幽門螺桿菌分離培養(yǎng)的樣本組織的專用保存、運輸培養(yǎng)基的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及攜帶有微生物的樣本的保存運送技術(shù)，特別涉及到一種攜帶有幽門螺 桿菌的樣本組織的保存、運輸培養(yǎng)基。 (二）
【背景技術(shù)】
[0002] 幽門螺桿菌（Helicobacter pylori，HP)是慢性活動性胃炎、消化性潰瘍、胃黏膜 相關(guān)淋巴組織（MALT)淋巴瘤和胃癌等疾病的主要致病因素。1994年世界衛(wèi)生組織/國際癌 癥研究機構(gòu)（WH0/IARC)將幽門螺桿菌定為I類致癌原，是目前唯一被列為致癌因子的原核 生物性病原微生物。由于其為微需氧菌，環(huán)境氧要求為5~8%，在大氣或絕對厭氧環(huán)境下 不能生存，生長營養(yǎng)條件較高，而普通培養(yǎng)基在保存或運輸攜帶有幽門螺桿菌的樣品過程 中會造成大量幽門螺桿菌的死亡，給臨床檢驗及相關(guān)疾病的研究帶來了極大不便。因此，對 攜帶有幽門螺桿菌的樣本進行正確保存、運送成為了該微生物分離培養(yǎng)成功與否的關(guān)鍵。
[0003] 目前市場上尚未有單獨針對攜帶有幽門螺桿菌的樣本的保存、運送培養(yǎng)基，而常 用的保存運送培養(yǎng)基可保存運送的菌種種類廣泛，且這類培養(yǎng)基在形態(tài)上多為固體或半 固體瓊脂培養(yǎng)基，雖能在一定程度上保存樣本中微生物的活性，但依然存在易破碎、粘附性 高、樣本中幽門螺桿菌存活率極低等缺點。導致樣品保存不完整，最終影響檢驗結(jié)果。
[0004] 本發(fā)明不僅成功模擬了相似于感染人體體液的環(huán)境（pH值在7. 35~7. 45之間）， 更有效抑制了其它微生物的污染，使得攜帶有幽門螺桿菌的樣本組織保存于這種保存、運 送培養(yǎng)基中，既能使組織保持活性，又能使存在于該組織內(nèi)的幽門螺桿菌維持在較高存活 和繁殖的水平，明顯提高了檢驗的效率和準確性。 (三）

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明為了彌補針對幽門螺桿菌的樣本組織的保存、運輸?shù)目瞻住Ｌ峁┝?一種方 法簡便，且對幽門螺桿菌檢存活率較高的保存、運送攜帶有幽門螺桿菌的樣本的培養(yǎng)基。并 對該培養(yǎng)基進行了科學系統(tǒng)的生物學性能鑒定。
[0006] 本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)的：
[0007] -種幽門螺桿菌分離培養(yǎng)的樣本組織專用保存、運送培養(yǎng)基。其特征為，由以下重 量份數(shù)的原料配制而成：Na 2HP04. 12H20(分析純）27~32份、NaH2P04. H20(分析純）2~4 份、蛋白胨8~12份、胰蛋白胨8~12份、葡萄糖0. 5~1. 5份、氯化鈉6~8份、亞硫酸鈉 0. 05~0. 15份、其余為去離子水，共計1000份，無水碳酸氫鈉適量調(diào)節(jié)PH至7. 4~7. 6， 高溫高壓后加入萬古霉素10%。份、兩性霉素5%。份。
[0008] 其優(yōu)選的各原料的重量配比為：
[0009] Na2HP04. 12H20 (AR)(分析純）29. 04g、NaH2P04. H20 (分析純）2. 62g、蛋白胨 10g、胰 蛋白胨l〇g、葡萄糖lg、氯化鈉7g、亞硫酸鈉〇. lg、其余為去離子水，共計1000ml，無水碳酸 氫鈉適量調(diào)節(jié)PH至7. 4~7. 6,高溫高壓后加入萬古霉素10mg、兩性霉素5mg。
[0010] 本發(fā)明原料中的蛋白胨、胰胨、葡萄糖等物質(zhì)可給樣本組織提供保持活性的必需 營養(yǎng)物質(zhì)，其中氯化鈉的含量為0. 7%，為幽門螺桿菌存活的最佳滲透壓濃度，重亞硫酸鈉 的水溶液還原性較強，可使幽門螺桿菌的局部環(huán)境為微需氧，有利于幽門螺桿菌生長繁殖。 使用兩種抗生素的目的為抑制和殺滅在采集樣本過程中受到的其它微生物的污染，保證和 提高樣品中幽門螺桿菌的存活率。
[0011] 所述培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基，配制原料中的各種物質(zhì)發(fā)揮各自的作用，達到既保存 樣本組織自身的活性，又能使幽門螺桿菌在脫離機體后的組織中還能達到較好的存活。 (四）【具體實施方式】
[0012] 實施例1
[0013] 制備方法：
[0014] 1、原材料干燥：
[0015] 將Na2HP04. 12H20 (分析純）、NaH2P04. H20 (分析純）、葡萄糖、氯化鈉、亞硫酸鈉和無 水碳酸氫鈉分別置于不銹鋼盤中，放入80°C的烘箱中，烘烤至恒重。
[0016] 2、稱量：
[0017] Na2HP042306g、NaH2P04456g、蛋白胨 2000g、胰蛋白胨 2000g、葡萄糖 200g、氯化鈉 1400g、亞硫酸鈉20g、無水碳酸氫鈉約160g。
[0018] 3、球磨：
[0019] 將上述原材料裝入球磨桶內(nèi)球磨6小時，轉(zhuǎn)速控制在每分鐘100轉(zhuǎn)。若溫度較高， 需注意對球磨桶降溫。
[0020] 4、分裝：
[0021] 將干燥培養(yǎng)基裝在干燥、清潔的塑料瓶內(nèi)，密封。
[0022] 使用方法：
[0023] 1、稱取攜帶有幽門螺桿菌的樣本組織的專用保存、運送培養(yǎng)基粉末18. 64g，置于 三角燒瓶中，加400ml升蒸餾水，充分溶解。
[0024] 2、置于壓力蒸汽滅菌鍋中，121°C滅菌20分鐘。取出冷卻。
[0025] 3、加入萬古霉素4mg和兩性霉素2mg。充分混勻。
[0026] 4、分裝于無菌樣品運送管中，每支lml。冷藏保存。
[0027] 實施例2
[0028] 質(zhì)量鑒定：
[0029] 1、物理性能鑒定：
[0030] (1)感官性狀：幽門螺桿菌分離培養(yǎng)的樣本組織的專用保存、運送培養(yǎng)基干粉呈 淡黃色粉未，無潮解結(jié)塊。
[0031] (2)ρΗ:7·4~7·6。
[0032] (3)水份含量：應(yīng)低于7 %。
[0033] (4)澄清：所制備的保存、運送液呈淡黃色、透明、澄清液體，且無顆粒沉淀。
[0034] 2、生物學性能鑒定（分值鑒定法）：
[0035] (1)材料
[0036] Α指示菌：
[0037] 金黃色葡萄球菌（ATCC 25922)
[0038] 大腸埃希菌（ATCC 25923)
[0039] 枯草桿菌黑色變種芽胞（ATCC 9372)
[0040] 銅綠假單胞菌（ATCC 27853)
[0041] B培養(yǎng)基：
[0042] a所述幽門螺桿菌分離培養(yǎng)的樣本組織的專用保存、運送培養(yǎng)基。
[0043] b對照培養(yǎng)基（保密）
[0044] C 器材：
[0045] 15X 15中試管（滅菌）；lmL移液管（滅菌）；5mL移液管（滅菌）；L棒；燒杯；平 皿（滅菌）；95%乙醇；混勻器；游標卡尺；接種環(huán)；酒精燈；三角燒杯（250mL)
[0046] (2)操作方法：
[0047] A培養(yǎng)基配制：
[0048] 稱取干燥幽門螺桿菌分離培養(yǎng)的樣本組織的專用保存、運送培養(yǎng)基粉末18. 64g， 置于三角燒瓶中，加4. 8g純化瓊脂粉，加400ml升蒸餾水，充分溶解。經(jīng)121°C 20min，冷卻 至45~50°C，傾注平皿，每只平皿20mL