1:0.4vvm，罐壓0.04Mpa，培養(yǎng)溫度 26-28°C，培養(yǎng)7天左右即可得到種子液。將培養(yǎng)好種子液接種到滅菌后50L發(fā)酵培養(yǎng)基，接 種量15%，發(fā)酵培養(yǎng)基組成為葡萄糖2.5%、蛋白腺0.6%、黃豆餅粉1.5%、憐酸二氨鐘 0.3%、屯水硫酸儀0.3%、豆油0.03%;調(diào)節(jié)抑值6.5;通風(fēng)比為1:0.3別111，罐壓0.04]\19日，在 27°C下發(fā)酵培養(yǎng)6天后，放出20L的發(fā)酵液，補(bǔ)入20L滅菌后的發(fā)酵培養(yǎng)基，繼續(xù)發(fā)酵2天;如 此不斷放料、補(bǔ)料，反復(fù)3次，發(fā)酵結(jié)束可得發(fā)酵液11化，發(fā)酵周期為12天。
[0030] 2)微濾過(guò)濾:分別將四次發(fā)酵后的灰樹(shù)花發(fā)酵液20U20U20L和5f5L通過(guò)微濾過(guò) 濾，分別得到灰樹(shù)花濕菌絲體1.30kg、1.2化g、1.22kg、3.5化g(含水量80 %左右），微濾透析 液18.7Kg、18.74Kg、18.78Kg和51.44Kg，透析液的透光率為80-85%，C0D為35-55mg/L。微濾 過(guò)濾所用的膜材料是孔徑為50nm的陶瓷膜，具體工藝條件是:操作溫度為50~6(TC，進(jìn)壓為 3. Obar，出壓為1. Obar，壓力差為2. Obar。
[0031] 3)低溫干燥:將步驟2得到的1.30kg、1.2化g、1.22kg、3.5化g灰樹(shù)花濕菌絲體進(jìn)入 真空烘箱進(jìn)行烘干，得到0.26化g、0.260kg、0.25化g和0.728kg水分含量3.4%左右的灰樹(shù) 花菌絲體，該菌絲體多糖含量3-5%。依據(jù)Q/JSFF 0013S-2013標(biāo)準(zhǔn)方法檢驗(yàn)。具體干燥工藝 條件是:干燥溫度65°C，真空度為-0.085Mpa。
[0032] 傳統(tǒng)生產(chǎn)工藝與本發(fā)明工藝產(chǎn)品產(chǎn)量、質(zhì)量對(duì)比表
[0033]
[0035] 從上述表格可W看出采用傳統(tǒng)工藝14天發(fā)酵2個(gè)批次，可獲得菌絲體1.418kg;而 采用本發(fā)明工藝總發(fā)酵周期為12天，可獲得4個(gè)批次的菌絲體1.508kg，發(fā)酵周期為傳統(tǒng)的 86%，而獲得菌絲體產(chǎn)量是傳統(tǒng)的110.6%，并且菌絲體產(chǎn)品質(zhì)量要高于傳統(tǒng)工藝生產(chǎn)。因 此采用本發(fā)明工藝既可縮短發(fā)酵周期，提高產(chǎn)量和質(zhì)量，降低生產(chǎn)成本。
[0036] 實(shí)施例2
[0037] 1)灰樹(shù)花菌株(Grifola frondosa)由中國(guó)科學(xué)院微生物研究所提供并鑒定，保藏 編號(hào)CGMCC NO.4179。將培養(yǎng)好的灰樹(shù)花菌株種子液種到種子培養(yǎng)基，接種量是10%，種子 培養(yǎng)基組成為葡萄糖1.7 %、蛋白腺0.5 %、黃豆餅粉1.7 %、憐酸二氨鐘0.3 %、屯水硫酸儀 0.2%、豆油0.02%;調(diào)節(jié)9巧直6.0。培養(yǎng)條件為:通風(fēng)比為1:0.5界111，罐壓0.0319日，培養(yǎng)溫度 26-28 °C，培養(yǎng)7天左右即可得到種子液。將培養(yǎng)好種子液接種到滅菌后10化發(fā)酵培養(yǎng)基，接 種量15%，發(fā)酵培養(yǎng)基組成為葡萄糖2 %、蛋白腺0.4%、黃豆餅粉1.9%、憐酸二氨鐘0.3 %、 屯水硫酸儀0.3%、豆油0.03% ;調(diào)節(jié)抑值6.5;通風(fēng)比為1:0.4vvm，罐壓0.04Mpa，在27°C下 發(fā)酵培養(yǎng)6天后，放出40L的發(fā)酵液，補(bǔ)入40L滅菌后的發(fā)酵培養(yǎng)基，繼續(xù)發(fā)酵2天;如此不斷 放料、補(bǔ)料，反復(fù)3次，發(fā)酵結(jié)束可得發(fā)酵液11化，發(fā)酵周期為12天。
[0038] 2)微濾過(guò)濾：分別將四次發(fā)酵后的灰樹(shù)花發(fā)酵液40U40U40L和11化通過(guò)微濾過(guò) 濾，分別得到灰樹(shù)花濕菌絲體2.261^、2.181^、2.141^、6.301^(含水量77%左右），微濾透析 液37.74Kg、37.82Kg、37.8服g和 105.7Kg，透析液的透光率為83-87 %，COD為25-50mg/L。微 濾過(guò)濾所用的膜材料是孔徑為50nm的陶瓷膜，具體工藝條件是:操作溫度為50~60°C，進(jìn)壓 為S.Obar，出壓為1 .Obar，壓力差為S.Obar。
[0039] 3)低溫干燥:將步驟2得到的2.26kg、2.18kg、2.14kg、6.30kg灰樹(shù)花濕菌絲體進(jìn)入 真空烘箱進(jìn)行烘干，得到0.53化g、0.0.532kg、0.526kg和1.49化g水分含量3.3%左右的灰 樹(shù)花菌絲體，該菌絲體多糖含量2.8-5%。依據(jù)Q/JSFF0013S-2013標(biāo)準(zhǔn)方法檢驗(yàn)。具體干燥 工藝條件是:干燥溫度67°C，真空度為-0.085Mpa。
[0040] 傳統(tǒng)生產(chǎn)工藝與本發(fā)明工藝產(chǎn)品產(chǎn)量、質(zhì)量對(duì)比表
[0041]
[0043]從上述表格可W看出采用傳統(tǒng)工藝14天發(fā)酵2個(gè)批次，可獲得菌絲體2.704kg;而 采用本發(fā)明工藝總發(fā)酵周期為12天，可獲得4個(gè)批次的菌絲體3.09kg，發(fā)酵周期為傳統(tǒng)的 86%，而獲得菌絲體產(chǎn)量是傳統(tǒng)的114.3%，并且菌絲體產(chǎn)品質(zhì)量要高于傳統(tǒng)工藝生產(chǎn)。因 此采用本發(fā)明工藝既可縮短發(fā)酵周期，提高產(chǎn)量和質(zhì)量，降低生產(chǎn)成本。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種快速深層液態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)灰樹(shù)花菌粉的方法，其特征是該方法包括下述步驟： 1) 灰樹(shù)花半連續(xù)發(fā)酵液制備:將灰樹(shù)花種子液接種到滅菌后的發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行深層液 態(tài)發(fā)酵得到灰樹(shù)花發(fā)酵培養(yǎng)液，接種量為體積含量10~20%，通風(fēng)比為11_1 .Ovvm，罐壓 0.02~0.05Mpa，在25~30°C下發(fā)酵培養(yǎng)4-8天后，放出培養(yǎng)器容積的10-50%的發(fā)酵液，補(bǔ) 入等同體積的滅菌后的發(fā)酵培養(yǎng)基，繼續(xù)發(fā)酵1-3天;如此不斷放料、補(bǔ)料，每次補(bǔ)料繼續(xù)發(fā) 酵1-3天，反復(fù)多次，得到灰樹(shù)花發(fā)酵液； 2) 灰樹(shù)花發(fā)酵液陶瓷膜過(guò)濾:將步驟1)中所得的灰樹(shù)花發(fā)酵液通過(guò)微濾膜得到發(fā)酵液 的微濾透析液和菌絲體，收集菌絲體； 3) 低溫真空烘干:將步驟2)中所得的菌絲體在真空度為-0.065~-0.095Mpa，70~85°C 條件下進(jìn)行干燥。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速深層液態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)灰樹(shù)花菌粉的方法，其特征是灰樹(shù)花 種子液是通過(guò)以下方法制備得到的：灰樹(shù)花種子培養(yǎng)基組成為葡萄糖1-3%、蛋白胨0.2- 0.8%、黃豆餅粉0.5-2%、磷酸二氫鉀0.1-0.5%、七水硫酸鎂0.1-0.5%、豆油0.01-0·05% ;調(diào)節(jié)pH值5 ·0-7·0;培養(yǎng)條件為:通風(fēng)比為1:0 · 1-1 ·Ovvm，罐壓0·02~0·05Mpa，培養(yǎng) 溫度25~30°C，培養(yǎng)周期4-9天。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的快速深層液態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)灰樹(shù)花菌粉的方法，其特征是灰樹(shù)花 種子液是通過(guò)以下方法制備得到的：灰樹(shù)花種子培養(yǎng)基組成為葡萄糖1.7-2%、蛋白胨 0.5 %、黃豆餅粉1.4-1.7 %、磷酸二氫鉀0.3-0.4 %、七水硫酸鎂0.1-0.2 %、豆油0.02_ 0.03 % ;調(diào)節(jié)pH值6.0-6.5;培養(yǎng)條件為:通風(fēng)比為1:0.4-0.5vvm，罐壓0.04Mpa，培養(yǎng)溫度 26-28°C，培養(yǎng)周期6-7天。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速深層液態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)灰樹(shù)花菌粉的方法，其特征是灰樹(shù)花 發(fā)酵培養(yǎng)基組成為葡萄糖1-3 %、蛋白胨0.1-1 %、黃豆餅粉0.5-2 %、磷酸二氫鉀0 . ΙΟ. 5%、七水硫酸鎂 0.1-0.5%、豆油 0.01-0.05%; 調(diào)節(jié) pH 值 5.0-7.0。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速深層液態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)灰樹(shù)花菌粉的方法，其特征是該方法 所述的微濾膜為陶瓷膜或有機(jī)膜，其孔徑在〇.05~0.5μπι，操作溫度為50~60°C，工作壓力： 進(jìn)壓為2~4bar，出壓為0~5bar。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的快速深層液態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)灰樹(shù)花菌粉的方法，其特征是該方法 所述的微濾膜為陶瓷膜或有機(jī)膜，其孔徑在50nm，操作溫度為50~60°C，工作壓力：進(jìn)壓為 3bar，出壓為lbar。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種快速深層液態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)灰樹(shù)花菌粉的方法，該方法是將灰樹(shù)花菌種采用半連續(xù)發(fā)酵工藝快速獲取富含大量的菌絲體的發(fā)酵液，然后將發(fā)酵液通過(guò)微濾膜處理分離得到灰樹(shù)花的菌絲體。本發(fā)明改變了傳統(tǒng)灰樹(shù)花間歇性的分批發(fā)酵工藝，并且菌絲體的分離采用高效的陶瓷膜微濾替代離心機(jī)分離方式。半連續(xù)發(fā)酵工藝克服了傳統(tǒng)分批發(fā)酵工藝的工藝環(huán)節(jié)多，中間間隙時(shí)間長(zhǎng)，設(shè)備效率低等缺點(diǎn)；而采用高效的陶瓷膜過(guò)濾發(fā)酵液，能夠減少進(jìn)入濾液的菌絲體，既能提高菌絲體的收率，降低濾液的COD，降低污水處理量，又不破壞細(xì)胞本身，保證胞內(nèi)有效成分的全部回收。與傳統(tǒng)的工藝相比，本發(fā)明具有顯著的經(jīng)濟(jì)效益、社會(huì)效益和環(huán)保效益。
【IPC分類(lèi)】C12R1/645, C12N1/02, C12N1/14
【公開(kāi)號(hào)】CN105586276
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201610148235
【發(fā)明人】王文風(fēng), 徐國(guó)華, 徐玲, 楊亞威, 張芙蓉, 孫妮娜
【申請(qǐng)人】江蘇神華藥業(yè)有限公司
【公開(kāi)日】2016年5月18日
【申請(qǐng)日】2016年3月15日