太子參環(huán)肽類提取物及在制備治療copd藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于中醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種太子參環(huán)肽類提取物的制備方法及其 在制備治療coro藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 慢性阻塞性肺病（chronic obstructive pulmonary disease，(Χ)Ρ?)，是以氣道不 完全可逆性氣流受限為特征的疾病，與肺部對(duì)香煙、霧霾等有害氣體或有害顆粒的異常炎 癥反應(yīng)有關(guān)。近年來，coro發(fā)病率和死亡率不斷增加，已躍居為第4位致死原因，成為全球關(guān) 注的健康問題，不少國家將其作為重點(diǎn)防治的慢性疾病項(xiàng)目。
[0003] coro屬于中醫(yī)"喘證"、"肺脹"等范疇，肺氣虛是coro的始動(dòng)因素，并貫穿于整個(gè)病 程。對(duì)氣虛的治療是中醫(yī)對(duì)coro穩(wěn)定期的重要治療策略;肺氣虛的改善可以有效減輕癥狀、 減緩肺功能下降趨勢(shì)，對(duì)于多發(fā)、難治、具有反復(fù)發(fā)作特點(diǎn)的肺系疾病的綜合防治有積極作 用。
[0004] 太子參為石竹科植物孩兒參（Pseudostellaria heterophylla (Miq. )Pax ex Pax et Hoffm.)的塊根，既能益氣，又可養(yǎng)陰，適用于脾肺虧虛氣陰不足者，其以清補(bǔ)潤(rùn)燥 見長(zhǎng)，在中醫(yī)治療慢性呼吸系統(tǒng)疾病中，為治療肺氣虛的核心藥物，使用頻次很高。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種太子參環(huán)肽類提取物的制備方法及其在制備治療 coro藥物中的應(yīng)用，其以太子參為原料分離得到一種具有改善和治療coro作用的環(huán)肽類提 取物。
[0006] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案： 一種太子參環(huán)肽類提取物的制備方法包括以下步驟： 1) 提取:將干燥至恒重的太子參藥材粉碎至20目，以其重量5~20倍的乙酸乙酯為溶劑， 采用索氏提取器提取2次，每次1~3h，過濾，合并濾液，減壓回收溶劑，得干浸膏； 2) 分離:將所得干浸膏按重量比1:5~10加甲醇溶解，經(jīng)高壓制備色譜分離，獲得所述提 取物； 所述高壓制備色譜的條件為:C18制備型液相色譜柱；紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)為205~ 215nm;以乙腈-0.2wt%磷酸水溶液為流動(dòng)相進(jìn)行洗脫，洗脫程序?yàn)椋?~lOOrnin，乙腈的體積 含量由10%遞增至100%;流速2~10 mL/min;自動(dòng)餾分收集器按5~10 mL為一份進(jìn)行收集。
[0007] 所述太子參環(huán)肽類提取物可用于制備治療慢性阻塞性肺病(coro)的藥物。
[0008] 本發(fā)明的顯著優(yōu)點(diǎn)在于:本發(fā)明提供了一種利用高壓制備色譜制備太子參環(huán)肽類 提取物的方法，且經(jīng)藥效學(xué)試驗(yàn)證明，所得提取物可有效降低coro模型大鼠肺氣道阻力，增 加其動(dòng)態(tài)順應(yīng)性，改善咳嗽、氣急等癥狀，有效控制coro病情的發(fā)展，適用于制備治療C0PD 的藥物。
【附圖說明】
[0009] 圖1為實(shí)施例1制備的太子參環(huán)肽類提取物的UPLC圖譜。
【具體實(shí)施方式】
[0010] 為了使本發(fā)明所述的內(nèi)容更加便于理解，下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明所述的 技術(shù)方案做進(jìn)一步的說明，但是本發(fā)明不僅限于此。
[0011] 實(shí)施例1太子參環(huán)肽類提取物的制備 1) 提取:將干燥至恒重的太子參藥材粉碎至20目，以其重量10倍的乙酸乙酯為溶劑，采 用索氏提取器提取2次，每次3h，過濾，合并濾液，減壓回收溶劑，得干浸膏； 2) 分離:將所得干浸膏按重量比1:5加甲醇溶解，經(jīng)高壓制備色譜分離，高壓制備色譜 的條件為:C18制備型液相色譜柱；紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)為205~215nm;以乙腈-0.2wt%磷酸 水溶液為流動(dòng)相進(jìn)行洗脫，洗脫程序?yàn)椋?~l〇〇min，乙腈的體積含量由10%遞增至100%;流速 2~10 mL/min;進(jìn)樣體積50~200 yL;自動(dòng)餾分收集器按5~10 mL為一份進(jìn)行收集，得提取物。
[0012] 實(shí)施例2提取物的鑒定 1.按文獻(xiàn)（"植物環(huán)肽的薄層化學(xué)識(shí)別新方法及其在植物化學(xué)研究中的應(yīng)用"，《科學(xué) 通報(bào)》，2000年，第45卷第10期)報(bào)道的內(nèi)容，采用薄層色譜-化學(xué)的方法對(duì)所得提取物進(jìn)行 鑒定，結(jié)果顯示其主要含環(huán)肽類成分。
[0013]其具體操作為： 取兩塊25 mmX 50 mm的硅膠板G(板1和板2)，將樣品分別點(diǎn)在兩塊板上，用氯仿-甲醇 (8.5:1.5或9:1)展開后揮掉溶劑，板1放置，板2懸于底部加有約1 mL濃鹽酸的密閉磨口玻 璃缸中（耐酸和耐高溫玻璃缸），置于已升溫至ll〇°C的烘箱中，加熱水解1~2 h，冷卻后取出 板2,在通風(fēng)柜中揮掉鹽酸，然后將未經(jīng)水解的板1和加熱酸水解的板2同時(shí)噴灑含0.2%茚三 酮的丙酮試劑，用電吹風(fēng)加熱幾分鐘進(jìn)行顯色。如板2在多數(shù)情況下顯示幾個(gè)紫紅色斑點(diǎn)， 少數(shù)情況下顯示某些黃色斑點(diǎn)，而板1在相應(yīng)位置上無顯色斑點(diǎn)，提示此樣品可能含有環(huán)肽 或肽酰胺。
[0014]取50 mmX50 mm硅膠G板(板3)，按照雙向薄層層析板點(diǎn)樣方法將樣品點(diǎn)在板上， 用氯仿-甲醇(8.5:1.5或9:1)作第一向展開劑展開后揮掉溶劑，先按前述方法用濃鹽酸高 溫水解后冷卻，揮掉鹽酸，然后在溶劑系統(tǒng)A(氯仿-甲醇-冰醋酸，8:2:2滴)或B(氯仿-甲 醇-水-冰醋酸，7: 3:0.5:4滴）中進(jìn)行第二向展開;揮掉溶劑后，噴灑含0.2%茚三酮的丙酮 試劑，用電吹風(fēng)加熱幾分鐘進(jìn)行顯色。如板3在第二向的同一軸上只顯示一個(gè)紅紫色斑點(diǎn)， 表明此植物樣品可能含有肽酰胺，而板3在第二向的同一軸上顯示多個(gè)紫紅色或黃色斑點(diǎn)， 表明此樣品可能含有環(huán)肽成分。
[0015] 2.將所得提取物進(jìn)行液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析。圖1為其超高效液相色譜(UPLC) 圖譜，對(duì)保留時(shí)間在8-18min內(nèi)的色譜峰進(jìn)行質(zhì)譜分析，根據(jù)質(zhì)譜碎片離子特征，與圖譜數(shù) 據(jù)庫和文獻(xiàn)進(jìn)行比對(duì)，鑒定出11種環(huán)肽： 峰1(保留時(shí)間8.63 111丨11)在質(zhì)譜正離子模式下得到了111/2 502.314[]\1+!1] +，111/2 540.293[M+ACN] +，負(fù)離子模式下有m/z 501.369[M-H]-，m/z546.465[M+Formic] -，推斷其為 太子參環(huán)妝Pesudostellarin A，C25H35N5〇6,分子量501 · 575〇
[0016]峰2(保留時(shí)間 10.65 min)在MS中給出了m/z 665.444[M+H] +，m/z 705·438[Μ+ ACN] +，推斷其為太子參環(huán)肽Heterophy 11 in D，C35H48N6〇7，分子量664.792。
[0017] 峰3(保留時(shí)間10.68 111丨11)在質(zhì)譜正離子模式下采集到111/2 683.458[]\1+!1] +，111/2 705.438[M+Na] +，m/z 721.435[M+ACN] +，在負(fù)離子模式下有m/z 681 ·631[Μ-Η] -，m/ z727 · 607 [M+Formic] -，推斷其為太子參環(huán)肽Pesudostel larin B，C33H46N8O8，分子量 682·767〇
[0018] 峰4(保留時(shí)間 10.91 min)在MS中給出了m/z 785.568[M+H] +，m/z 807.563[M+Na ] +，m/z 823.537[M+ACN] +，在負(fù)離子模式下有m/z 781·744[Μ-Η] -，m/z 811·764[Μ+ Formic ]-，推斷其為太子參環(huán)肽Pesudostel larin F，C38H56N8〇iq，分子量784 · 899 〇
[0019] 峰5(保留時(shí)間11.96min)在