋白的聚集。29. 如權(quán)利要求28所述的胞內(nèi)抗體，其中所述可變輕鏈⑶R序列包含SYCASKGHWL( SEQ ID NO:10)〇30. 如權(quán)利要求28所述的胞內(nèi)抗體，其中所述可變輕鏈⑶R序列包含VL匪HWAN(SEQ ID Ν0:11)〇31. 如權(quán)利要求28所述的胞內(nèi)抗體，其中所述可變輕鏈⑶R序列包含SCIRGLKAAY(SEQ ID N0:12)。32. 如權(quán)利要求28所述的胞內(nèi)抗體，其中所述可變輕鏈⑶R序列包含GYSLLPVL(SEQ ID N0:13)。33. 如權(quán)利要求28-32中任一項(xiàng)所述的胞內(nèi)抗體，其中所述可變重鏈CDR序列包含 WPGYRKA(SEQ ID N0:6)〇34. 如權(quán)利要求28-32中任一項(xiàng)所述的胞內(nèi)抗體，其中所述可變重鏈CDR序列包含 HWPRLWRFPL(SEQ ID N0:7)〇35. 如權(quán)利要求28-32中任一項(xiàng)所述的胞內(nèi)抗體，其中所述可變重鏈CDR序列包含 ITGCECT(SEQ ID N0:8)〇36. 如權(quán)利要求28-32中任一項(xiàng)所述的胞內(nèi)抗體，其中所述可變重鏈CDR序列包含 AAVCNGPRDT(SEQ ID N0:9)〇37. 如權(quán)利要求28所述的胞內(nèi)抗體，其中所述可變重鏈⑶R序列包含WPGYRKA(SEQ ID N0:6)，并且其中所述可變輕鏈CDR序列包含SYCASKGHWL(SEQ ID N0:10)。38. 如權(quán)利要求28所述的胞內(nèi)抗體，其中所述可變重鏈⑶R序列包含HWPRLWRFPL( SEQ IDN0:7)，并且其中所述可變輕鏈⑶R序列包含VLNMHffAN(SEQIDN0:ll)。39. 如權(quán)利要求28所述的胞內(nèi)抗體，其中所述可變重鏈⑶R序列包含ITGCECT(SEQ ID N0:8)，并且其中所述可變輕鏈⑶R序列包含SCIRGLKAAY(SEQ ID N0:12)。40. 如權(quán)利要求28所述的胞內(nèi)抗體，其中所述可變重鏈⑶R序列包含AAVCNGPRDT (SEQ ID NO:9)，并且其中所述可變輕鏈CDR序列包含GYSLLPVL(SEQ ID NO:13)。41. 如權(quán)利要求28-40中任一項(xiàng)所述的胞內(nèi)抗體，其中所述胞內(nèi)抗體包含氨基酸序列， 所述氨基酸序列包含圖2中的SEQ ID NO:5的位置1-99、110-225和237-256的氨基酸。42. 如權(quán)利要求28所述的胞內(nèi)抗體，其中所述可變重鏈⑶R區(qū)包含XiWPCXsXmXsXgT，并 且其中Χι是Η、I、A或無氨基酸，X 5是L、Y、E或N，X6是W、R、C或G，X7是R或無氨基酸，Xs是無氨基 酸，Χ 9是Ρ、Κ或D，并且X1Q是L、A或T(SEQ ID Ν0:14)。43. 如權(quán)利要求28所述的胞內(nèi)抗體，其中所述可變輕鏈⑶R區(qū)包含SX2X3X4X5X6LHffAX 1Q，其 中Χ2是無氨基酸，X3是C或無氨基酸，X4是V、A、I或無氨基酸，X 5是L、S、R或Y，并且X6是N、K、G或 S(SEQ ID NO:15)。44. 如權(quán)利要求28所述的胞內(nèi)抗體，其中所述接頭序列包含富含甘氨酸的序列。45. 如權(quán)利要求44所述的胞內(nèi)抗體，其中所述序列包含SSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQID NO:16)。46. 如權(quán)利要求28所述的胞內(nèi)抗體，其中所述氨基酸序列包含SEQ ID NO: 1。47. 如權(quán)利要求28所述的胞內(nèi)抗體，其中所述氨基酸序列包含SEQ ID N0:2。48. 如權(quán)利要求28所述的胞內(nèi)抗體，其中所述氨基酸序列包含SEQ ID N0:3。49. 如權(quán)利要求28所述的胞內(nèi)抗體，其中所述氨基酸序列包含SEQ ID N0:4。50. 如權(quán)利要求28所述的胞內(nèi)抗體，其中所述氨基酸序列由SEQ ID NO: 1組成。51. 如權(quán)利要求28所述的胞內(nèi)抗體，其中所述氨基酸序列由SEQ ID N0:2組成。52. 如權(quán)利要求28所述的胞內(nèi)抗體，其中所述氨基酸序列由SEQ ID N0:3組成。53. 如權(quán)利要求28所述的胞內(nèi)抗體，其中所述氨基酸序列由SEQ ID N0:4組成。54. 如權(quán)利要求1 -5 3中任一項(xiàng)所述的胞內(nèi)抗體，其中所述胞內(nèi)抗體能夠結(jié)合亨廷頓蛋 白（HttpQ)蛋白質(zhì)。55. 如權(quán)利要求1 -54中任一項(xiàng)所述的胞內(nèi)抗體，其中所述聚谷氨酸串蛋白是亨廷頓蛋 白（HttpQ)蛋白質(zhì)。56. 如權(quán)利要求55所述的胞內(nèi)抗體，其中所述胞內(nèi)抗體降低由所述HttpQ蛋白的聚集引 起的過度表達(dá)基因的表達(dá)。57. 如權(quán)利要求55所述的胞內(nèi)抗體，其中所述胞內(nèi)抗體增加由所述HttpQ蛋白的聚集引 起的表達(dá)不足基因的表達(dá)。58. 如權(quán)利要求1-53中任一項(xiàng)所述的胞內(nèi)抗體，其中所述聚谷氨酸串蛋白是脊髓延髓 肌萎縮癥(SBMA)蛋白和脊髓小腦共濟(jì)失調(diào)(SCA)蛋白。59. 如權(quán)利要求1-58中任一項(xiàng)所述的胞內(nèi)抗體，其中所述聚脯氨酸序列包含 PQLPQPPPQAQP(SEQ ID N0:17)。60. 如權(quán)利要求1-58中任一項(xiàng)所述的胞內(nèi)抗體，其中所述聚脯氨酸序列包含 PGPAVAEEPLHRPG(SEQ ID N0:18)。61. 如權(quán)利要求1-58中任一項(xiàng)所述的胞內(nèi)抗體，其中所述聚脯氨酸序列包含PXP，并且 其中X是任何氨基酸。62. 如權(quán)利要求1-61中任一項(xiàng)所述的胞內(nèi)抗體，其中所述胞內(nèi)抗體預(yù)防由所述聚谷氨 酸串蛋白的聚集引起的基因失調(diào)。63. 如權(quán)利要求1 -6 2中任一項(xiàng)所述的胞內(nèi)抗體，其中所述胞內(nèi)抗體防止所述聚谷氨酸 串蛋白的毒性片段結(jié)合細(xì)胞核中的染色質(zhì)。64. 如權(quán)利要求1 -63中任一項(xiàng)所述的胞內(nèi)抗體，其中所述胞內(nèi)抗體減少轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子 與所述細(xì)胞核中的染色質(zhì)的結(jié)合。65. 如權(quán)利要求1-64中任一項(xiàng)所述的胞內(nèi)抗體，其中所述胞內(nèi)抗體防止所述聚谷氨酸 串蛋白在細(xì)胞I旲上的積聚。66. -種用于減少受試者中的聚谷氨酸串蛋白的聚集的藥物組合物，所述藥物組合物 包含如權(quán)利要求1-65中任一項(xiàng)所述的所述胞內(nèi)抗體和藥學(xué)上可接受的載體。67. 如權(quán)利要求66所述的藥物組合物，其中所述藥學(xué)上可接受的載體包含遞送劑。68. 如權(quán)利要求66所述的藥物組合物，其中所述聚谷氨酸串蛋白是亨廷頓蛋白（HttpQ) 蛋白質(zhì)。69. -種載體，其包含編碼如權(quán)利要求1-65中任一項(xiàng)所述的所述胞內(nèi)抗體的核酸序列。70. 如權(quán)利要求69所述的載體，其中所述載體是病毒載體。71. 如權(quán)利要求69所述的載體，其中所述載體是重組腺相關(guān)病毒。72. -種分離的細(xì)胞，其包含如權(quán)利要求1-65中任一項(xiàng)所述的所述胞內(nèi)抗體。73. -種防止細(xì)胞中的聚谷氨酰胺(聚Q)蛋白的聚集的方法，所述方法包括： (a) 將如權(quán)利要求1-65中任一項(xiàng)所述的所述胞內(nèi)抗體引入所述細(xì)胞； (b) 使在步驟(a)中產(chǎn)生的所述細(xì)胞維持足以使所述胞內(nèi)抗體結(jié)合所述聚Q蛋白的一段 時(shí)間，從而防止所述細(xì)胞中的聚Q蛋白的聚集。74. -種預(yù)防由細(xì)胞中的聚谷氨酰胺(聚Q)蛋白的聚集引起的基因失調(diào)的方法，所述方 法包括： (a) 將如權(quán)利要求1-65中任一項(xiàng)所述的所述胞內(nèi)抗體引入所述細(xì)胞； (b) 使在步驟(a)中產(chǎn)生的所述細(xì)胞維持足以使所述胞內(nèi)抗體結(jié)合所述聚Q蛋白的一段 時(shí)間，從而預(yù)防所述細(xì)胞中的一種或多種基因的基因失調(diào)。75. 如權(quán)利要求74所述的方法，其中所述一種或多種基因包含在表2中列出的基因。76. 如權(quán)利要求74所述的方法，其中所述聚Q蛋白是亨廷頓蛋白（HttpQ)蛋白質(zhì)。77. -種治療或管理患有與細(xì)胞中的聚谷氨酰胺蛋白的聚集相關(guān)的疾病的受試者的方 法，所述方法包括向需要所述治療或管理的受試者施用治療有效量的如權(quán)利要求1-65中任 一項(xiàng)所述的所述胞內(nèi)抗體。78. 如權(quán)利要求77所述的方法，其中所述疾病包括亨廷頓氏病、脊髓延髓肌萎縮癥 (SBMA)、齒狀核紅核蒼白球路易體萎縮癥或脊髓小腦共濟(jì)失調(diào)。79. 如權(quán)利要求77所述的方法，其中所述聚谷氨酰胺蛋白是亨廷頓蛋白（HttpQ)蛋白 質(zhì)。80. 如權(quán)利要求77所述的方法，其中所述受試者是哺乳動(dòng)物。81. 如權(quán)利要求77所述的方法，其中所述受試者是人。82. -種包含氨基酸序列的單鏈胞內(nèi)抗體，其包含:可變重鏈互補(bǔ)決定區(qū)3(⑶R3)序列、 可變輕鏈⑶R3序列以及插入在所述可變重鏈⑶R3序列與所述可變輕鏈⑶R3序列之間的接 頭序列，其中所述可變重鏈⑶R3序列包含SEQ ID NO:6,其中所述可變輕鏈⑶R3序列包含 SEQ ID NO: 10,并且其中所述胞內(nèi)抗體能夠結(jié)合人Tau蛋白的蛋白質(zhì)序列。83. 如權(quán)利要求82所述的胞內(nèi)抗體，其中所述可變重鏈⑶R序列包含WPGYRKA(SEQ ID N0:6)〇84. 如權(quán)利要求82所述的胞內(nèi)抗體，其中所述可變輕鏈⑶R序列包含SYCASKGHWL( SEQ ID NO:10)〇85. 如權(quán)利要求82所述的胞內(nèi)抗體，其中所述可變重鏈⑶R序列包含WPGYRKA(SEQ ID N0:6)，并且其中所述可變輕鏈CDR序列包含SYCASKGHWL(SEQ ID N0:10)。86. 如權(quán)利要求82所述的胞內(nèi)抗體，其中所述氨基酸序列包含SEQ ID NO: 1。87. 如權(quán)利要求82所述的胞內(nèi)抗體，其中所述氨基酸序列由SEQ ID NO: 1組成。88. 如權(quán)利要求82所述的胞內(nèi)抗體，其中所述胞內(nèi)抗體結(jié)合所述Tau蛋白中的一個(gè)或多 個(gè)表位。89. -種治療或管理患有阿爾茨海默氏病或其他Tau病狀的受試者的方法，所述方法包 括向需要所述治療或管理的受試者施用治療有效量的如權(quán)利要求82-88中任一項(xiàng)所述的所 述胞內(nèi)抗體。90. 如權(quán)利要求89所述的方法，其中所述胞內(nèi)抗體防止Tau片段與引起神經(jīng)元功能障礙 的神經(jīng)元的結(jié)合。
【專利摘要】本文提供胞內(nèi)抗體的組合物和使用方法，所述胞內(nèi)抗體結(jié)合聚谷氨酸蛋白且改變聚谷氨酸相關(guān)疾病中如亨廷頓氏病中的聚谷氨酸蛋白聚集的作用。提供防止聚谷氨酸聚集、基因失調(diào)和亨廷頓氏病的不利作用的胞內(nèi)抗體。
【IPC分類】C07K16/18
【公開號(hào)】CN105531287
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201480042530
【發(fā)明人】L·A·亨德森, I·A·阿瑪羅
【申請(qǐng)人】維拜昂公司
【公開日】2016年4月27日
【申請(qǐng)日】2014年5月9日
【公告號(hào)】CA2913418A1, WO2014193632A2, WO2014193632A3