甘露糖衍生物陽離子脂質(zhì)體納米顆粒的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一系列甘露糖衍生物陽離子脂質(zhì)體納米顆粒的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 人類基因治療逐漸成為現(xiàn)代醫(yī)學(xué)發(fā)展的主要方向之一?；蛑委煹淖罱K目的是在 一個(gè)合適的系統(tǒng)中高效表達(dá)外源基因。在將外源基因引入細(xì)胞的過程中，DNA會(huì)被體內(nèi)的 核酸酶降解，在未進(jìn)入祀細(xì)胞，甚至未達(dá)到祀器官時(shí)便降解成小分子核巧酸，從而失去治 療作用。為了在體內(nèi)運(yùn)輸過程中更好地保護(hù)治療基因，可W將其與基因載體結(jié)合。因此，基 因載體的開發(fā)對基因治療的發(fā)展就顯得尤為重要了。常用的基因載體有病毒載體和非病 毒載體，病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)效率高、復(fù)雜的裝配過程由細(xì)胞完成、不同病毒載體具有不同表達(dá)特 點(diǎn)，但是由于存在無法控制病毒復(fù)制的風(fēng)險(xiǎn)并具內(nèi)在免疫原性，而使其應(yīng)用受到限制；相比 于病毒載體而言非病毒載體具有毒性低、免疫反應(yīng)低，而且所攜帶的基因不整合至宿主細(xì) 胞基因組等優(yōu)點(diǎn)。而非病毒性載體之一的陽離子脂質(zhì)體作為轉(zhuǎn)染載體，是通過靜電作用與 目的基因相結(jié)合，具有可攜帶的外源基因容量大、構(gòu)成成分是天然磯脂或人工合成的類磯 脂而不含抗原成分、可被機(jī)體降解并能多次反復(fù)轉(zhuǎn)染的特點(diǎn)，適用于多膚、蛋白、DNA和RNA 類藥物，因此成為一種有臨床應(yīng)用潛力的基因轉(zhuǎn)染載體。
[0003] W甘露糖為原料，通過全己醜化、脫1-0-己醜基、Η氯己醜亞胺醋化、糖巧化、疊 氮化、脫全部己醜基、4, 6-0-予叉基保護(hù)、離化、脫叉基保護(hù)、還原氨化和季倭鹽化反應(yīng)，合 成不同疏水鏈長度和不同物理結(jié)構(gòu)的一系列甘露糖衍生物陽離子脂質(zhì)：扣-Ci2-Man-TMA、 i/i-Ci4-Man-TMA、扣-Cie-Man-TMA和扣-Cis-Man-TMA ; W甘露糖為原料，通過全己醜化、脫 1-0-己醜基、Η氯己醜亞胺醋化、糖巧化、疊氮化、脫全部己醜基、還原氨化、叔胺化、和季 倭鹽化反應(yīng)，合成不同疏水鏈長度、和不同物理結(jié)構(gòu)的一系列甘露糖衍生物陽離子脂質(zhì)： Man-DiCizMA、Man-DiCi4MA、Man-DiCieMA和Man-DiCisMA ;利用上述八種甘露糖衍生物陽離子 脂質(zhì)帶正電荷的季倭鹽頭部可通過靜電作用結(jié)合核酸藥物，利用帶長鏈的疏水端可與細(xì)胞 壁麟脂雙分子層結(jié)合的特征，可望通過融合內(nèi)吞作用實(shí)現(xiàn)核酸藥物從胞外到胞內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn)。
[0004] 所制備的甘露糖衍生物陽離子脂質(zhì)體納米顆粒具有結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性好、粒度尺寸適 中、粒徑分布窄、表面電荷適中、制備成本低廉等優(yōu)點(diǎn)，能滿足核酸藥物轉(zhuǎn)運(yùn)載體應(yīng)具備的 基本要求。
[0005] 所制備的甘露糖衍生物陽離子脂質(zhì)體納米顆粒，亦可用于構(gòu)建非核酸藥物緩釋給 藥系統(tǒng)，或用于非核酸藥物的轉(zhuǎn)運(yùn)載體。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種合成成本低、操作容易的一系列甘露糖衍生物陽離子脂 質(zhì)體納米顆粒的制備方法。
[0007] 本發(fā)明提供的送種甘露糖衍生物陽離子脂質(zhì)體納米顆粒的制備方法，包括如下步 驟： (1) W甘露糖為原料，高氯酸為催化劑，己酸酢為反應(yīng)溶劑及醜化試劑，進(jìn)行己醜化反 應(yīng)，經(jīng)柱層析分離純化得到蹤黃色漿狀物1，2, 3, 4, 6-五-0-己醜基-α，目-D-化喃甘露 糖； (2) W 1，4-二氧六環(huán)和甲醇為反應(yīng)混合溶劑，1，2, 3, 4, 6-五-0-己醜基-α，目-D-化 喃甘露糖與氨氣發(fā)生反應(yīng)，選擇性脫1位己醜基，經(jīng)柱層析分離純化得到蹤黃色漿狀物 2, 3, 4, 6-四-0-己醜基-α，目-D-化喃甘露糖； (3) W無水二氯甲焼為溶劑，無水碳酸鐘提供弱堿性環(huán)境，2, 3, 4, 6-四-0-己醜 基-α，目-D-化喃甘露糖與Η氯己臘發(fā)生施密特反應(yīng)，經(jīng)經(jīng)柱層析分離純化得到無色漿狀 物2, 3, 4, 6-四-0-己醜基-α -D-化喃甘露糖Η氯己醜亞胺醋； (4) W二氯甲焼為反應(yīng)溶劑，TMSOTf為催化劑，步驟（3)所得無色漿狀物 2, 3, 4, 6-四-0-己醜基-α -D-化喃甘露糖Η氯己醜亞胺醋與3-氯-1-丙醇發(fā)生糖巧化反 應(yīng)，經(jīng)柱層析分離純化得到無色漿狀物3'-氯丙基2, 3, 4, 6-四-0-己醜基-α -D-化喃甘 露糖巧； 妨WyV，yV-二甲基甲醜胺為反應(yīng)溶劑，3'-氯丙基2,3,4,6-四-0-己醜基-(1-〇-口比 喃甘露糖巧與疊氮化鋼反應(yīng)，經(jīng)柱層析分離純化得到無色漿狀物3'-疊氮基丙基 2, 3, 4, 6-四-0-己醜基-α -D-化喃甘露糖巧； (6) W甲醇為反應(yīng)溶劑，3'-疊氮基丙基2, 3, 4, 6-四-0-己醜基-α -D-化喃甘露糖 巧與氨氣反應(yīng)脫全部己醜基，經(jīng)柱層析分離純化得到無色漿狀物3'-疊氮基丙基α -D-化 喃甘露糖巧； (7) 二甲基甲醜胺為反應(yīng)溶劑，濃硫酸為催化劑，步驟（6)得到的無色漿狀物 3'-疊氮基丙基a-D-化喃甘露糖巧與苯甲醒室溫下反應(yīng)，經(jīng)相應(yīng)的分離純化處理得到無 色漿狀物3'-疊氮基丙基4, 6-0-予叉基-α -D-化喃甘露糖巧； (8) 二甲基甲醜胺為反應(yīng)溶劑，氨化鋼為催化劑，3'-疊氮基丙基4, 6-0-予 叉基-a-D-化喃甘露糖巧與烷基漠反應(yīng)，經(jīng)柱層析分離純化得到3'-疊氮基丙基 2, 3-二-0-二烷基-4, 6-0-予叉基-α -D-化喃甘露糖巧； (9) W甲醇為反應(yīng)溶劑，3'-疊氮基丙基2,3-二-0-正烷基-4, 6-0-予叉基-a-D-化 喃甘露糖巧與Η氣己酸反應(yīng)脫去予叉基，經(jīng)柱層析分離純化得到3'-疊氮基丙基 2, 3-二-0-正烷基-α -D-化喃甘露糖巧； (10) W甲醇為反應(yīng)溶劑，鉛碳為催化劑，3'-疊氮基丙基2, 3-二-0-正焼 基-α -D-化喃甘露糖巧與甲醒和氨氣反應(yīng)得到叔胺，經(jīng)相應(yīng)的分離純化處理得到無色漿 狀液體3' -yV，yV-二甲胺基丙基2, 3-二-0-正烷基-α -D-化喃甘露糖巧； (11) 步驟（10)得到的3' -yV，yV-二甲胺基丙基2, 3-二-0-正烷基-α -D-化喃甘露 糖巧與賄甲焼進(jìn)行季倭鹽化反應(yīng)，經(jīng)相應(yīng)的分離純化處理得淡黃色或白色固體； (12) W四氨巧喃和水為反應(yīng)混合溶劑，用Η苯基麟還原步驟（6)得到的3'-疊氮基丙 基α -D-化喃甘露糖巧的疊氮基為伯胺，經(jīng)相應(yīng)的分離純化處理得灰色漿狀液體3'-氨基 丙基a-D-化喃甘露糖巧； (13) W甲醇和己醇為反應(yīng)混合溶劑，無水碳酸鐘提供堿性環(huán)境，在加熱的條件下，步 驟（12)得到的3'-氨基丙基a-D-化喃甘露糖巧與漠代焼姪反應(yīng)，經(jīng)相應(yīng)的分離純化處 理得蹤黃色漿狀液體3' -0V，二正烷基）丙基a-D-化喃甘露糖巧； (14) W四氨巧喃為反應(yīng)溶劑，步驟（蝴得到的3'-(N，N-二正烷基）丙基α-D-口比 喃甘露糖巧與賄甲焼進(jìn)行季倭鹽化反應(yīng)，經(jīng)相應(yīng)的分離純化處理得蹤黃色或白色粉末狀固 體3' -0V-甲基-W，W -二正烷基賄化倭基）丙基α -D-化喃甘露糖巧； (15) 步驟（11)和步驟（14)得到的固體經(jīng)超聲波振蕩水分散后得到相應(yīng)的甘露糖衍生 物陽離子脂質(zhì)體納米顆粒。
[000引 W甘露糖為原料，W高氯酸為催化劑，己酸酢為反應(yīng)溶劑及醜化試劑，進(jìn)行己醜化 反應(yīng)，經(jīng)柱層析分離純化得蹤黃色漿狀物1，2, 3, 4, 6-五-0-己醜基-α，目-D-化喃甘露 糖。反應(yīng)溫度；l0°C~20乂 ；反應(yīng)時(shí)間；10 h ;反應(yīng)投料比為；甘露糖（mol):己酸?。╩ol): 高氯酸（mol) = 1 : 7.5 : 0.06,柱層析分離洗脫劑為：石油離：己酸己醋=3 : 1(體 積比）。所得產(chǎn)物1，2, 3, 4, 6-五-0-己醜基-α，目-D-化喃甘露糖，W 1，4-二氧六環(huán)和甲 醇為反應(yīng)混合溶劑（1,4-二氧六環(huán)：甲醇=5 : 2,體積比），常溫下通入氨氣反應(yīng)，選擇 性脫1位己醜基，經(jīng)柱層析分離純化得蹤黃色漿狀物2, 3, 4, 6-四-0-己醜基-α，目-D-化 喃甘露糖。反應(yīng)時(shí)間；20 min~60 min ;柱層析分離洗脫劑為：石油離：己酸己醋=2 : 1 (體積比）。所得產(chǎn)物2, 3, 4, 6-四-0-己醜基-α，目-D-化喃甘露糖，W無水二氯甲焼為 反應(yīng)溶劑，無水碳酸鐘提供弱堿性環(huán)境，常溫下與Η氯己臘反應(yīng)，經(jīng)柱層析分離純化得無色 漿狀物2, 3, 4, 6-四-0-己醜基-α -D-化喃甘露糖Η氯己醜亞胺醋。反應(yīng)時(shí)間；6h~化；反 應(yīng)投料比為；2, 3, 4,6-四-0-己醜基-α，目-D-化喃甘露糖（mol) : Η氯己臘（mol):無 水碳酸鐘（mol) = 1 : 2.5 : 1;柱層析分離洗脫劑為：石油離：己酸己醋=3 : 1(體積 比）。所得產(chǎn)物2, 3, 4, 6-四-0-己醜基-α -D-化喃甘露糖Η氯己醜亞胺醋，W無水二氯 甲焼為反應(yīng)溶劑，4Α分子篩為除水劑，W TMSOTf為催化劑，在氮?dú)獾谋Ｗo(hù)下與3-氯-1-丙 醇反應(yīng)，經(jīng)柱層析分離純化得無色漿狀3'-氯丙基2, 3, 4, 6-四-0-己醜基-α -D-化喃 甘露糖巧。反應(yīng)溫度；-20乂至室溫；反應(yīng)時(shí)間；2 h ;反應(yīng)投料比為；2, 3, 4, 6-四-0-己醜 基-a-D-化喃甘露糖立氯己醜亞胺醋（moU : 3-氯丙醇（moU : TMSOTf (moU = 1 : 3 : 0.02;柱層析分離洗脫劑為：石油離：己酸己醋=5 : 1(體積比）。二甲基 甲醜胺為反應(yīng)溶劑，在加熱條件下，所得的3'-氯丙基2, 3, 4, 6-四-0-己醜基-α -D-化 喃甘露糖巧與疊氮化鋼反應(yīng)，經(jīng)柱層析分離純化得3'-疊氮基丙基2, 3, 4, 6-四-0-己 醜基-α -D-化喃甘露糖巧。反應(yīng)溫度；8(TC，反應(yīng)時(shí)間；24 h ;反應(yīng)投料比為；3' -氯丙基 2, 3, 4, 6-四-0-己醜基-α -D-化喃甘露糖巧（moU :疊氮化鋼（moU = 1 : 4 ;柱層析 分離洗脫劑為：石油離：己酸己醋=4 : 1(體積比）。W甲醇為反應(yīng)溶劑，通入氨氣至飽 和條件下，脫除3'-疊氮基丙基2, 3, 4, 6-四-0-己醜基-α -D-化喃甘露糖巧全部的己醜 基，經(jīng)柱層析分離純化得3'-疊氮基丙基a-D-化喃甘露糖巧。反應(yīng)時(shí)間；24 h;柱層析分 離洗脫劑為；己酸己醋：甲醇=1 : 1(體積比）。所得產(chǎn)物3'-疊氮基丙基a-D-化 喃甘露糖巧，W 二甲基甲醜胺為反應(yīng)溶劑，濃硫酸為催化劑，室溫下與苯甲醒反應(yīng)，經(jīng) 柱層析分離純化得3'-疊氮基丙基4, 6-0-予叉基-a-D-化喃甘露糖巧。反應(yīng)時(shí)間；6 h， 柱層析分離洗脫劑為：石油離：己酸己醋=3 : 1(體積比）。所得的產(chǎn)物3'-疊氮基 丙基4, 6-0-予叉基-α -D-化喃甘露糖，二甲基甲醜胺為反應(yīng)溶劑，氨化鋼為催 化劑，常溫下與月桂基漠反應(yīng)，經(jīng)柱層析分離純化得3'-疊氮基丙基2, 3-二-0-正十二 烷基-4, 6-0-予叉基-α -D-化喃甘露糖巧。反應(yīng)時(shí)間；12 h ;反應(yīng)投料比；3' -疊氮基丙 基4, 6-0-予叉基-a-D-化喃甘露糖巧（mol):氨化鋼（mol):月桂基漠（mol) = 1 : 6 : 4;柱層析分離洗脫劑為：石油離：己酸己醋=25 : 1(體積比）。所得產(chǎn)物3'-疊 氮基丙基2, 3-二-0-正十二烷基-4, 6-0-予叉基-α -D-化喃甘露糖巧，W四氨巧喃和 甲醇為反應(yīng)混合溶劑，與Η氣己酸反應(yīng)脫去予叉基，經(jīng)柱層析分離純化得3'-疊氮基丙基 2, 3-二-0-正十二烷基-α -D-化喃甘露糖巧。反應(yīng)溫度謹(jǐn)溫；反應(yīng)時(shí)間；4 h ;反應(yīng)投料 比；3'-疊氮基丙基2,3-二-0-正十二烷基-4, 6-0-予叉基-a-D-化喃甘露糖巧（mol): Η氣己酸（mol) = 1 : 20;柱層析分離洗脫劑為：石油離：己酸己醋=7 : 1(體積比）。 所得產(chǎn)物3'-疊氮基丙基2,3-二-0-正十二烷基-a-D-化喃甘露糖巧，W甲醇為反應(yīng)溶 劑，鉛碳為催化劑，在通入氨氣條件下，與甲醒反應(yīng)，經(jīng)柱層析分離純化得3' -Λ;Λ^-二甲胺 基丙基2,3-二-0-正十二烷基-ct-D-化喃甘露糖巧。反應(yīng)時(shí)間；24 h ;反應(yīng)投料比；3'-疊 氮基丙基2,3-二-0-正十二烷基-a-D-化喃甘露糖巧（mol):甲醒（mol) = 1 : 8， 3'-疊氮基丙基2,3-二-0-正十二烷基-a-D-化喃甘露糖巧（g):鉛碳（g) = 1 : 0.3; 柱層析分離洗脫劑為：己酸己醋：甲醇=3 : 1(體積比）。所得產(chǎn)物3'-Λ;Λ^-二甲胺基 丙基2, 3-二-0-正十二烷基-α -D-化喃甘露糖巧，W四氨巧喃為反應(yīng)溶劑，常溫下與賄甲 焼反應(yīng)，分離純化得甲基賄化倭基）丙基2,3-二-0-正十二烷基-a-D-口比 喃甘露糖巧。反應(yīng)時(shí)間；3 h ;反應(yīng)投料比；3' -yV，yV-二甲胺基丙基2, 3-二-0-正十二焼 基-a-D-化喃甘露糖巧（mol):賄甲焼（mol) = 1 : 4;反應(yīng)混合液經(jīng)濃縮后，用丙麗和 己酸己醋結(jié)晶，再過濾，真空干燥，得淡黃色固體。所得淡黃色固體經(jīng)超聲波振蕩水分散后 得到陽離子脂質(zhì)體3'-0ν，Λ；Λ^-Η甲基賄化倭基）丙基2,3-二-0-正十二烷基-a-D-化 喃甘露糖巧（簡寫為扣-Ci2-Man-TMA)納米顆粒。
[0009] 二甲基甲醜胺為反應(yīng)溶劑，氨化鋼為催化劑，常溫下3'-疊氮基丙基 4, 6-0-予叉基-α -D-化喃甘露糖與肉豆護(hù)基漠反應(yīng)，經(jīng)柱層析分離純化得3'-疊氮基丙基 2, 3-二-0-正十四烷基-4, 6-0-予叉基-α -D-化喃甘露糖巧。反應(yīng)時(shí)間；12 h ;反應(yīng)投料 比；3' -疊氮基丙基4, 6-0-予叉基-α -D-化喃甘露糖巧（moU :氨化鋼（moU :肉豆護(hù) 基漠（mol) = 1 : 6 : 4;柱層析分離洗脫劑為：石油離：己酸己醋=30 : 1(體積比）。 所得產(chǎn)物3'-疊氮基丙基2, 3-二-0-正十四烷基-4, 6-0-予叉基-α -D-化喃甘露糖巧， W四氨巧喃和甲醇為混合溶劑，室溫下與Η氣己酸反應(yīng)脫去予叉基，經(jīng)柱層析分離純化得 3'-疊氮基丙基2,3-二-0-正十四烷基-a-D-化喃甘露糖巧。反應(yīng)溫度；室溫；反應(yīng)時(shí) 間；12 h;反應(yīng)投料比；3'-疊氮基丙基2,3-二-0-正十四烷基-4,6-0-予叉基-〇-〇-口比 喃甘露糖巧（mol) : Η氣己酸（mol) = 1 : 15 ;柱層析分離洗脫劑為；石油離：己酸己 醋=3 : 1 (體積比）。所得產(chǎn)物3'-疊氮基丙基2, 3-二-0-正十四烷基-α -D-化喃 甘露糖巧，W甲醇為反應(yīng)溶劑，鉛碳為催化劑，在通入氨氣條件下，與甲醒反應(yīng)，經(jīng)柱層析分 離純化得3' 二甲胺基丙基2,3-二-0-正十四烷基-a-D-化喃甘露糖巧。反應(yīng) 時(shí)間；24 h;反應(yīng)投料比；3'-疊氮基丙基2,3-二-0-正十四烷基-a-D-化喃甘露糖巧 (mol):甲醒（mol) = 1 : 8, 3'-疊氮基丙基2,3-二-0-正十四烷基-a-D-化喃甘露 糖巧（g):鉛碳（g) = 1 : 0.3;柱層析分離洗脫劑為：己酸己醋：甲醇=3 : 1(體積 比）。所得產(chǎn)物3'-yV，yV-二甲胺基丙基2, 3-二-0-正十四烷基-α -D-化喃甘露糖巧，W四 氨巧喃為反應(yīng)溶劑，常溫下與賄甲焼反應(yīng)，分離純化得3' -〇ν，Λ；Λ^-Η甲基賄化倭基）丙基 2,3-二-0-正十四烷基-α-D-化喃甘露糖巧。反應(yīng)時(shí)間；3h;反應(yīng)投料比；3'-yV，yV-二甲胺 基丙基2,3-二-0-正十四烷基-ct-D-化喃甘露糖巧（mol):賄甲焼（moU = 1 : 4;反應(yīng) 混合液經(jīng)濃縮后，用丙麗和己酸己醋結(jié)晶，再過濾，真空干燥，得白色固體。所得白色固體經(jīng) 超聲波振蕩水分散后得到陽離子脂質(zhì)體甲基賄化倭基）丙基2,3-二-0-正 十四烷基-α -D-化喃甘露糖巧（簡寫為扣-Ci4-Man-TMA)納米顆粒。
[0010] 二甲基甲醜胺為反應(yīng)溶劑，氨化鋼為催化劑，常溫下3'-疊氮基丙基 4, 6-0-予叉基-α -D-化喃甘露糖與錄蠟基漠反應(yīng)，經(jīng)柱層析分離純化得3'-疊氮基丙基 2, 3-二-0-正十六烷基-4, 6-0-予叉基-a-D-化喃甘露糖巧。反應(yīng)時(shí)間；12 h;反應(yīng)投 料比；3'-疊氮基丙基4,6-0-予叉基-(1-〇-化喃甘露糖巧（111〇^:氨化鋼（111〇^:錄蠟 基漠（mol) = 1 : 6 : 4;柱層析分離洗脫劑為：石油離：己酸己醋=40 : 1(體積比）。 所得產(chǎn)物3'-疊氮基丙基2, 3-二-0-正十六烷基-4, 6-0-予叉基-α -D-化喃甘露糖巧， W四氨巧喃和甲醇為混合溶劑，室溫下與Η氣己酸反應(yīng)脫去予叉基，經(jīng)柱層析分離純化得 3'-疊氮基丙基2,3-二-0-正十六烷基-a-D-化喃甘露糖巧。反應(yīng)溫度；室溫；反應(yīng)時(shí) 間；12 h ;反應(yīng)投料比；3'-疊氮基丙基2, 3-二-0-正十六烷基-4, 6-0-予叉基-α -D- 口比 喃甘露糖巧(mol) : Η氣己酸（mol) = 1 : 15;柱層析分離洗脫劑為：石油離：己酸己醋 =4 : 1 (體積比）。所得產(chǎn)物3'-疊氮基丙基2, 3-二-0-正十六烷基-α -D-化喃甘露 糖巧，W甲醇為反應(yīng)溶劑，鉛碳為催化劑，在通入氨氣條件下，與甲醒反應(yīng)，經(jīng)柱層析分離純 化得3'-yV，yV-二甲胺基丙基2,3-二-0-正十六烷基-a-D-化喃甘露糖巧。反應(yīng)時(shí)間；24 h;反應(yīng)投料比；3'-疊氮基丙基2,3-二-0-正十六烷基-ct-D-化喃甘露糖巧（moU :甲 醒（mol) = 1 : 8,3'-疊氮基丙基2,3-二-0-正十六烷基-a-D-化喃甘露糖巧（g):鉛 碳（g) = 1 : 0.3;柱層析分離洗脫劑為：己酸己醋：甲醇=4 : 1(體積比）。所得產(chǎn)物 3' -yV，yV-二甲胺基丙基2, 3-二-0-正十六烷基-α -D-化喃甘露糖巧，W四氨巧喃為反應(yīng) 溶劑，常溫下與賄甲焼反應(yīng)，分離純化得甲基賄化倭基）丙基2,3-二-0-正 十六烷基-a-D-化喃甘露糖巧。反應(yīng)時(shí)間；3 h;反應(yīng)投料比；3'-yV，yV-二甲胺基丙基 2, 3-二-0-正十六烷基-a-D-化喃甘露糖巧（mol):賄甲焼（mol) = 1 : 4;反應(yīng)混合液 經(jīng)濃縮后，用丙麗和己酸己醋結(jié)晶，再過濾，真空干燥，得白色固體。所得白色固體經(jīng)超聲波 振蕩水分散后得到陽離子脂質(zhì)體3' Η甲基賄化倭基）丙基2,3-二-0-正十六 烷基-α -D-化喃甘露糖巧（簡寫為扣-Cie-Man-TMA)納米顆粒。
[0011] 二甲基甲醜胺為反應(yīng)溶劑，氨化鋼為催化劑，常溫下3'-疊氮基丙基 4, 6-0-予叉基-α -D-化喃甘露糖與硬脂基漠反應(yīng)，經(jīng)柱層析分離純化得3'-疊氮基丙基 2, 3-二-0-正十八烷基-4, 6-0-予叉基-a-D-化喃甘露糖巧。反應(yīng)時(shí)間；12 h;反應(yīng)投 料比；3'-疊氮基丙基4,6-0-予叉基-(1-〇-化喃甘露糖巧（111〇^:氨化鋼（111〇^:硬脂 基漠（mol) = 1 : 6 : 4;柱層析分離洗脫劑為：石油離：己酸己醋=40 : 1(體積比）。 所得產(chǎn)物3'-疊氮基丙基2, 3-二-0-正十八烷基-4, 6-0-予叉基-α -D-化喃甘露糖巧， W四氨巧喃和甲醇為混合溶劑，室溫下與Η氣己酸反應(yīng)脫去予叉基，經(jīng)柱層析分離純化得 3'-疊氮基丙基2, 3-二-0-正十八烷基-α -D-化喃甘露糖巧。反應(yīng)溫度；室溫；反應(yīng)時(shí) 間；12 h ;反應(yīng)投料比；3'-疊氮基丙基2, 3-二-0-正十八烷基-4, 6-0-予叉基-α -D- 口比 喃甘露糖巧（mol) : Η氣己酸（mol) = 1 : 20 ;柱層析分離洗脫劑為；石油離：己酸己 醋=2 : 1(體積比）。所得產(chǎn)物3'-疊氮基丙基2,3-二-0-正十八烷基-a-D-化喃 甘露糖巧，W甲醇為反應(yīng)溶劑，鉛碳為催化劑，在通入氨氣條件下，與甲醒反應(yīng)，經(jīng)柱層析分 離純化得3' 二甲胺基丙基2,3-二-0-正十八烷基-a-D-化喃甘露糖巧。反應(yīng) 時(shí)間；24 h;反應(yīng)投料比；3'-疊氮基丙基2,3-二-0-正十八烷基-α-D-化喃甘露糖巧 (mol):甲醒（mol) = 1 : 8, 3'-疊氮基丙基2, 3-二-0-正十八烷基-α -D-化喃甘露 糖巧（g):鉛碳（g) = 1 : 0. 3 ;柱層析分離洗脫劑為：己酸己醋：甲醇=4 : 1 (體積 比）。所得產(chǎn)物3' -yV，yV-二甲胺基丙基2, 3-二-0-正十八烷基-α -D-化喃甘露糖巧，W四 氨巧喃為反應(yīng)溶劑，常溫下與賄甲焼反應(yīng)，分離純化得3' -〇ν，Λ；Λ^-Η甲基賄化倭基）丙基 2, 3-二-0-正十八烷基-α -D-化喃甘露糖巧。反應(yīng)時(shí)間；3 h ;反應(yīng)投料比；3'-yV，yV-二甲 胺基丙基2,3-二-0-正十八烷基-a-D-化喃甘露糖巧（mol):賄甲焼（mol) = 1 : 4; 反應(yīng)混合液經(jīng)濃縮后，用丙麗結(jié)晶，再過濾，真空干燥，得灰色固體。所得灰色固體經(jīng)超聲波 振蕩水分散后得到陽離子脂質(zhì)體3' Η甲基賄化倭基）丙基2,3-二-0-正十八 烷基-α -D-化喃甘露糖巧（簡寫為扣-Cis-Man-TMA)納米顆粒。
[0012] W四氨巧喃和水為反應(yīng)混合溶劑，用Η苯基麟還原3'-疊氮基丙基a-D-化喃 甘露糖巧的疊氮基為氨基，分離純化得到3'-氨基丙基α-D-化喃甘露糖巧。反應(yīng)溫度： 75乂；反應(yīng)時(shí)間；3h;反應(yīng)投料比；3'-疊氮基丙基a-D-化喃甘露糖巧（mol) : Η苯基麟 (mol) = 1 : 2;純化；加水除去雜質(zhì)。所得產(chǎn)物3'-氨基丙基a-D-化喃甘露糖巧，W甲 醇和己醇為反應(yīng)混合溶劑，無水碳酸鐘為縛酸劑，在