一種從柑橘皮中同步分離和純化β-隱黃素及豆甾醇的方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及從柑橘皮中同步分離和純化β-隱黃素及豆留醇的技術工藝和參數(shù)。
【背景技術】
[0002] β_隱黃素是類胡蘿卜素中葉黃素的一種，具有抗癌、抗氧化、抑制骨質疏松等多種 生理功能，結構式如下：
[0004] 其主要存在于高等植物、真菌、藍藻等中；近期研究表明，β-隱黃素還是一種良好 的維生素 A前體物質。
[0005] 植物留醇是一種存在于植物中的天然活性物質，是植物體構成細胞膜的成分之 一，也是多種激素、維生素 D及留體化合物合成的前體，具有抗癌、抗炎、抗氧化、降低血脂和 膽固醇、減少冠心病發(fā)生等生理功能。豆留醇是植物留醇的典型代表之一，結構式如下：
[0007] 其主要存在各類植物及油脂脫臭餾出物中。豆留醇除具有植物留醇的一般藥理特 性外，還主要用于合成各種激素及維生素 D3,被廣泛應用于生物及醫(yī)藥行業(yè)。由于柑橘皮來 源容易且成本較低，從橘皮中提取天然β-隱黃素成為獲取β-隱黃素的主要途徑;柑橘果皮 中除含有果膠、纖維素、色素外，還含有黃酮、留醇等生物活性物質，但目前關于從皮渣中提 取豆留醇的研究鮮見報道。
[0008] 以下文獻中所記載的內(nèi)容，可以作為β-隱黃素和豆甾醇的評判依據(jù)：1、劉玉朋.紅 薯莖葉化學成分的提取分離與結構鑒定[D].吉林大學，2013;2、劉志華，楊志學.馬蹄蓮中 植物甾醇成分的分離與結構鑒定[J].中國藥師，2007,10期：978-979. DOI :doi: 10.3969/ ]_.18811.1〇〇8-〇49乂.2〇〇7.1〇.〇15;3、井鳳，王麗，徐雙雙，等.辣椒中0-隱黃質的分離制備 [J] ·食品科學，2013,第6期：10-13 ;4、Khachik，F(xiàn)，Chang，ANGana，A，Mazzola，E.Partial synthesis of(3R，6'R)-alpha-cryptoxanthin and(3R)-beta_cryptoxanthin from(3R， 3,R,6,R)-lutein[J].Journal of Natural Products,2007,70(2):220-226.

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本發(fā)明提供一種從柑橘皮中同步分離和純化β-隱黃素及豆留醇的方法，可同時獲 得高純度的隱黃素和豆甾醇。
[0010] 技術方案如下：
[0011] -種從柑橘皮中同步分離和純化β-隱黃素及豆留醇的方法，其關鍵在于包括以下 步驟：
[0012] 步驟一、將柑橘皮干燥并磨粉；
[0013] 步驟二、用無水乙醇浸提預處理后的原料，減壓濃縮得到總酯萃取物；
[0014] 步驟三、首先將所述總酯萃取物溶于正己烷中得到萃取物溶液，再向萃取物溶液 中加入KOH-乙醇溶液進行皂化反應，皂化反應完成后進行萃取，最后水洗并減壓濃縮；
[0015] 步驟四、采用色譜法分離純化，以β_隱黃素標準品為對照，收集同時含有甾醇及β_ 隱黃素的洗脫液；
[0016] 步驟五、將步驟四中得到的洗脫液進行濃縮，得到濃縮物；
[0017] 步驟六、首先選用正己烷-丙酮對步驟四中得到的洗脫液的濃縮物進行雙溶劑法 結晶，結晶出豆甾醇晶體，再將上述去除豆甾醇晶體后的洗液進行再次濃縮，得到主要含β-隱黃素的濃縮物，最后選用乙醚-甲醇進行結晶，便可結晶出β-隱黃素晶體。
[0018] 上述步驟二中，在38~45°C的條件下對柑橘皮粉進行浸提。
[0019] 上述步驟三中，所述萃取物溶液的質量濃度為0.046~0.056%，所述KOH-乙醇溶 液的質量濃度為8~12%，所述萃取物溶液與KOH-乙醇溶液的體積比為1:1，皂化時間為 12h〇
[0020] 上述步驟三中，皂化反應完成后，加入等體積的正己烷進行萃取，分離得到正己烷 相，再用等體積的質量濃度為〇. 5 %的NaCl水溶液水洗正己烷相，最后減壓濃縮。
[0021] 上述步驟四中，采用硅膠柱層析分離純化，采用正己烷濕法裝柱，采用正己烷：丙 酮：甲醇=92.5:7:0.5的體積比等度洗脫，并用薄層色譜法檢測，收集與β-隱黃素標準品一 致的洗脫液。
[0022]上述步驟六中，結晶出豆留醇晶體后，用正己烷清洗晶體，直至晶體無色;再將溶 液進行濃縮干燥，最后選用乙醚-甲醇對干燥后的物質進行結晶，得到隱黃素晶體，并用 甲醇清洗晶體，直至甲醇清洗液無色為止。
[0023] 上述步驟四中薄層色譜的條件為：展開劑為石油醚：乙醚=7: 3，顯色劑為10%硫 酸-無水乙醇，95°C烘烤2min。
[0024] 有益效果:采用本發(fā)明的一種從柑橘皮中同步分離和純化β-隱黃素及豆甾醇的方 法，能同時從柑橘皮中提取出隱黃素和豆留醇，方法簡單實用，分離效果好，分離產(chǎn)物純 度高，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
【附圖說明】
[0025] 圖1為本發(fā)明得到的流程圖；
[0026] 圖2為本發(fā)明得到的豆甾醇的紅外光譜圖；
[0027]圖3為本發(fā)明得到的豆留醇的1H-NMR譜圖；
[0028]圖4為本發(fā)明得到的豆甾醇的13C-NMR譜圖；
[0029]圖5為本發(fā)明得到的β-隱黃素的1H-NMR譜圖；
[0030]圖6為β-隱黃素標準品的高效液相色譜圖；
[0031 ]圖7為本發(fā)明得到的β-隱黃素的高效液相色譜圖；
[0032]圖8本發(fā)明得到的β-隱黃素的顯微照片；
[0033]圖9本發(fā)明得到的豆甾醇的顯微照片。
【具體實施方式】
[0034] 下面結合實施例對本發(fā)明作進一步說明。
[0035] -種從柑橘皮中同步分離純化β-隱黃素及豆留醇的方法，包括以下步驟：
[0036]步驟一、將柑橘皮于40°C的溫度條件下干燥并磨粉；
[0037]步驟二、在38~45°C的水浴鍋中，用無水乙醇浸提預處理后的原料2次，合并提取 液，減壓濃縮得到總酯萃取物；
[0038]步驟三、首先將所述總酯萃取物溶于正己烷中得到萃取物溶液，該萃取物溶液的 質量濃度為〇. 046~0.056 %，再向萃取物溶液中加入KOH-乙醇溶液進行皂化反應，該KOH-乙醇溶液的質量濃度為8~12%，所述萃取物溶液與KOH-乙醇溶液的體積比為1:1，皂化時 間為12h;皂化反應完成后，加入等體積的正己烷進行萃取，分離得到正己烷相，再用等體積 的質量濃度為〇. 5 %的NaCl水溶液水洗正己烷相，最后減壓濃縮。
[0039] 步驟四、采用硅膠柱層析分離純化，采用正己烷濕法裝柱，采用正己烷:丙酮：甲醇 = 92.5:7:0.5的體積比等度洗脫，并用薄層色譜法檢測，以β-隱黃素標準品為對照，收集主 要含β-隱黃素標準品和豆留醇的洗脫液；
[0040] 所述薄層色譜的條件為:展開劑為石油醚：乙醚=7:3，顯色劑為10 %硫酸-無水乙 醇，95°C 烘烤 2min。
[0041]步驟五、首先選用正己烷-丙酮對所述洗脫液的濃縮物進行雙溶劑法結晶，其中丙 酮為豆留醇的良溶劑，正己烷為豆留醇的不良溶劑，于25°C條件下結晶出豆留醇晶體，用正 己烷清洗晶體，直至晶體無色；
[0042]再將溶液進行濃縮干燥，最后選用乙醚-甲醇對干燥后的物質進行結晶，其中乙醚 為β-隱黃素晶體的良溶劑，甲醇為β-隱黃素的不良溶劑，于25°C條件下結晶得到β_隱黃素 晶體，并用甲醇清洗晶體，其隱黃素的純度達98.48%。
[0043]結晶產(chǎn)物的鑒定：
[0044] -、白色結晶的紅外光譜分析
[0045] 圖2為豆留醇晶體紅外光譜圖，對圖2進行分析dSOO-SSOOcnf1處寬而強的譜帶是 O-H伸縮振動引起的吸收譜帶，它是脂肪醇的一個重要特征譜帶。2870和2949為甲基的C-H 的伸縮振動峰，1448和1373為亞甲基的C-H變形振動吸收峰。1651處強度較低的弱峰是C = C