miR143及其誘導(dǎo)物L(fēng)TA在制備抑制痤瘡炎癥藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明設(shè)及生命醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域，具體設(shè)及SEQ ID N0.1所示miR143及其誘導(dǎo)物式
[1] 所示LTA在制備抗瘦瘡炎癥的藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 瘦瘡是毛囊皮脂腺部位的一種慢性炎癥性皮膚病，是一種非常常見的皮膚病。瘦 瘡部位炎癥因子TNF-a表達量明顯高于正常皮膚，而且瘦瘡部位通常表現(xiàn)為紅腫。瘦瘡與皮 膚表面的瘦瘡丙酸桿菌(P.acnes)的生長有關(guān)。瘦瘡丙酸桿菌是一種生長緩慢的革蘭氏陽 性厭氧菌，一般寄居在毛囊及脂腺皮膚上，會產(chǎn)生分解皮膚和免疫原性蛋白的酶，可引起皮 膚的持續(xù)慢性炎癥反應(yīng)。青春期階段由于皮脂腺分泌能力明顯增強，皮脂中含有較多脂肪 酸等成分，非常適合瘦瘡丙酸桿菌的生長及繁殖，因而成為瘦瘡的高發(fā)期。
[0003] 葡萄球菌是人體皮膚上最常見的共生菌，它對調(diào)節(jié)皮膚炎癥，維持皮膚的穩(wěn)態(tài)有 著非常重要的作用。脂憐壁酸化TA)是葡萄球菌一個非常重要的成分，是由核糖醇或甘油殘 基經(jīng)由憐酸二脂健相互連接形成的酸性多糖。葡萄球菌的LTA能抑制化R3介導(dǎo)的傷口炎癥 反應(yīng)。而瘦瘡是由瘦瘡丙酸桿菌感染皮膚后引起的持續(xù)炎癥，其炎癥的發(fā)生主要是由瘦瘡 丙酸桿菌通過激活化R2來誘導(dǎo)炎癥因子表達，與皮膚傷口上的炎癥反應(yīng)具有截然不同的誘 導(dǎo)機制。另外，葡萄球菌的LTA是否能抑制瘦瘡丙酸桿菌感染皮膚后激活化R2而引起的持續(xù) 炎癥還未見報道。
[0004] miRNA是一類約為22nt核巧酸的非編碼小RNA，發(fā)揮基因轉(zhuǎn)錄后表達調(diào)控的功能。 miRNA與炎癥調(diào)節(jié)密切相關(guān)。人成纖維細胞的miR146a可負調(diào)節(jié)衰老相關(guān)炎癥因子TNF-a、 比-6與比-8的表達，角質(zhì)形成細胞中的miR146a也可負調(diào)節(jié)化R2依賴性炎癥應(yīng)答。miR143還 通過抑制TLR2的表達抑制了人結(jié)腸癌細胞的遷移和浸潤。在食物誘導(dǎo)的肥胖模型中 miR12化與miR143的表達量下降。但是miRNA是否參與對P.acnes誘導(dǎo)的炎癥因子TNF-a的調(diào) 節(jié)作用還未見報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明首次公開提出了一種miR143,其可由皮膚共生表皮葡萄球菌的脂憐壁酸誘 導(dǎo)角質(zhì)形成細胞產(chǎn)生;所述miR143的核巧酸序列如SEQ ID N0.1所示：
[0006] gcgc曰gcgcc cugucuccc曰 gccug曰ggug c曰gugcugc曰 ucucugguc曰 guuggg曰guc
[0007] ug曰g曰ug曰曰g c曰cugu曰gcu c曰gg曰曰g曰g曰g曰曰guuguuc ugc曰gc;
[000引本發(fā)明提出了如SEQ ID NO. 1所示miR143在制備抑制瘦瘡炎癥的藥物中的應(yīng)用。 [0009]本發(fā)明所述"瘦瘡炎癥"指的是由瘦瘡丙酸桿菌感染后引起的皮膚炎癥。
[0010] 本發(fā)明提出了如SEQ ID N0.1所示miR143在制備抑制P.acnes引起的皮膚炎癥的 藥物中的應(yīng)用，所述miR143能夠減輕瘦瘡的炎癥程度。在具體實施方案中，體外實驗表明， P.acnes可W誘導(dǎo)角質(zhì)形成細胞大量炎癥因子TNF-a和IL-6的表達，而超表達miR143能夠抑 審化.acnes誘導(dǎo)角質(zhì)形成細胞的炎癥因子TNF-a和IL-6的表達。
[0011] 所述miR143可人工合成，或由皮膚共生菌葡萄球菌脂憐壁酸誘導(dǎo)，其中，所述皮膚 共生表皮葡萄球菌的脂憐壁酸結(jié)構(gòu)如式(I)所示：
[0012]
[001引式（I)中，
[0014] m，n為脂肪酸鏈長度，C原子數(shù)一般為C14-C19之間；
[0015] X為多聚化程度，在45-50之間；
[0016] R為甘油殘基類型，葡萄糖類型占15% ;D型丙氨酸占70%;徑基占15%。
[0017]所述miR143通過直接祀向TLR2的3'UTR來抑制TLR2的表達，從而抑制皮膚炎癥反 應(yīng)。
[001引本發(fā)明還提出了如SEQ ID N0.1所示miR143在抑制化R2中的應(yīng)用，所述如SEQ ID NO. 1所示miRl 43通過作用于TLR2的3 ' UTR抑制TLR2蛋白表達可W抑制皮膚炎癥反應(yīng)。
[0019] 本發(fā)明還提出了一種皮膚共生葡萄球菌的脂憐壁酸化TA)在制備誘導(dǎo)SEQ ID NO. 1所示miR143的表達的藥物中的應(yīng)用;所述脂憐壁酸結(jié)構(gòu)如式(I)所示：
[0020]
[0021] 式(1)中，
[0022] m，n為脂肪酸鏈長度，C原子數(shù)一般為C14-C19之間；
[0023] X為多聚化程度，在45-50之間；
[0024] R為甘油殘基類型，葡萄糖類型占15% ;D型丙氨酸占70%;徑基占15%。
[0025] 其中，所述miR143可抑制瘦瘡炎癥；具體地，所述miR143可抑制由P.acnes引起的 皮膚炎癥反應(yīng)，減輕瘦瘡的炎癥程度。在一個具體實施方案中，體外實驗表明P.acnes誘導(dǎo) 角質(zhì)形成細胞大量炎癥因子TNF-α和IL-6的表達，LTA通過誘導(dǎo)如SEQ ID NO.l所示miR143 的表達從而抑制了 P.acnes誘導(dǎo)角質(zhì)形成細胞的炎癥因子TNF-α和IL-6的表達。體內(nèi)實驗表 明LTA明顯抑制了炎癥因子mTNF-a和mIL-6的表達，而在體內(nèi)用antigomir抑制miR143后， LTA就不能抑制P. acnes誘導(dǎo)的皮膚炎癥。
[0026] 本發(fā)明所述"皮膚炎癥"指的是由瘦瘡丙酸桿菌感染后引起的皮膚炎癥。
[0027] 本發(fā)明還提出了如式（I)所示脂憐壁酸化TA)在制備抑制瘦瘡炎癥的藥物中的應(yīng) 用。
[0028] 本發(fā)明還提出了如式（I)所示脂憐壁酸化TA)在制備抑制P.acnes引起的皮膚炎癥 的藥物中的應(yīng)用，所述miR143能夠減輕瘦瘡的炎癥程度。在具體實施方案中，體外實驗表 明，P.acnes可W誘導(dǎo)角質(zhì)形成細胞大量炎癥因子TNF-a和IL-6的表達，而超表達miR143能 夠抑制P.acnes誘導(dǎo)角質(zhì)形成細胞的炎癥因子TNF-a和IL-6的表達。
[0029] 其中，所述皮膚共生菌葡萄球菌的脂憐壁酸可W誘導(dǎo)miR143的表達，進而可W抑 制瘦瘡炎癥。
[0030] 其中，所述miR143通過直接祀向化R2的3'UTR來抑制化R2的表達，從而抑制皮膚炎 癥反應(yīng)。
[0031] 本發(fā)明還提出了皮膚共生菌葡萄球菌LTA在抑制化R2中的應(yīng)用，所述皮膚共生菌 葡萄球菌LTA誘導(dǎo)的如SEQ ID N0.1所示miR143是通過作用于TLR2來抑制皮膚炎癥反應(yīng)。具 體實施方案中，在野生型(Tlr2+/+)和Tlr2基因敲除上同時檢測LTA對P.acnes誘導(dǎo) 的炎癥作用，結(jié)果表明在Tlr2+/+小鼠上，LTA明顯抑制P.acnes誘導(dǎo)的炎癥因子TNF-a和IL-6 的表達;而在鼠上LTA不能起抗炎癥的作用。
[0032] 本發(fā)明SEQ ID N0.1所示miR143抑制P.acnes引起的皮膚炎癥的機制是:miR143通 過直接祀向TLR2的3 ' UTR來抑制TLR2的表達，從而抑制皮膚炎癥反應(yīng)。
[0033] 本發(fā)明提出了一種皮膚炎癥用抑制劑，其含有SEQ ID N0.1所示miR143或/和式 (I)所示誘導(dǎo)物L(fēng)TA。優(yōu)選地，所述皮膚炎癥用抑制劑含有有效量的所述SEQ ID NO. 1所示 miR143或/和式（I)所示誘導(dǎo)物L(fēng)TA，其含量分別為0.01-99.9%。
[0034] 本發(fā)明還提出了一種藥物組合物，其含有SEQ ID N0.1所示miR143。優(yōu)選地，所述 藥物組合物含有有效量的56〇10^.1所示11111?143，其含量為0.01-99.9%。
[0035] 進一步地，所述藥物組合物含有藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑等。所述載體和/或 賦形劑包括但不限于:鹽水、緩沖液、葡萄糖、水、及其組合等。藥物組合物可與給藥方式相 匹配，包括片劑、丸劑、脂質(zhì)體、膠囊劑、溶液、針劑、顆粒、其他固體或液體等，W常規(guī)方法制 備。所述藥物組合物可通過口服、腸胃外、吸入式噴霧或通過植入式膽存器給藥。"腸胃外" 包括皮下、皮內(nèi)、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、動脈內(nèi)、滑膜腔內(nèi)、胸骨內(nèi)、銷內(nèi)、病灶內(nèi)或輸入技 術(shù)?？诜捎霉腆w或液體狀的劑量單位，如末劑、散劑、片劑、糖衣劑、膠囊劑、顆粒劑、懸浮 劑、溶液劑、糖漿劑、滴劑、舌下含片等劑型進行給藥。末劑是將本發(fā)明藥物組合物磨成適當(dāng) 額細度而制成。散劑是將本發(fā)明化合物磨成適當(dāng)?shù)募毝?，然后與同樣細度的藥用載體(如載 體、甘露糖醇之類可食性碳水化合物等)混合制成。根據(jù)需要，也可混入矯味劑、防腐劑、分 散劑、著色劑、香料等物質(zhì)。膠囊劑是將如上所述制成粉末狀的末劑或片劑部分所述的顆粒 化的物質(zhì)填充到明膠膠囊外殼中而制成。也可W將潤滑劑和助流劑等混合到粉末狀物質(zhì) 中，然后在膠囊中進行填充操作。若添加助溶劑和崩解劑等，如聚乙二醇，碳酸鋼，可改善膠 囊攝取時的藥效。
[0036] 進一步地，所述藥物組合物包括但不限于:式（I)所示LTA。
[0037] 本發(fā)明還提出了一種護膚用品，其含有SEQ ID N0.1所示miR143。優(yōu)選地，所述護 膚用品中含有有效量的沈Q ID NO. 1所示miR143,其含量為0.01-99.9%。
[0038] 進一步地，所述護膚用品包括但不限于:式（I)所示LTA、甘油。
[0039] 本發(fā)明的有益效果在于，所述SEQ ID N0.1所示miR143可W抑制炎癥因子TNF-a和 IL-6的表達，減輕瘦瘡的炎癥程度。所述如式（I)所示脂憐壁酸化TA)能夠誘導(dǎo)SEQ ID N0.1 所示miR143的表達，進而抑制炎癥因子TNF-a和IL-6的表達，減輕瘦瘡的炎癥程度。
[0040] 本發(fā)明的所設(shè)及的術(shù)語：
[0041] LTA為脂憐壁酸，指皮膚共生葡萄球菌的脂憐壁酸；
[0042] NC為化gative Control,指陰性對照組；
[0043] PA為P. acnes，指瘦瘡丙酸桿菌處理組；
[0044] An1:a 為 an1:agomi;r，指 miR143 的抑制劑 an1:agomi;r 處理組；
[0045] TLR2為Toll 1 化e receptor 2,指Toll樣受體2;
[0046] 3'UTR為mRNA3'端非翻譯區(qū)
[0047] TNF-a為tumor necrosis factor al地a，即腫瘤壞死因子曰 [004引 IL-6為Interleukin 6,即白細胞介素6
[0049] HEK為人角質(zhì)形成細胞
[00加]real-time RT-PCR為實時巧光定量反轉(zhuǎn)錄PCR [0化1 ] PBS為憐酸鹽緩沖液
【附圖說明】
[0052] 圖1表示miR143抑制P.acnes誘導(dǎo)的皮膚角質(zhì)形成細胞炎癥因子TNF-a和IL-6的表 達。
[0化3] 圖2表示LTA誘導(dǎo)miR143的表達。
[0化4] 圖3表示LTA抑制P.acnes誘導(dǎo)的皮膚角質(zhì)形成細胞炎癥因子TNF-a和IL-6的表達。 [0化日]圖4表示LTA抑制P.acnes誘導(dǎo)的小鼠耳部組織炎癥因子TNF-a和IL-6的表達。
[0化6] 圖5表示miR143直接祀向TLR2的3'UTR來抑制TLR2的表達。
[0057] 圖6表示LTA對Tlr2+/+和Tlr2-/-小鼠上P.acnes誘導(dǎo)的皮膚炎癥因子TNF-a和IL-6 的表達影響。
[0化引圖7表示將體內(nèi)miR143用其antagomir抑制后，LTA不能抑制P.acnes誘導(dǎo)的皮膚炎 癥及其因子TNF-a和IL-6的表達。
【具體實施方式】
[0059]結(jié)合W下具體實施例和附圖，本發(fā)明作進一步詳細